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染色体微切割和微克隆已成为复杂基因组研究的有效途径,但是操作过程中的核外DNA的污染一直是令人担心的问题.通过研究植物染色体微切割(微分离)和微切割的染色体DNA 扩增过程中细胞质DNA的污染问题,表明目前常用的植物染色体微切割过程中,细胞质DNA的污染几乎难以避免,并提出了一个改进的降低细胞质DNA污染的方法,对如何控制细胞质DNA的污染进行了详细的讨论. 相似文献
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染色体微切割,微分离与微克隆技术研究进展 总被引:6,自引:0,他引:6
本文详细介绍了染色体微切割、微分离与微克隆技术在动物、人类及植物中的创立与发展,评述了不同染色体微切割、微分离与微克隆方法的优缺点,总结了这项技术在遗传学研究中的应用,提出了管项技术在植物分子遗传学研究中新方向。 相似文献
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本文详细介绍了染色体微切割、微分离与微克隆技术在动物、人类及植物中的创立与发展,评述了不同染色体微切割、微分离与微克隆方法的优缺点,总结了这项技术在遗传学研究中的应用,提出了利用这项技术在植物分子遗传学研究中的新方向。 相似文献
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以蚕豆(Viciafaba,2n=12)根尖为材料,采用改良方法制备染色体标本,在光镜下切割分离一段大M染色体核仁组织区(NOR)特定区段(约合0.9pgDNA),通过单一引物一聚合酶链式反应法(SingleUniquePrimer-PCR)随机扩增微切DNA后,获得近60μgDNA。经琼脂糖电泳分析测定扩增产物分子片段大小介于200-900bp。以地高新(Digoxigenin)标记蚕豆总体DNA,作为探针与扩增产物进行Southern杂交,证实扩增得到的DNA与蚕豆DNA同源,来自做切染色体。部分扩增产物经ECORI酶切后,连人经同酶切割后的pUC18载体质粒,转化大肠杆菌(EcoliJM109)。琼脂糖电泳分析得到的部分克隆,得知插人子长度介于0.25-0.9kb。本文将用于动物材料的单一引物一聚合酶链式反应法应用于植物染色体的微切微扩增,并作了一定程度简化,初步建立起一套包括微切、扩增、检测和克隆的便捷、经济的实验室制备植物染色体区域特异性基因文库的方法。 相似文献
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介绍了染色体显微切割及微克隆技术的原理和主要方法,综述了显微切割及微克隆的研究进展,并讨论了其在植物中的应用. 相似文献
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运用蚕豆根尖细胞微核试验分析校园水体的污染 总被引:3,自引:0,他引:3
许多研究表明 ,饮用水及生活污水中存在具有致突性的有机化学物质 ,其水源污染主要来源于生活污染源、工业污染源以及微生物生长活动引起非活性化学物转化成致突物等 ,在这些致突物中 ,许多具有遗传毒性。目前 ,研究饮用水的遗传毒性可用许多短期遗传毒性试验 ,其中蚕豆根尖细胞微核试验作为致突性分析的一种测试系统已越来越受到人们的青睐和应用。1 蚕豆根尖微核试验原理环境污染物 (如物理、化学、生物污染源 )能诱发植物细胞的染色体畸变 ,染色体断片游离在细胞质中于分裂末期形成微核。蚕豆是对污染物较为敏感的植物品种 ,利用污染过… 相似文献
