靶向抑制铜伴侣蛋白CCS逆转卵巢癌C13*细胞的顺铂耐药性

顺铂（cisplatin）,即二胺二氯铂/diaminedichloroplatinum（DDP）,是治疗卵巢癌最有效的化疗药物;然而,耐药性是限制顺铂临床治疗效果的最重要因素。目前,卵巢癌对顺铂的耐药机制仍不十分清楚。超氧化物歧化酶1铜伴侣蛋白（copper chaperone for superoxide dismutase 1, CCS）介导Cu2+特异性传递给超氧化物歧化酶1（superoxide dismutase1, SOD1）,为维持细胞增殖和生存所必需;相反,抑制CCS可减缓肿瘤细胞增殖。本研究旨在证明,AMPK依赖的CCS表达与卵巢癌的顺铂耐药有关。实时定量PCR及免疫印迹结果显示,与顺铂敏感细胞株OV2008比较,顺铂耐药细胞株C13*中的CCS mRNA和蛋白质表达水平明显上调。shRNA靶向沉默CCS或采用抑制剂DC_AC50抑制CCS后,可明显增强顺铂对C13*细胞增殖的抑制作用,提示CCS高表达与顺铂耐药相关,而抑制CCS可逆转顺铂的耐药性。同样,免疫印迹结果证明,CCS在A549、H1944等6种不同肺癌细胞中的表达水平高低与顺铂敏感性密切相关。采用siRNA干扰CCS在A549细胞中的高表达,或在CCS低表达的H1944细胞中过表达CCS,可明显增加A549或减弱H1944细胞对顺铂的敏感性,进一步证明CCS表达与顺铂耐药性相关。此外,采用AMPK抑制剂化合物C阻断AMPKα Thr172磷酸化（激活）,即抑制AMPK信号通路,可明显抑制CCS在C13*细胞中的表达,提高其对顺铂的敏感性。以上研究结果提示,AMPK信号通路依赖的CCS表达参与肿瘤的顺铂耐药机制,而抑制CCS逆转顺铂耐药。本文的结果还提示,CCS有望成为克服顺铂耐药的潜在靶点。     

靶向抑制铜伴侣蛋白CCS逆转卵巢癌C13~*细胞的顺铂耐药性北大核心CSCD

顺铂(cisplatin),即二胺二氯铂/diaminedichloroplatinum(DDP),是治疗卵巢癌最有效的化疗药物;然而,耐药性是限制顺铂临床治疗效果的最重要因素。目前,卵巢癌对顺铂的耐药机制仍不十分清楚。超氧化物歧化酶1铜伴侣蛋白(copper chaperone for superoxide dismutase 1,CCS)介导Cu2+特异性传递给超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase1,SOD1),为维持细胞增殖和生存所必需;相反,抑制CCS可减缓肿瘤细胞增殖。本研究旨在证明,AMPK依赖的CCS表达与卵巢癌的顺铂耐药有关。实时定量PCR及免疫印迹结果显示,与顺铂敏感细胞株OV2008比较,顺铂耐药细胞株C13*中的CCS mRNA和蛋白质表达水平明显上调。shRNA靶向沉默CCS或采用抑制剂DC_AC50抑制CCS后,可明显增强顺铂对C13*细胞增殖的抑制作用,提示CCS高表达与顺铂耐药相关,而抑制CCS可逆转顺铂的耐药性。同样,免疫印迹结果证明,CCS在A549、H1944等6种不同肺癌细胞中的表达水平高低与顺铂敏感性密切相关。采用siRNA干扰CCS在A549细胞中的高表达,或在CCS低表达的H1944细胞中过表达CCS,可明显增加A549或减弱H1944细胞对顺铂的敏感性,进一步证明CCS表达与顺铂耐药性相关。此外,采用AMPK抑制剂化合物C阻断AMPKα-Thr172磷酸化(激活),即抑制AMPK信号通路,可明显抑制CCS在C13*细胞中的表达,提高其对顺铂的敏感性。以上研究结果提示,AMPK信号通路依赖的CCS表达参与肿瘤的顺铂耐药机制,而抑制CCS逆转顺铂耐药。本文的结果还提示,CCS有望成为克服顺铂耐药的潜在靶点。     

