蛋白质组学研究中的对角线电泳

经典的蛋白质组学研究方法包括IEF/SDS-PAGE双向电泳和质谱技术的联用,但由于IEF的一些不足,限制了其应用范围。对角线电泳是蛋白质组学研究中的一项特殊分离技术,由于其原理与IEF/SDS-PAGE不同,正逐渐成为蛋白质组学中电泳分离技术的重要补充,特别是在膜蛋白和蛋白质相互关系的研究中将起到重要作用。本文综述了对角线双向电泳技术的特点、发展和在蛋白质组学研究中的最新进展,比较了双向电泳和对角线电泳的优缺点,展望了对角线电泳在蛋白质组学研究中的应用前景。     

植物组织中蛋白质及同功酶的聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳是鉴定蛋白质、酶的有力工具,是生物化学研究上不可缺少的实验技术。聚丙烯酰胺凝胶是一种合成的凝胶,是由丙烯酰胺单体和交联剂甲义丙烯酰胺在催化剂的作用下聚合而成的大分子。不同的甲义丙烯酰胺在和丙烯酰胺浓度可制成孔径不同大小的电泳基质。电泳时蛋白质混     

聚丙烯酰胺凝胶电泳

电泳是分离混合物中离子成分的最有效方法之一。以聚丙烯酰胺凝胶作支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳。这种电泳方法分辨率高,灵敏度大,重复性强,并且操作简便,因此广泛应用于分子生物学,生物化学,细胞学,免疫学,酶学等学科的研究,近年来在微生物分类上的应用也逐渐引起人们的注意。例如1968年     

直立平板式连续浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶具有化学稳定性,透明度高,聚合体孔径可控制等性质,以及不存在非特异吸附和电渗作用等,因此聚丙烯酰胺凝胶电泳在分子生物学、生物化学、临床化学等学科的分析或分离方法中愈来愈占有重要地位。自Ornstein及Davis首先介绍了聚丙烯酰胺电泳法以来,无论在理论的深度和应用的广度上都有较大的发展,国内外均有专著。本文仅讨论直立平板式连续浓度梯度电泳,它的主要优点是分辨率高,同时由于在同一块凝胶板上可进行几个样品的电泳更便于比较和辨认,并可为进行双相电泳、分子量测定或制备电泳提供基础。     

一种提高固定pH梯度（IPG）凝胶双向电泳的重复性、分辨率和通量的方法

在蛋白质组学研究中 ,双向聚丙烯酰胺凝胶电泳是现行蛋白质分离的最重要的方法之一。实验发展了一种提高固定pH梯度 (IPG)凝胶双向电泳的重复性、分辨率和通量的方法 :在一块SDS 聚丙烯酰胺凝胶上同时进行多块固定pH梯度(IPG)凝胶 (Multi stripsononeSDSgel,MSOG)电泳。用此方法比较了人肝癌细胞、不同生长状态的人肝癌细胞、3T3细胞的蛋白质以及同一个样品在不同大小的第二向凝胶系统 (大型和中型凝胶 )的双向电泳图谱。结果表明 ,同一样品在 13cmIPGStrip双向电泳可分离 2 0 0 0以上蛋白质点且图谱蛋白质点的匹配率可超过 95 %以上。同时又可以最大程度地降低凝胶背景对蛋白质点比较分析的干扰 ,从而提高了双向电泳分离蛋白质的分辨率和通量。这些优点都有助于差异蛋白质组学特别是细胞器差异蛋白质组学研究的自动化。     

电泳用水平聚丙烯酰胺干胶研制成功

聚丙烯酰胺凝胶电泳是快速低廉的生化分析技术。由于凝胶具有三维网状结构,电泳时兼具有分子筛效应和电荷效应,从而比其他电泳的分辨力大为提高,并在此基础上又发展了ＳＤＳ聚丙烯酰胺电泳、梯度胶电泳和等电聚焦聚丙烯酰胺电泳等技术。除大量用于各种蛋白质分析、分型...     