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用Nd:YAG激光微束将处于丝分裂中期的小麦(Triticum aestivum L.)6B染色体微切割为四段,并用微细玻璃针将每个片段分别回收.将分离的染色体片段DNA用Sau3A接头介导的多聚酶链式反应(LA-PCR)分别扩增.Southem杂交证明4个特定区域的DNA确实来自于小麦基因组.用一系列(42对引物)位于6B染色体上的微卫星序列对微切割的染色体片段的PCR产物进行了验证.结果表明,获得的染色体片段的PCR产物来自于小麦6B染色体.将6B染色体4个片段的第二轮PCR产物克隆到pGET-vector中,建立了4个染色体特定区域的基因组文库,命名为R1、R2、R3和R4,分别包含2.1×105、2.74×105和2.93×105个重组子克隆.每个文库均随机挑选150个克隆进行质粒的小量制备和酶切验证.结果显示;插入片段大小在300~1800之间,平均大小为820~870bp,其中43%~48%的克隆为低/单拷贝序列,42%~47%为中/高拷贝序列.本研究为详细分析植物单染色体的不同片段的分子遗传学研究提供了基础. 相似文献
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小麦6B染色体微切割及其不同片段的DNA文库构建 总被引:2,自引:0,他引:2
用Nd∶YAG激光微束将处于有丝分裂中期的小麦(Triticum aestivum L.)6B染色体微切割为四段,并用微细玻璃针将每个片段分别回收。将分离的染色体片段DNA用Sau3A接头介导的多聚酶链式反应(LA-PCR)分别扩增。Southern杂交证明4个特定区域的DNA确实来自于小麦基因组。用一系列(42对引物)位于6B染色体和其他染色体上的微卫星序列对微切割的染色体片段的PCR产物进行了验证。结果表明,获得的染色体片段的PCR产物来自于小麦6B染色体。将6B染色体4个片段的第二轮PCR产物克隆到pGEMT-vector中,建立了4个染色体特定区域的基因组文库,命名为R1、R2、R3和R4,分别包含2.1×10~5、2.74×10~5、2.45×10~5和2.93×10~5个重组子克隆。每个文库均随机挑选150个克隆进行质粒的小量制备和酶切验证。结果显示:插入片段大小在300~1800 bp之间,平均大小为820~870 bp,其中43%~48%的克隆为低/单拷贝序列,42%~47%为中/高拷贝序列。本研究为详细分析植物单染色体的不同片段的分子遗传学研究提供了基础。 相似文献
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小麦染色体显微切割及HMW-GS1Dx5亚基基因克隆 总被引:5,自引:0,他引:5
宏伟的人类基因组计划以及随之而来的动物、植物(如水稻等)基因组计划为克隆有益基因提供了新方法和思路,其中一个令人注目的领域是染色体显微切割。该技术起始于80年代早期,首次应用显微切割和微克隆的是Scalenghe等在果蝇多线染色体上进行的。随后在哺乳... 相似文献
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《中国科学:生命科学》2016,(5)
DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰,在维持基因组稳定、调控基因表达、转座子沉默以及植物抗逆等过程中具有重要作用.基因组为单链环状DNA的双生病毒复制过程中形成的双链DNA与组蛋白结合形成微染色体,可诱导并成为DNA甲基化的靶标.而相应地,双生病毒在与植物长期斗争中,进化出多种不同类型的抑制子并且通过不同的策略来抑制DNA甲基化以逃脱植物的防御反应.本文将结合植物与病毒互作中的研究重点,简述DNA甲基化在植物抗双生病毒方面的研究进展,并围绕双生病毒编码的蛋白抑制DNA甲基化的机制进行综述,以更好地理解植物中DNA甲基化介导的表观遗传调控在植物与双生病毒互作中的作用. 相似文献
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拟南芥DNA探针的比较基因组原位杂交揭示的拟南芥与远缘植物基因组间的同源性 总被引:1,自引:0,他引:1