宫颈癌新辅助化疗耐药分子生物标志物的研究现状

新辅助化疗已经广泛用于各种癌症包括宫颈癌的治疗,同步放化疗是当前局部晚期宫颈癌患者的标准疗法,有效的新辅助化疗可以减小肿瘤体积、增加手术的可实施性,此外,新辅助化疗也可提高局部晚期宫颈癌患者的预后。但对顺铂为基础的化疗耐药仍然是临床治疗中的一个障碍,易发生肿瘤的复发。本综述从新辅助化疗顺铂耐药的角度出发,探讨新辅助化疗中与顺铂类化疗抵抗相关的分子生物学标志物研究现状。     

Daintain/AIF-1强化了HepG2细胞顺铂耐药性的产生

目的：探讨炎症因子Daintain/AIF-1对肝癌细胞耐药性产生的影响。方法：利用MTT法测定耐药HepG2细胞株的IC50,流式细胞术测定耐药细胞株期凋亡率,HPLC方法检测隔耐药细胞株胞内顺铂的外排。结果：Daintain/AIF-1提高了HepG2耐药细胞株的IC50;再次受到相同剂量顺铂的攻击时,Daintain/AIF-1与顺铂联合运用构建的耐药细胞株凋亡率明显下降;Daintain/AIF-1促进了耐药细胞株胞内顺铂的外排。结论：此研究表明Daintain/AIF-1通过影响胞内顺铂的外排而促进了肝癌细胞对顺铂耐药性的产生。     

科研快讯

《自然》:科学家解析乳腺癌耐药之谜来自英国癌症研究所的研究人员领导的一个研究小组在1月4日出版的《自然》(Nature)杂志上宣称,他们在新研究中证实乳腺癌对标准激素治疗产生耐受的原因是因为雌激素受体发生了重编程结合到了基因组的不同位点。该研究发现为开发出克服耐药的新治疗策略,以及可用于预测患者耐药可能性的诊断方法提供了重要的线索。     

PNAS：用于增强顺铂化疗功效的纳米粒

近日。佐治亚大学研究人员对传统化疗药物顺铂进行修改,开发出一种前体药物,能显著加强顺铂瞄准并摧毁癌细胞的能力。最新科学家成功制造出顺铂的修改版本,称为铂-M（Platin—M）,铂-M目的是通过攻击癌细胞线粒体来克服这种耐药性。相关研究发表在PNAS杂志上。     

《自然》：科学家解析乳腺癌耐药之谜

来自英国癌症研究所的研究人员领导的一个研究小组在1月4日出版的《自然》（Nature）杂志上宣称，他们在新研究中证实乳腺癌对标准激素治疗产生耐受的原因是因为雌激素受体发生了重编程结合到了基因组的不同位点。该研究发现为开发出克服耐药的新治疗策略。以及可用于预测患者耐药可能性的诊断方法提供了重要的线索。     

10种ABC转运蛋白在鼻咽癌顺铂耐药细胞系中的表达

为研究鼻咽癌细胞CNE2中顺铂耐药与10种ABC转运蛋白的关系,分别用顺铂、顺铂+5-氟脲嘧啶来诱导CNE2耐药,在脱药培养2个月后通过MTT法测定细胞的生长曲线及其与顺铂的量效关系和耐药指数,同时,通过荧光定量PCR法检测耐药细胞与敏感细胞中10种ABC转运蛋白mRNA表达的差异,并通过免疫细胞化学法验证．MTT法结果提示,成功诱导出两株分别对顺铂、顺铂+5-氟脲嘧啶耐药的细胞株(分别命名为CNE2/DDP、CNE2/DDP+5Fu),耐药指数分别为2.58和5.31,ABCC2在两株耐药细胞株中表达均上调,分别为2.50和4.08倍,免疫细胞化学法结果表明,ABCC2在两株耐药细胞中表达均增强,同时ABCC2还可在CNE2/DDP+5Fu细胞核中表达．上述结果表明ABCC2在CNE2细胞对顺铂的耐药性中可能发挥着重要的作用．     

