脂氧素对K562和HL-60白血病细胞增殖和凋亡的影响(英文)

炎症在肿瘤的发生发展过程中扮演重要角色,脂氧素是一类重要的内源性抗炎介质。但是迄今为止,脂氧素对肿瘤的影响报道极少。为此,本文研究了脂氧素对HL-60和K562白血病细胞增殖和凋亡的影响。体外培养白血病细胞株HL-60和K562,Western印迹和实时荧光定量PCR检测脂氧素受体的表达情况;CCK-8法(cell counting kit-8 assay)检测HL-60和K562的增殖能力;PI染色后利用流式细胞仪进行细胞周期分析;膜联蛋白V试剂盒检测脂氧素对细胞凋亡的影响。实验结果表明脂氧素抑制HL-60和K562白血病细胞增殖(P0.05);脂氧素处理组S期细胞比例明显减少而G_0/G_1期细胞比例增加;脂氧素还可以诱导HL-60和K562白血病细胞凋亡。由此可见,脂氧素抑制HL-60和K562白血病细胞增殖,其机制可能与诱导白血病细胞G_0/G_1期阻滞和细胞凋亡有关。     

丁酸钠对人胃癌和食道癌细胞的生物学效应

5mM丁酸钠可使人胃癌MGc803细胞形态发生改变,细胞变长,出现胞浆突起,趋向于成纤维细胞形态的变化,使食道癌ECa109细胞的核/质比下降。同时能抑制细胞增殖,使细胞生长率下降,丁酸钠对细胞增殖的抑制作用是随其浓度的增加而增强的,具有剂量依赖关系。丁酸钠可促进人胃癌MGc803细胞胞质中微管和食道癌ECa109细胞内中等纤维的组装,这种变化对丁酸钠处理后细胞形态的改变有关。丁酸钠可使细胞阻断于G_1期。??对3’,5’-cAMP—PDE(cAMP-磷酸二酯酶)活力具有强的抑制作用,并提高细胞内cAMP水平,从而抑制细胞增殖。这些结果表明丁酸钠对人胃癌MGc803和食道癌ECa109细胞具有一定的诱导分化作用。     

钙调素抑制剂——三氟拉嗪对肿瘤细胞增殖和微管组装的影响

本文用钙调素抑制剂——三氟拉嗪处理人胃癌MGC-803细胞,用免疫荧光细胞化学方法,放射免疫法和速流荧光分析等方法研究了钙调素对细胞增殖,环核苷酸代谢及微管组装,有丝分裂等细胞功能的调节作用。实验结果表明,TFP明显地抑制了人胃癌细胞的增殖,这种抑制增殖的作用,具有剂量和时间依赖关系,细胞群体中G_1期细胞增多,S期细胞下降,DNA合成明显地受到抑制。TFP处理的胃癌细胞仅在短时间内(5'-30')cAMP含量升高,cGMP浓度降低,cAMP/ ??cGMP比值比对照组高4.4倍,但此后环核苷酸含量又很快恢复到对照组水平。本实验还观察到TFP处理后的MGC-803细胞胞质铺展,细胞形态的改变与胞质微管的分布有密切联系,实验结果表明TFP加强了人胃癌细胞MTOC对微管的组装能力,使微管分布得到恢复,微管纤维呈放射状延伸到细胞边缘,充满胞浆,使细胞呈现出展平的多边形,趋向于正常上皮细胞形态的变化,本实验结果表明TFP抑制癌细胞增殖及使微管组装加强可能是通过对CaM活性的抑制作用。此结果有助于说明转化细胞内钙调素的变化,可能是与转化细胞增殖失控和胞质微管消退有关。     

人参皂甙Rg1对体外人胃癌细胞增殖的抑制作用及机制

本研究用不同浓度人参皂甙Rg1作用人胃癌BGC-823细胞24 h、48 h和72 h,采用MTT法、流式细胞术及半定量RT-PCR检测GS-Rg1对胃癌细胞的增殖抑制作用、细胞周期分布时相和p16~(INK4a)、p21~(WAF1)表达水平的影响,以探讨人参皂甙Rg1对人胃癌BGC-823细胞增殖的抑制作用及机制。结果表明,随着作用时间和浓度的增加,人参皂甙Rg1对胃癌细胞增殖抑制作用逐渐增强(P<0.05),G_0/G_1期细胞比例增加,G_2/S期细胞比例下降,p16~(INK4a)、p21~(WAF1)基因水平上调。上述结果提示人参皂甙Rg1能抑制体外培养的胃癌BGC-823细胞增殖,其机制可能与上调肿瘤细胞内细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p16~(INK4a)及p21~(WAF1)mRNA的表达有关。     