采用生物素标记的拟南芥基因组DNA探针在75%杂交严谨度下对双子叶植物番茄、蚕豆和单子叶植物水稻、玉米、大麦的染色体进行了比较基因组荧光原位杂交(comparative genomic in situ hybridization,cGISH)分析,以揭示拟南芥与远缘植物基因组间的同源性.cGISH信号代表了拟南芥基因组DNA中的重复DNA与靶物种染色体上同源序列的杂交.探针DNA在所有靶物种的全部染色体上都产生了杂交信号.杂交信号为散在分布,并呈现随基因组增大,杂交信号增多,且分布更加分散的趋势.所有靶物种的核仁组织区(NOR)都显示了明显强于其他区域的杂交信号,表明拟南芥基因组DNA探针可用于植物NOR的物理定位.在所有的靶物种中,信号主要分布在染色体的臂中间区和末端,着丝粒或近着丝粒区有少数信号分布.大麦染色体显示了与C-和N-带不同的独特的cGISH信号带型,表明此探针可用于不同植物染色体的识别.这些结果表明,拟南芥基因组与远缘植物基因组之间,除rDNA和端粒重复序列外,还存在其它同源的重复DNA;一些重复DNA序列在被子植物分歧进化为单子叶和双子叶植物之前就已存在,虽经历了长期的进化过程,至今在远缘物种之间仍保持了较高的同源性.结果还提示,大基因组中古老而保守的重复DNA在进化过程中发生了明显的扩增. 相似文献
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旋花科植物雄性细胞的细胞质DNA存在状况及其系统学意义 总被引:3,自引:0,他引:3
用DAPI荧光染色方法检测了旋花科4属4种植物——空心菜Ipomoea aquatica Forsk. 、茑萝 Qua-
moclit pennata (Desr.)Boj.、月光花 Calonyction aculeatum(L.)House和日本菟丝子Cuscuta japonica Choisy
中生殖细胞和精细胞中细胞质DNA存在的状况。证明除日本菟丝子外,其余3种植物的雄性细胞中都
存在细胞质DNA。此外,在我们曾研究过的5种旋花科种植物的生殖细胞和精细胞中亦显示含有细胞质
DNA,因而可认为这是旋花科较普遍的特性,日本菟丝子精细胞中缺少细胞质DNA,可作为—个新的胚胎学证据,支持此属从旋花科分出独立为菟丝子科。 相似文献
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植物荧光原位杂交技术的发展及其在植物基因组分析中的应用 总被引:12,自引:0,他引:12
荧光原位杂交(FISH)是在染色体、间期核和DNA纤维上定位特定DNA序列的一种有效而精确的分子细胞遗传学方法。20年来,植物荧光原位杂交技术发展迅速:以增加检测的靶位数为目的,发展了双色FISH、多色FISH和多探针FISH鸡尾酒技术;为增加很小染色体目标的检测灵敏度,发展了BAC-FISH和酪胺信号放大FISH(TSA-FISH)等技术;以提高相邻杂交信号的空间分辨力为主要目的,发展了高分辨的粗线期染色体FISH、间期核FISH、DNA纤维FISH和超伸展的流式分拣植物染色体FISH技术。在植物基因组分析中,FISH技术发挥了不可替代的重要作用,它可用于:物理定位DNA序列,并为染色体的识别提供有效的标记;对相同DNA序列进行比较物理定位,探讨植物基因组的进化;构建植物基因组的物理图谱;揭示特定染色体区域的DNA分子组织;分析间期核中染色质的组织和细胞周期中染色体的动态变化;鉴定植物转基因。 相似文献
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普通小麦-中间偃麦草TAI-27中附加染色体的显微切割及特异性探针的筛选 总被引:1,自引:0,他引:1
试验以长穗偃麦草基因组DNA为探针 ,与普通小麦 中间偃麦草TAI 2 7进行染色体原位杂交 ,表明有 4条与长穗偃麦草同源的染色体 ;以P .stipifolia (St)基因组DNA为探针 ,有 4条与St同源的染色体 .这说明TAI 2 7中有 4条St染色体 .TAI 2 7是异代换 附加系 .对TAI 2 7中附加的中间偃麦草染色体进行显微切割 ,并建立其微克隆库 ,从中筛选获得了中间偃麦草的特异性探针 ,同源性分析表明该序列为一新序列 .这为进一步筛选抗病、抗逆和优质基因打下基础 . 相似文献