GDF15基因在卵巢上皮性癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨生长分化因子GDF15(Growth Differentiation Factor 15)基因在卵巢上皮性癌组织中的表达及其与铂类耐药的相关性。方法:应用免疫组化、western blot、RT-PCR等方法对80例原发性卵巢癌组织和卵巢癌顺铂敏感/耐药株A2780和CP70、SKOV3和SKOV3/DDP中生长分化因子GDF15表达水平进行测定。结果:生长分化因子GDF15的表达强度与卵巢癌铂类耐药性显著相关。在卵巢癌顺铂耐药株CP70、SKOV3/DDP中GDF15表达水平较顺铂敏感株A2780、SKOV3明显增高。结论:GDF15表达水平与卵巢癌发生发展及铂类耐药相关,对于卵巢癌患者早期筛选、预测预后具有一定的临床指导价值。     

5- 氮杂-2'－脱氧胞苷对卵巢癌细胞系CP70 顺铂耐药性的逆转作用

目的:探究5-氮杂-2’-脱氧胞苷体外逆转卵巢癌铂类耐药细胞系CP70对顺铂的耐药性,并探讨与SOCS-2表达的关系。方法:免疫细胞化学和Western blot方法检测使用5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理细胞前后细胞内SOCS-2表达水平。MTT法检测单独使用5-氮杂-2’-脱氧胞苷或顺铂及两药联合使用对CP70细胞的抑制作用。结果:两药联合处理CP70细胞后顺铂耐药逆转倍数为1.34、1.63、2.34,联合处理组的细胞中SOCS-2表达明显升高。结论:5-氮杂-2’-脱氧胞苷可以部分逆转CP70细胞对顺铂的耐药性,且此作用可能与增加细胞的SOCS-2表达有关。     

奈达铂的临床应用新进展

奈达铂是铂类第二代抗肿瘤药物,临床研究表明奈达铂对大部分实体瘤,如头颈部肿瘤、食管癌、肺癌、卵巢上皮癌和宫颈癌等有效,其可联合多种化疗药物并具有放疗增敏作用。并可作为新辅助化疗应用在癌症术前治疗中。奈达铂的抗肿瘤作用优于顺铂,并且毒性谱有差异。主要不良反应如恶心呕吐发生率明显低于顺铂,联合放疗治疗中晚期癌症能提高有效率及生存率,明显减轻不良。值得临床进一步推广。依据NDP的临床前研究及临床应用,本文就奈达铂在临床上的应用作一简要综述。     

奈达铂的临床应用新进展

奈达铂是铂类第二代抗肿瘤药物,临床研究表明奈达铂对大部分实体瘤,如头颈部肿瘤、食管癌、肺癌、卵巢上皮癌和宫颈癌等有效,其可联合多种化疗药物并具有放疗增敏作用。并可作为新辅助化疗应用在癌症术前治疗中。奈达铂的抗肿瘤作用优于顺铂,并且毒性谱有差异。主要不良反应如恶心呕吐发生率明显低于顺铂,联合放疗治疗中晚期癌症能提高有效率及生存率,明显减轻不良。值得临床进一步推广。依据NDP的临床前研究及临床应用,本文就奈达铂在临床上的应用作一简要综述。     

从“无用”化合物到治癌良药——纪念顺铂化疗作用的发现

<正>众里寻治癌良药千百度,蓦然回首顺铂却在灯火阑珊处癌症仍是严重威胁人类健康的疾病,而化疗仍是癌症治疗的基本策略之一。目前,临床上应用的化疗药物达几十种,以顺铂为主的铂类化合物是最常用一类,而顺铂抗癌作用则源于一次偶然发现。     

