双歧杆菌脂磷壁酸对化疗荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗肝癌H22荷瘤小鼠免疫的影响及其作用机制。方法双歧杆菌脂磷壁酸处理5-Fu化疗的H纶荷瘤Balb／c小鼠,MTT法检测NK细胞和CTL细胞杀伤活性;采用流式细胞仪检测荷瘤小鼠脾细胞中T亚群比例;用RT-PCR和Western Not方法分别检测荷瘤小鼠肿瘤组织Foxp3和TIM-3mRNA及蛋白的表达变化。结果荷瘤小鼠脾细胞中CD4^＋ CD25^＋Tmg比例高,并存在Foxp3和TIM-3 mRNA及蛋白的高表达,经双歧杆菌LTA和5．Fu处理后CD4^＋CD25^＋Tmg比例下降,Foxp3和TIM-3mRNA及蛋白表达水平也均呈下调趋势,但5-FU单独处理后的荷瘤小鼠脾细胞中CD4^＋细胞比例也减少,NK细胞和CTL杀伤率均降低,而双歧杆菌LTA处理后CD4^＋细胞比例,NK细胞和CTL杀伤率却明显增加。二者联合处理也能增加CD^＋细胞比例及NK细胞和CTL杀伤率。结论双歧杆菌脂磷壁酸联合5-FU可通过增强NK细胞和CTL杀伤能力,同时抑制TIM-3／TIM-3L途径,降低CD4^＋CD25^＋Tmg的免疫抑制活性,增强机体细胞免疫来提高化疗抗肿瘤效果,减轻化疗副作用,增强宿主对化疗的耐受性,从而提高抗肿瘤作用。     

Hs-exosomes致敏树突状细胞介导的抗卵巢癌免疫治疗的实验研究

目的检测卵巢癌细胞的外排小体Hs-exosomes致敏树突状细胞DC诱导T淋巴细胞CTL特异性杀伤卵巢癌细胞的能力。方法:分离卵巢癌细胞株2780释放的Hs-exosomes,将其致敏DC并与T淋巴细胞共培养,检测CTL体外细胞毒活性。结果:Hs-exosomes致敏DC激活CTL的抗肿瘤能力显著高于未致敏DC组。结论:2780细胞释放的Hs-exosomes致敏DC激活T淋巴细胞对肿瘤具有很强的杀伤作用。     

生物学效应分析——心理性应激和躯体性应激对鼠脾杀伤细胞影响的异同

阐明心理性应激和躯体性应激对鼠脾杀伤细胞影响的异同。应用Communication box系统分别使小鼠连续负荷心理性应激和躯体性应激3 d后,以51Cr释放法检测鼠脾NK、LAK、CTL细胞杀伤活性。负荷心理性应激和躯体性应激后,可导致鼠脾NK细胞、LAK细胞杀伤活性降低（P〈0.05,P〈0.01）;两者均可明显降低C57BL/6小鼠脾CTL细胞活性（P〈0.01）,躯体性应激比心理性应激对CTL细胞活性有较强的抑制作用。心理性应激和躯体性应激均可降低脾NK、LAK、CTL细胞杀伤活性。     

抗HIV-1细胞毒性T细胞克隆的体外功能研究

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)特异细胞毒性T细胞(Cytotoxic T-lymphocytes,CTL)是产生保护性免疫应答反应的重要宿主细胞。由于HIV-1特异性CTL免疫应答反应的异质性,CTL有效抗HIV-1病毒反应的功能机制仍然不明确。为了研究HIV-1特异性CTL抗病毒反应的功能特性,本研究应用分离培养的HIV-1特异性CTL克隆细胞株在细胞水平直接测定抗原肽刺激CTL产生的多种功能反应。选取12株具有不同HLA分子和抗原识别表位的HIV-1特异性CTL克隆细胞平行进行多种体外功能实验,包括杀伤活性实验、脱颗粒功能实验、胞内多重细胞因子测定实验,并对CTL的细胞毒性颗粒成分和耗竭分子表达进行定量分析。本研究发现HIV-1特异性CTL克隆细胞的杀伤活性与脱颗粒功能紧密相关,杀伤活性和脱颗粒功能又与多种细胞因子的生成水平和多重功能性相关。这些发现提示HIV-1特异性CTL克隆细胞的多种功能反应之间具有协同调节的机制特点。     

PEG10基因转染的树突状细胞疫苗对肝癌细胞的杀伤实验研究

目的:研究印记基因PEG10修饰的树突状细胞(DC)疫苗对肝癌细胞的杀伤效应,为肝癌的治疗提供新的策略。方法:将重组PEG10腺病毒rAd-PEG10感染HLA-A2阳性的人外周血来源的DC,制备PEG10基因修饰的DC疫苗,并在体外刺激HLA-A2阳性限制性的单个核细胞,酶联免疫斑点试验(Enzyme Linked Immunospot Assay, ELISPOT)和标准⁵¹Cr释放试验分别检测PEG10腺病毒感染的DC所诱导的特异性CTL活性,并检测对HLA-A2阳性的HepG2肝癌细胞的杀伤作用。结果:成功制备了PEG10基因修饰的树突状细胞(DC)疫苗,并在体外能有效诱导抗原特异性CTL效应,对HepG2肝癌细胞有明显的杀伤毒性。结论:PEG10基因修饰的树突状细胞能有效激发出特异性CTL应答,并对HepG2肝癌细胞有明显的杀伤毒性,为肝癌治疗提供了新思路。     