山黧豆叶片蛋白质双向电泳技术的建立

以山黧豆叶片为材料,比较分析了蛋白质的不同提取方法,在此基础上着重于样品制备。对IPG胶条的选择,第一向等电聚焦和第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的电泳程序及参数、染色方法等相关技术进行了比较和条件优化。结果显示：采用TCA-丙酮沉淀法提取蛋白质,裂解液中加入Tris-base作为蛋白酶抑制剂,等电聚焦电泳时延长低电压的电泳时间（30V、12h,500V、1h,1000V、2h）以促进盐离子泳出的方法对山黧豆叶片蛋白质进行双向电泳,并用考马斯亮蓝和银染复合染色法进行凝胶染色,能够获得蛋白点清晰的双向电泳图谱,说明用优化后的方法建立起的山黧豆叶片蛋白质双向电泳技术,蛋白质样品制备质量好,电泳分辨率高,完全适合于进一步的蛋白质组学研究。     

防止SDS-聚丙烯酰胺凝胶平板电泳中出现的异常现象

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳灵敏度高,分辨率高,广泛应用于医学,生物化学,分子生物学,免疫,遗传工程等方面。它要求有严谨的操作技术,在电泳过程中如某个环节掌握得不好,就很难得到理想的结果。下面介绍几年来我们在进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时常出现的一些异常现象以及预防的措施。 1、样品处理时,通常是用Tris-HCl pH6.8的缓冲液,要使样品均一的进入分离胶,必须确保缓冲液有精     

一种改良的植物蛋白质双向电泳方法

O'Farrell等介绍的蛋白质双向电泳技术,将两个独立的参数(等电点和分子量)结合起来,使蛋白质的电泳分辨率有了极大提高,特别是对复杂系统中的蛋白质分析,提供了一种有效手段。但是这种电泳系统一般只适用于动物和微生物,植物组织中由于含     

拟南芥蛋白质组研究中双向电泳技术条件的优化

双向电泳技术是蛋白质组学研究中的关键技术,是目前分辨率最高的工具之一.而提高双向电泳图蛋白质点的数目和分辨率,可以提高蛋白质组技术平台的信息完整性.通过对拟南芥双向电泳技术过程中的适当改进,如蛋白质的提取与溶解方法、上样量和聚丙烯酰胺凝胶浓度,加入硫脲,硫代硫酸钠等,对拟南芥双向电泳技术进行了优化,提高了双向电泳图谱的蛋白质点数目与分辨率.     

中枢神经蛋白质组分析中双向电泳技术的建立

建立和优化了中枢神经组织蛋白质组分析所需的双向电泳及相关技术.由于中枢神经组织结构的特殊性,样品处理非常困难.对样品液组成、样品处理、上样方式、上样量、IPG胶条和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法和保存等相关技术进行了比较研究和条件优化后,以固相pH梯度等电聚焦为第一向和SDS均一胶（T=12.5%）的水平电泳为第二向,成功地得到了神经组织双向电泳图谱.     

防止SDS-聚丙烯酰胺凝胶平板电泳中出现的异常现象

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳灵敏度高,分辨率高,广泛应用于医学,生物化学,分子生物学,免疫,遗传工程等方面.它要求有严谨的操作技术,在电泳过程中如某个环节掌握得不好,就很难得到理想的结果.下面介绍几年来我们在进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时常出现的一些异常现象以及预防的措施. 1.样品处理时,通常是用Ttis-HCI pH6.8的缓冲液,要使样品均一的进入分离胶,必须确保缓冲液有精     

中国武汉地区葎草花粉变应原蛋白质组分的双向电泳分析

应用蛋白质双向电泳的分析技术对武汉地区生长的主要过敏原———葎草(Humulus scandensLour.)花粉的蛋白质组分进行了分析。应用三氯乙酸法提取葎草花粉总蛋白质,通过等电聚焦和第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得了完整的葎草花粉全蛋白质图谱。应用专业分析软件(Im ageM aster 2D)对电泳图谱分析表明:通过等电聚焦和第二向SDS-PAGE电泳,有122个不同的蛋白质组分被检测出来,并进一步确定每个蛋白质相应的分子量、等电点和相对含量。研究中获得的高分辨率的双向电泳图谱是我国葎草花粉变应原蛋白质第一张完整的蛋白质图谱,将为今后葎草花粉中致敏蛋白质的检测、分离、基因克隆和变应原的标准化奠定基础。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的初步经验

聚丙烯酰胺凝胶电泳是目前认为具有较高分辨能力的分离和分析蛋白质等物质的一种方法。为了鉴定一些生物化学制剂的纯度以及观察在疾病中血清蛋白的变化情况,我们初步建立了这一方法,并用以观察了人、狗血清的电泳情况和一种酶分离的电泳图谱。     