ACh对人垂体腺瘤细胞内蛋白激酶C、胞内游离钙及cAMP/cGMP的影响

我们曾发现ACh可明显地抑制垂体腺瘤细胞的增殖代谢,为深入探讨ACh抑制垂体腺瘤细胞增殖作用的机制,观察了ACh作用后垂体腺瘤细胞内蛋白激酶C(PKC)、[Ca^2 ]i及cAMP／cGMP的变化。结果发现：(1)与空白处理组相比,使用PKC的激动剂PMA处理培养的人垂体腺瘤细胞时可使胞浆、胞膜和细胞总PKC活性浓度均升高,但ACh(10μmol/L)作用15min后,胞浆、胞膜和细胞总PKC活性均下降,且此作用可被阿托品阻断;(2)ACh(10μmol/L)作用于单个人垂体腺瘤细胞后,立即使垂体腺瘤细胞[Ca^2 ]i相对水平降低,但此作用可被阿托品阻断;(3)ACh作用于人垂体腺瘤细胞15min后,胞内cAMP水平均明显升高,而cGMP没有改变。该结果为探讨ACh抑制垂体腺瘤细胞增殖的分子机制提供了重要线索,同时提示,ACh对垂体瘤细胞增殖分化的调控作用是细胞内多信息系统相互整合的结果。     

竹红菌甲素对体外培养细胞光敏作用的实验研究

本文用免疫荧光细胞化学、流式荧光分析等方法研究了光敏剂H_A对培养的HeLa细胞的光敏化作用。结果表明,H_A光敏化作用使细胞形态发生变化,细胞表面微绒毛丧失,细胞增殖受到抑制,上述变化随光照剂量增加而加剧,其中对肿瘤细胞的抑制作用较正常二倍体细胞更大,细胞群体中G_1期细胞下降,S期细胞增多。H_A的光敏化作用还使胞质微管变稀疏,微管中心的亮荧光近乎消失。以上实验说明,H_A的光敏作用对培养细胞的作用引起细胞膜、细胞骨架的损伤,使细胞周期部分阻断于S期,从而抑制了细胞的增殖。     

α-硫辛酸下调Grb2抑制A549细胞增殖的研究

目的:探讨α-LA对A549细胞增殖的机制以及Grb2在其中发挥的作用。方法:利用CCK-8和流式细胞术检测α-LA对细胞增殖的影响;实时定量PCR和Western Blot检测细胞中Grb2表达的变化;利用向细胞中转染siGrb2及过表达Grb2载体检测细胞中Grb2表达水平差异对细胞增殖的影响。结果:α-LA处理A549 24 h后,对照组和α-LA处理组中位于G_0/G_1期细胞的比率由40.60%上升至57.80%;而位于S期细胞的比率由45.96%下降至39.01%;与细胞G1/S期的转换相关的调节蛋白CDK2/4/6,cyclin D3和E1的表达也随之发生了相应的改变,α-LA通过抑制细胞G_1/S期的转换而抑制细胞增殖。与亲本细胞相比,Grb2在α-LA处理A549细胞中的转录和蛋白表达水平均显著降低,干扰细胞中Grb2表达能显著抑制A549增殖;而过表达Grb2可阻断α-LA诱导的细胞增殖抑制。结论:α-LA具有抑制A549细胞增殖的作用,Grb2是α-LA发挥抑细胞增殖效应的重要介导因子。     