免疫共刺激分子OX40L对乙型肝炎核酸疫苗的免疫佐剂作用

[目的]为了进一步增强HBV DNA疫苗的免疫反应,本研究将共刺激分子OX40L 作为HBV DNA疫苗的分子佐剂免疫小鼠,旨在探讨共刺激分子OX40L对HBV DNA疫苗诱导体液和细胞免疫应答的影响.[方法]我们将HBV DNA疫苗(pcDS2)单独或联合共刺激分子质粒pOX40L免疫C57BL/6小鼠;分别在第0,2,4周进行免疫,在第6周检测抗-HBs IgG、IgG1和IgG2a,T淋巴细胞增殖指数,细胞因子表达水平和体内细胞毒性T淋巴细胞杀伤作用(CTL)等免疫学指标.[结果]pceDS2联合pOX40L免疫组小鼠的抗-HBs水平显著提高,抗-HBs IgG亚类以IgG2a占优;免疫小鼠的T淋巴细胞体外经乙型肝炎表面抗原(HBsAg)刺激后,联合免疫组刺激指数(SI)明显高于pcDS2组;联合免疫组CD4 + T淋巴细胞的IL-4和IFN-γ表达水平及CD8 + T淋巴细胞的IFN-γ表达水平显著升高;DNA疫苗免疫的各组小鼠,HBsAg特异性体内CTL高于对照组,其中联合免疫组小鼠的体内CTL杀伤作用最强.[结论]共刺激分子OX40L不仅能增强HBV DNA疫苗诱导特异性体液免疫应答,还能增强特异性细胞免疫反应,尤其增强体内CTL的杀伤活性,为HBV DNA疫苗的研究奠定了基础.     

重组腺病毒Ad-Mig基因治疗裸鼠肾细胞癌的实验研究

目的:研究腺病毒介导的小鼠Mig基因对BALB/c裸鼠肾细胞癌的抗肿瘤效果,探讨肾细胞癌治疗的新途径.方法:利用786-O肾癌细胞皮下注射BALB/c裸鼠建立肾细胞癌模型,应用携带Mig基因的重组腺病毒(Ad-Mig)直接进行瘤内注射治疗,观察裸鼠皮下肿瘤生长情况和荷瘤裸鼠的生存期;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CTL和NK的杀伤活性.结果:Mig基因能显著抑制荷瘤裸鼠皮下肿瘤的生长,并使鼠生存期明显延长,还能显著增强鼠脾细胞NK和CTL杀伤活性.结论:重组腺病毒Ad-Mig基因对鼠肾细胞癌有显著治疗效果.     

荧光素标记检测乙型肝炎病毒表面抗原特异性杀伤性T淋巴细胞方法的探讨

用绿色荧光前体化合物Calcein AM标记靶细胞,经过与杀伤性T淋巴细胞(CTL)效应细胞数小时的孵育,通过分析培养上清中的荧光强度检测CTL效应。通过对一系列标记条件的研究：不同浓度Calcein AM标记靶细胞、不同洗涤缓冲液、不同标记细胞浓度、不同洗涤次数、不同裂解液配方,确定Calcein AM荧光素标记法的最佳条件。用该方法检测乙型肝炎病毒表面抗原的DNA疫苗免疫Balb／c小鼠对P815S细胞的CTL效应,E／T比为10时,杀伤效率接近饱和,达到65％。通过荧光显微镜直接观察杀伤后的P815S细胞,细胞破裂程度与计算出的杀伤效率有一定相关性。     

肿瘤患者CD8+T细胞中CD28表达的研究进展

CD28与B7结合形成的共刺激信号是T细胞激活的第二信号,肿瘤患者CD8^＋T细胞上CD28分子在肿瘤免疫中发挥着重要作用。人体抗肿瘤免疫主要由CD8^＋T细胞介导,根据CD28的表达与否可将CD8^＋T细胞分为细胞毒T细胞（CD8^＋CD28^＋,CTL）和抑制性T细胞（CD8^＋C28^-,Ts）。CTL是体内杀伤肿瘤细胞的主要功能性细胞之一,当该细胞与肿瘤接触时,通过共刺激信号而被激活,发挥其对肿瘤细胞的杀伤作用;Ts在机体的免疫耐受中发挥作用。现就肿瘤患者CD8^＋T细胞上CD28的表达作一综述。     

HIV—1CN嵌合基因与IL—2基因共表达产物诱导产生CTL的实验研究

经脂质体介导共表达中国流行株HIV-1gag-gp120基因与IL-2基因的核酸疫苗质粒pGPIL-2转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光法鉴定其表达.取pGPIL-2免疫鼠脾细胞,检测pGPIL-2诱导的细胞毒性T细胞杀伤活性.杀伤实验结果证明,经基因免疫获得的CTL效应细胞,可杀伤HIV-1\{CN\}嵌合基因转染的靶细胞.提示pGPIL-2可有效诱导CTL的产生,该研究结果为进一步设计中国流行株HIV-1核酸疫苗提供了重要实验依据.     