植物绿色组织蛋白质组分双向电泳分析

双向电泳是在单向电泳基础上结合蛋白质等电点和分子量两种不同特性而发展起来的一项具有较高分辩率的蛋白质分离技术。由于分辩率高,可以用来分离复杂蛋白质组分,观察蛋白质组成变化及检测特异蛋白质的存在。不过,在植物上,这项技术应用较为成功的报道多以无色或非绿色组织作为研究材料。绿色组织富含色素及酚、醌等类杂质,对电泳过程干扰作用较大且不易去     

箭毒木种子蛋白质样品制备及双向电泳改良方法

建立箭毒木（Antiaris toxicaria）种子总蛋白的提取方法,以及可以对其蛋白质组进行分析的双向电泳条件。通过各种条件的优化与组合,建立了以TCA-丙酮为基础的Tris—HCl提取法提取总蛋白,第1向电泳为固相pH梯度等电聚焦,第2向电泳为垂直平板SDS-PAGE的双向电泳体系。通过对样品制备、样品溶解、等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及染色方法等关键步骤进行分析,获得了满意的双向电泳图谱。在探索适合箭毒木种子蛋白质组学研究双向电泳方法中,比较了三氯乙酸-丙酮沉淀法、和Tris—HCl法,以及对双向电泳过程中的关键步骤的改良,认为Tris—HCl法为最适方法,所得图谱背景清晰,蛋白质信息量最大,为箭毒木属植物的差异蛋白质组学的后续研究打下了坚实的基础。     

浙江产眼镜蛇蛇毒胆碱脂脢的研究 Ⅳ 同工酶

不同来源的胆碱酯酶的分子量和分子形态往往不同,就是同一来源的胆碱酯酶也有天然存在几种同工酶,有些由于不同亚基数组成不同的聚合体,也有在制备或贮藏过程中发生矫变。在前文(佘微明等 1981)报导浙江产眼镜蛇的粗蛇毒或两次亲和层析后的胆碱酯酶在高pH不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳中,均表明有六条活力显色同工酶带,我们用此系统改做双向电泳,比较了新鲜蛇毒原液、蛇毒冻干粉及两次亲和层析后的蛇毒胆碱酯酶,酶(Shafai 法 1971)的条带是沿着聚丙烯酰胺凝胶板的对角线分布,见图1。说明这些同工酶并非由于在提纯或电泳过程中产生的矫变。     

科学出版社新书推荐

《蛋白质电泳实验技术》(第二版) 郭尧君编著2005年5月出版,ISBN 7-03.015283-2定价:38.00 本书从凝胶电泳的原理、电泳技术和设备的发展入手,重点阐述了八种蛋白质电泳技术的原理、方法、实验考虑和具体应用。特别详细介绍了双向电泳及其相关技术,以供蛋白质组研究所需。     

一种改进的蛋白质超薄凝胶电泳方法

介绍了一种将聚丙烯酰胺凝胶固定在电泳夹板上的蛋白质电泳方法.通过此方法蛋白质电泳可以在0.4 mm厚的聚丙烯酰胺凝胶上进行.实验证明,经此方法处理的玻板结合凝胶非常牢固,在电泳后的所有处理步骤中都不会发生凝胶脱落现象.     

双向凝胶电泳中三种蛋白质检测方法的比较

高通量双向电泳是蛋白质组学的核心 ,双向电泳凝胶上蛋白质点的检测方法应具有灵敏度高、线性范围宽和兼容质谱鉴定等优点 .采用差异凝胶电泳 (differencegelelectrophoresis ,DIGE)技术以Cy3(1 (5 carboxypentyl) 1′ propylindocarbocyaninehalideN hydroxysuccinimidylester)和Cy5 (1 (5 carboxypentyl) 1′ methylindodicarbocyaninehalideN hydroxysuccinimidylester)荧光分别标记正常和TNF α处理细胞的蛋白质 ,用Cy2 (3 (4 carboxymethyl)phenylmethyl) 3′ ethyloxacarbocyaninehalideN hydroxysuccinimidylester)荧光标记正常和TNF α处理细胞蛋白质的等量混合样品作为内标 ,混合 3种荧光标记的蛋白质后 ,在同一等电聚焦胶条进行聚焦 ,然后在聚丙烯酰胺凝胶上进行第二向电泳 ,用 3种波长的激光激发扫描得到凝胶图象 ,DIGE中多个样品在同一条件下电泳 ,因而匹配率高 ,且引入内标使蛋白质点的检测与定量更为准确 .DIGE技术与质谱相结合 ,实现了高通量和相对准确定量 .与硝酸银和考马斯亮蓝染色结果相比较 ,DIGE技术具有灵敏度高、线性范围宽和不影响后续质谱鉴定等优点