P15INK4B高表达对人黑色素瘤细胞G1/S进程的阻滞及与MAPK信号相关性之初探

利用TdR-N_2O同步法分别获得P15高表达的MLIK6和表达空载体的MLC2的M期细胞和G_1期细胞,~3H-TdR掺入结果显示,与对照组细胞MLC2相比,实验组细胞MLIK6从G_1期进入S期时间延长2h,并且掺入强度明显减弱,DNA合成被抑制。进一步观察了P15~(INK4B)对G_1/S相关调控蛋白的影响,在M期细胞释放8h(晚G_1期细胞)后,与对照组MLC2细胞相比,实验组MLIK6细胞中CyclinD1,CyclinE,Cdk4,C-Myc蛋白水平均降低。相反,P27~(KIP1)的表达却上升。同时探讨了MAPK信号在P15~(INK4B)阻抑A375细胞G_1/S转换中的作用与相关性,结果显示晚G_1期的MLIK6细胞中ERK1,ERK2水平变化不大,而具有活性的P-ERK1和P-ERK2均表现出下降。上述实验表明,P15~(INK4B)可能通过作用于G_1期相关的周期调节蛋白和抑制ERK1和ERK2活性,阻滞G_1/S转换与抑制DNA合成。     

高压芒刺静电场抑制人肝癌细胞SMMC7721增殖的研究

目的:研究高压芒刺静电场(high-voltage prick electrostatic field,HVPEF)对肿瘤细胞增殖的抑制作用.方法:分别以电压为6kV、10kV和14kV的HVPEF作用于体外培养的人肝癌细胞SMMC7721,绘制细胞生长曲线,并用MTT法和流式细胞术检测电场对细胞增殖的抑制效果.结果:HVPEF处理后,各实验组细胞生长受到不同程度抑制,细胞死亡率升高(P<0.01),细胞增殖活性分别降为对照组的75.7%、88.5%和72.2%,且存在统计学差异(P<0.05).结论:一定强度的高压芒刺静电场作用能够有效抑制肿瘤细胞增殖.     

NDGA上调宫颈癌SiHa细胞p27和p53的表达

<正>去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)是脂氧合酶非特异性抑制剂,近年来发现NDGA及其衍生物具有抗病毒和抗肿瘤作用。我们先前发现NDGA能通过促进组蛋白H3乙酰化上调p21表达的方式将宫颈癌SiHa细胞抑制于G_1期。在此基础上,我们进一步探索了NDGA对其他调节G_1/S期转换关键因素:p27和p53的影响。     

环化腺苷酸对两株人食管癌上皮细胞作用的初步观察

用环化腺苷酸(cAMP)或其衍生物二丁酰环化腺苷酸(dbcAMP)加茶碱(theophylline)处理两株长期培养的人食管癌上皮细胞。观察到细胞的生长增受到明显抑制,细胞形态变得较为瘦长,并难于被胰酶及EDTA混合液所消化。表明cAMP对人食管癌上皮细胞有一定“逆转”作用。     

高三尖杉酯碱通过下调IRS4蛋白质的表达抑制黑色素瘤维罗非尼耐药细胞周期和增殖

黑色素瘤是一种死亡率极高的恶性肿瘤。近年来,其发病率逐年上升且耐药问题日渐突出。因此,如何克服耐药提高治疗效果是目前急需解决的问题。本文对高三尖杉酯碱对黑色素瘤维罗非尼耐药细胞A375R的作用及其机制进行初步探究。采用CCK-8法检测发现,维罗非尼对黑色素瘤细胞A375和A375R的半数抑制浓度(IC_(50))分别为0.94μmol/L和49.09μmol/L,其耐药倍数为52.22倍,证明A375R具有耐药性,可进行后续实验;高三尖杉酯碱作用于A375R细胞24、48、72 h后的IC_(50)分别为18.57 ng/mL、9.88 ng/mL、9.23 ng/mL,说明高三尖杉酯碱能有效抑制A375R细胞的增殖,且呈时间和浓度依赖性。克隆形成实验显示与对照组相比,给予高三尖杉酯碱5、10、20 ng/mL,作用24 h,克隆形成率分别为52.18%、29.72%、2.36%,表明高三尖杉酯碱能有效抑制A375R细胞的克隆形成。流式细胞术检测显示,G_0/G_1期细胞由正常对照组的38.94%增加至55.05%,细胞阻滞在G_0/G_1期。蛋白质印迹结果显示,与A375细胞相比,A375R细胞中胰岛素受体底物4(IRS4)、p-Akt蛋白质表达水平上调,使用高三尖杉酯碱能下调A375R中IRS4、p-Akt、细胞周期蛋白E1、CDK2蛋白质的表达水平。以上结果表明,高三尖杉酯碱可能通过下调IRS4蛋白表达抑制PI3K/Akt通路的激活,使细胞周期阻滞在G_0/G_1期,从而抑制黑色素瘤耐药细胞的增殖。     