PI3K/AKT信号转导通路与人舌鳞癌细胞TCA8113顺铂耐药的相关性研究

目的:探讨PI3K特异性抑制剂LY294002逆转顺铂耐药口腔鳞癌细胞TCA8113/CDDP的可行性。方法:采用间歇性加药,逐步递增CDDP药量,体外连续诱导培养TCA8113/CDDP细胞;用不同浓度的LY294002和顺铂处理TCA8113和TCA8113/CDDP细胞;MTT法观察对细胞增殖的影响,Western印迹分析LY294002作用前后p-Akt、Akt、PI3K蛋白的表达。结果:建立了舌鳞癌耐药细胞TCA8113/CDDP,耐药指数为7.7;MTT实验显示LY294002对TCA8113和TCA8113/CDDP细胞的抑制作用与浓度及作用时间呈正相关;LY294002联合顺铂对2种细胞的抑制作用比单用顺铂效果好;PI3K、Akt、p-AKT蛋白表达明显降低,其中TCA8113/CDDP细胞中PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达比TCA8113细胞明显增多(P0.05)。结论:LY294002能增加耐药口腔鳞癌顺铂化疗的敏感性。     

U1调控乳腺癌细胞耐药性的分子机制

[目的]探讨糖酵解在乳腺癌细胞耐药性中的潜在关联及机制。[方法]筛选乳腺癌细胞HCC1937、MCF7顺铂抗性细胞系。三氟甲氧基羰基氰苯腙(FCCP)诱导后细胞的耗氧率(OCR)的检测表示乳腺癌细胞的糖酵解水平。miRNA高通量测序和遗传学筛选鉴定乳腺癌耐药株中调节糖酵解和耐药性的关键分子。[结果]乳腺癌耐药株在将糖酵解途径重编程为有氧糖酵解。过表达miR-485-5p时耐药株中FCCP诱导的OCR显著上升(P<0.05)。过表达miR-485-5p时耐药株对顺铂的抗性减弱(P<0.05)。敲低MICU1时,耐药株中FCCP诱导的OCR显著上升(P<0.05),耐药株对顺铂的抗性减弱(P<0.05)。过表达miR-485-5p时MICU1的mRNA水平和蛋白水平均下降(P<0.05)。同时,miR-485-5p靶向MICU1 mRNA的3′端非编码区。[结论]乳腺癌中miR-485-5p靶向MICU1 mRNA的3′端非编码区减少了MICU1的表达水平。MICU1促进乳腺癌细胞的有氧糖酵解,促进了乳腺癌细胞对顺铂的抵抗作用。     

miR-19a-3p通过靶向PIK3CB参与调控雌激素受体阳性乳腺癌化疗耐药的相关研究

目的:研究miR-19a-3p在雌激素受体(ER)阳性乳腺癌化疗耐药中的作用及可能的调控机制。方法:用10μmol/L顺铂处理ER阳性乳腺癌耐药细胞株和敏感细胞株,MTT法检测细胞活性;RNA测序分析ER阳性乳腺癌耐药细胞株和敏感细胞株中表达差异的microRNA;实时荧光定量PCR验证miR-19a-3p在ER阳性乳腺癌耐药细胞株和敏感株中的表达差异;合成miR-19a-3p类似物和抑制物,分别转染ER阳性乳腺癌耐药细胞株和敏感株,检测耐药细胞株对顺铂耐药的药物作用浓度是否发生改变;通过Starbase v2.0调取TCGA数据分析预测miR-19a-3p的靶标基因及相互调控关系;实时荧光定量PCR进一步验证miR-19a-3p与靶标基因在ER阳性乳腺癌耐药细胞株和敏感株中的表达。结果:顺铂处理后不影响ER阳性乳腺癌耐药细胞株的细胞活性;小RNA测序发现miR-19a-3p在ER阳性乳腺癌耐药细胞株中低表达,qPCR进一步确认miR-19a-3p在ER阳性乳腺癌耐药细胞株中的表达量相比于敏感株较低;miR-19a-3p过表达促进ER阳性乳腺癌耐药株的顺铂耐药作用浓度下调,而miR-19a-3p表达被抑制后会上调ER乳腺癌敏感细胞株的顺铂敏感作用浓度;通过Starbase v2.0预测表明miR-19a-3p负调控PIK3CB,qPCR及Western印迹证实miR-19a-3p过表达抑制PIK3CB的表达。结论:miR-19a-3p通过抑制PIK3CB的表达,负调控ER阳性乳腺癌化疗耐药,增强ER阳性乳腺癌细胞对顺铂化疗的敏感性。     