甲胎蛋白对HeLa细胞增殖的促进作用

为探讨甲胎蛋白 (alpha fetoprotein ,AFP)对肿瘤细胞增殖的促进作用。用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞 ,通过MTT计数、[3 H] TdR参入法、流式细胞仪等研究细胞增殖 ,并用放射免疫法测定细胞内cAMP、共聚焦显微镜扫描细胞内Ca2 浓度等观察细胞内第二信使物质的改变及测定3 2 P转移反映细胞内蛋白激酶A(PKA)活性 ;用Western印迹分析法分析突变型 p5 3、p2 1ras蛋白表达。结果显示AFP(浓度大于 10mg/L)对HeLa细胞增殖有明显的促进作用。在AFP(2 0mg/L)作用下 ,HeLa细胞cAMP浓度升高 30 0 % ;Ca2 浓度最大升高 15 4 .9%、PKA活性最大升高 10 0 %。突变型 p5 3和 p2 1ras分别增高 81.1% (2 4h)和 96 .2 % (2 4h)。抗甲胎蛋白单克隆抗体能有效地阻断AFP促HeLa细胞增殖作用。以上表明 ,(1)AFP具促HeLa细胞增殖的生理功能 ;(2 )AFP促进HeLa细胞增殖的作用是通过影响细胞内cAMP和Ca2 浓度以及PKA活性进而促进一些原癌基因的表达来实现的。     

钙调素拮抗剂小柏胺衍生物对成纤维细胞增殖和功能的影响

为了研究钙调素拮抗剂EBB对成纤维细胞增殖和功能的影响,我们观察了经EBB作用后成纤维细胞的生长曲线、~3H-TdR掺入、钙调素水平的变化以及细胞增殖周期中DNA的改变和~3H-脯氨酸掺入。结果表明EBB直接抑制细胞增殖,使钙调素水平下降,DNA合成受阻,并使细胞停滞于生长周期中的G_0+G_1期。另外,胶原合成也受到阻抑。     

TRPM7调控PI3K/AKT通路对人脑血管外膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAFs)的异常增殖参与了血管增殖性疾病的发生发展。该研究探讨TRPM7(transient receptor potential melastatin 7)能否通过调控PI3K/AKT信号通路影响HBVAFs增殖和凋亡。体外培养HBVAFs细胞,分为如下几组:parental(正常培养HBVAFs细胞)、si-NC、si-TRPM7、si-NC+IGF-1(PI3K/AKT信号通路激活剂)、si-TRPM7+IGF-1。通过qRT-PCR法检测TRPM7 mRNA表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况;Western blot法检测目的蛋白水平。结果显示,si-TRPM7转染可显著降低HBVAFs细胞中TRPM7 mRNA和蛋白表达水平(P0.001);与si-NC组比较,si-TRPM7组细胞增殖活力下降(P0.001),细胞G_0～G_1期细胞比率上升(P0.001),S期细胞比率下降(P0.001),周期调控蛋白CCND1、CDK2、CDK4水平均明显下降(P0.001),凋亡百分比增加(P0.001),Bcl-2、p-PI3K及p-AKT蛋白表达下降(P0.001),Bax、cleaved caspase-3及Cytochrome c蛋白表达增加(P0.001);而PI3K/AKT信号通路激活剂IGF-1处理可有效逆转si-TRPM7介导的上述改变(P0.001)。这些结果提示,干扰TRPM7表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路激活发挥抑制HBVAFs细胞增殖并诱导凋亡的作用,为TRPM7作为血管增殖性疾病的治疗靶点提供理论依据。     

HPD在胃癌细胞各时相中的转运分布和损伤部位的关系

本文探讨了HPD衍生物加红光对人胃低分化腺癌MGC 80-3细胞不同周期的生物学效应。我们观察到HPD的转运与分布决定于细胞周期。G_1期在30分至60分钟内HPD从膜转运至胞质;S、G_2期则直接进入胞质的不同部位;而M期在核部位弥散分布。同步化细胞经HPD加红光处理后,引起细胞大量光敏杀伤,S与G_1期较明显,而M期光敏性最小。我们还观察到:不同周期细胞HPD的分布和HPD的光敏损伤部位密切相关。核仁对HPD的选择性结合也很明显。     

顺式CA1P对肿瘤细胞增殖和血管生成的影响

目的:研究顺式考布他汀二磷酸四钠(cis-CA1P)对体外培养肿瘤细胞增殖的作用,以及对鸡胚尿囊膜血管和离体培养的大鼠主动脉环血管生成的影响。方法:通过测定MTT评价药物对体外培养肿瘤细胞的作用;建立培养鸡胚尿囊膜模型、离体培养大鼠动脉环,研究顺式CA1P对血管生成的影响。结果:顺式CA1P对MGC-803人胃癌细胞、U937人急性髓系白血病细胞、A375人黑色素瘤细胞、HCT116人结肠癌细胞、MDA-MB-231人乳腺癌细胞、K562人白血病细胞具有显著的生长抑制作用,且呈明显的浓度依赖性;顺式CA1P呈剂量依赖性抑制鸡胚尿囊膜血管及离体培养的大鼠主动脉环血管生成,并可以抑制血管内皮细胞的运动及血管网络状结构形成。结论:顺式CA1P具有抑制肿瘤细胞增殖和抗血管生成的作用。     

人参皂苷Rb1、Rg1、Re对白血病细胞株KG1α增殖的影响

目的:探讨人参皂苷Rb1、Rg1、Re对急性髓系白血病细胞株(KG1α)增殖的影响.方法:取对数生长期KG1α细胞,分设人参皂苷Rb1、Rg1、Re组和常规培养组,以MTT比色法检测作用24h、48h、72h时对KG1α细胞增殖抑制作用,并计算Rb1的IC_(50)值,以此浓度为工作浓度,设常规培养组和处理组,台盼蓝计数法观察对KG1α细胞增殖的影响;流式细胞术测定细胞周期分布的变化.结果:MTT、台盼蓝计数显示人参皂苷单体Rb1、Rg1可抑制KG1α细胞增殖,呈浓度依赖性,以Rb1抑制效应最佳,于作用48h抑制率最高.台盼蓝计数显示人参皂苷单体Rb1-120μmol/L作用48h时抑制率达50.22%;流式细胞术结果提示,与对照组比较,Rb1-120μmol/L组G_2/M期KG1α细胞比例增加(P<0.05).结论:Rb1可抑制KG1α细胞体外增殖,其增殖抑制作用与将KG1α细胞阻滞于G_2/M期有关.     

视黄酸对胃癌细胞周期的调控

视黄酸(RA)能够抑制许多类型癌细胞生长、诱导细胞凋亡和调节细胞周期。本文研究了全反式视黄酸(ATRA)对人胃癌细胞的作用机理。结果表明,ATRA通过诱导细胞滞留在G_0/G_1期而显著抑制胃癌细胞生长,但ATRA不能诱导胃癌细胞凋亡;ATRA调控细胞周期与c-myc、磷酸化Rb水平的下调和p21~(WAF1/CIP1)、p53水平的上调有关,而cyclinD_1和CDK_4水平没有明显变化。在RA抗性细胞中,ATRA不能调节这些基因表达。结果证实,ATRA对胃癌细胞生长抑制与其诱导细胞滞留在G_0/G_1期有关,而与细胞凋亡的诱导无关,许多重要的、与周期相关的分子,包括cmyc、p21~(WAF1/CIP1、p53和Rb等参与细胞周期的调控。     

磺化壳聚糖对MCF-7的体外抑制作用研究

目的:研究磺化壳聚糖(SCTS)对体外培养的人乳腺癌细胞的增殖抑制和凋亡的作用.方法:用不同浓度磺化壳聚糖对体外培养人乳腺癌细胞MCF-7进行干预,MTT法检测SCTS对MCF-7细胞增殖的抑制作用;显微荧光法、流式细胞术检测细胞凋亡.结果:磺化壳聚糖抑制MCF-7细胞增殖,且呈时间、剂量依赖性;镜下可见凋亡细胞的形态学改变、FCM显示G0/G1期细胞增加,而S期细胞减少.结论:磺化壳聚糖可有效抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖,促进细胞凋亡.