5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对卵巢癌细胞系CP70顺铂耐药性的逆转作用

目的：探究5-氮杂-2＇-脱氧胞苷体外逆转卵巢癌铂类耐药细胞系CP70对顺铂的耐药性,并探讨与SOCS-2表达的关系。方法：免疫细胞化学和Western blot方法检测使用5-氮杂-2＇-脱氧胞苷处理细胞前后细胞内SOCS-2表达水平。MTT法检测单独使用5-氮杂-2＇-脱氧胞苷或顺铂及两药联合使用对CP70细胞的抑制作用。结果：两药联合处理CP70细胞后顺铂耐药逆转倍数为1.34、1.63、2.34,联合处理组的细胞中SOCS-2表达明显升高。结论：5-氮杂-2＇-脱氧胞苷可以部分逆转CP70细胞对顺铂的耐药性,且此作用可能与增加细胞的SOCS-2表达有关。     

《癌症》：一种心脏病药物或增加患癌风险

一项发表在美国《癌症》杂志网络版上的新研究显示,目前最常用的抗心律失常药物之一胺碘酮可能会增加罹患癌症的风险,尤其是对男性患者。胺碘酮最早是一种治疗心绞痛的药物,1985年被美国食品和药物管理局批准用于治疗心律失常。这种脂溶性药物降解缓慢,长期使用将会在软组织中大量积聚。此前曾有研究提出,胺碘酮会增加罹患某些癌症的风险,但一直没有大规模的相关调查。     

miR-93通过靶定PTEN基因增加肝癌细胞对奥沙利铂的耐药性

微小RNA（miRNA）参与了肿瘤的耐药过程.本研究通过建立对奥沙利铂 (oxaliplatin,Oxa)耐药的肝癌细胞系BEL-7402/Oxa和Hep-3B/Oxa,利用miRNA芯片结合实时荧光定量PCR的方法,筛选得到数个参与肝癌细胞对奥沙利铂耐药的miRNA 分子,其中miR-93表达增加最为明显.MTT实验发现,增加肝癌细胞株中miR-93的表达可以增强其对奥沙利铂的耐药性.进一步结合生物信息学、荧光报告载体及免疫印迹实验,证实miR-93通过靶定抑癌基因PTEN增加肝癌细胞对奥沙利铂的耐药性.总之,肝癌耐药细胞系的建立及其miRNA差异表达谱的分析,以及miRNA分子对肝癌细胞发生奥沙利铂耐药的具体作用及其分子机制的研究,不仅有助于理解肝癌细胞发生耐药的分子机制,而且为探索克服肝癌对奥沙利铂耐药性的有效途径提供可靠依据.     

念珠菌的耐药机制及应对策略研究

念珠菌是临床上深部真菌感染的主要致病菌,致死率高,耐药性严重,耐药机制主要包括:药物作用靶标结构变异;靶标表达增加;靶标缺失;影响药物外排;改变细胞膜甾醇成分;形成生物被膜;钙调神经磷酸酶通路激活等。针对真菌耐药性问题,首要的应对策略应是研究发现新的药靶,开发全新结构和作用方式的新药。同时,筛选研究能降低真菌耐药性的新药,通过与现有的抗真菌药物联合使用,也可作为临床克服真菌耐药,防治真菌感染的有效策略。