荧光素标记检测乙型肝炎病毒表面抗原特异性T淋巴细胞方法的探讨

用绿色荧光前体化合物Calcein AM标记靶细胞,经过与杀伤性T淋巴细胞(CTL)效应细胞数小时的孵育,通过分析培养上清中的荧光强度检测CTL效应.通过对一系列标记条件的研究:不同浓度Calcein AM标记靶细胞、不同洗涤缓冲液、不同标记细胞浓度、不同洗涤次数、不同裂解液配方,确定CalceinAM荧光素标记法的最佳条件.用该方法检测乙型肝炎病毒表面抗原的DNA疫苗免疫Balb/c小鼠对P815S细胞的CTL效应,E/T比为10时,杀伤效率接近饱和,达到65%.通过荧光显微镜直接观察杀伤后的P815S细胞,细胞破裂程度与计算出的杀伤效率有一定相关性.     

HLA—G分子的最新研究进展

HLA-G属于一种非经典HLA-I类抗原,主要表达于母胎界面的滋养层细胞,迄今为止的研究表明,HLA-G分子可以与相应杀伤细胞抑制性受体（killer inhibitory receptor,KIR)作用,抑制NK细胞和CTL的杀伤作用。这可能是诱导和维持母胎耐受的一个重要机制。与经典I类分子类似,HLA-G的凹槽结构可结合九肽抗原,从而可能向TCR提呈抗原或直接与T细胞表面KIR结合,进而调控T细胞功能。     

CpG寡核苷酸联合热固化瘤苗对肝癌细胞Hca-F荷瘤小鼠的免疫治疗研究

目的探讨CpG寡核苷酸(ODN)联合热固化瘤苗的抗肿瘤作用。方法剥取肿瘤．称重并计算抑瘤率;MTT法测免疫小鼠CTL、Mψ和CTL细胞的体外杀伤活性;ELISA法测免疫小鼠血清中IL-10、IL-12水平。结果联合使用CpG ODN和热固化瘤苗可以诱导荷瘤小鼠的抑瘤作用,其抑瘤率与单独使用瘤苗或CpG ODN比较差异有显著性;联合使用CpG ODN和热固化瘤苗可以提高荷瘤小鼠NK、Mψ和CTL细胞的体外杀伤活性,与单独使用瘤苗组相比较,差异具有显著性,但与单独使用CpG ODN组相比较,NK、Mψ细胞的体外杀伤活性差异无显著性;联合使用CpG ODN和热固化瘤苗可以提高荷瘤小鼠血清中IL-12水平并降低血清中IL-10水平,与二者单独使用组比较差异都具有显著性。结论联合使用CpG ODN和热固化瘤苗能显著提高机体的免疫功能,尤其是特异性细胞免疫功能。     

热处理肿瘤细胞抗原负载树突细胞抗小鼠结肠癌效应

研究了热处理肿瘤细胞抗原负载骨髓来源的树突细胞（dendritic cell,DC）对结肠癌小鼠的治疗作用.将小鼠结肠癌细胞CT26热处理后超声破膜,以其细胞裂解液负载BALB/c小鼠骨髓来源的DC,观察DC诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL）杀伤活性;并将DC接种于荷瘤小鼠皮下,观察其对肿瘤生长的抑制作用及对荷瘤小鼠生存期的影响.发现致敏DC诱导的CTL对CT26肿瘤细胞具有显著的杀伤作用.用致敏DC免疫小鼠后,对小鼠肿瘤的生长具有显著的抑制作用,并能显著延长荷瘤小鼠的生存时间.热处理肿瘤细胞抗原负载的树突细胞对结肠癌小鼠具有显著的治疗效果.     

口蹄疫重组鸡痘病毒诱导猪特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性检测

目的:评价口蹄疫重组鸡痘病毒vUTAL3CP1诱导猪产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的能力。方法:用PCR方法亚克隆O型FMDVVP1基因C末端部分片段(第130～213AA)。将其插入真核表达载体pDisplay中,构建质粒pDisplay-mVP1。将pDisplay-mVP1转染PK15细胞,经3次G418加压筛选,并用RT-PCR和IFA鉴定,证明获得表达目的基因的PK15/pDisplay-mVP1细胞。最后,利用该细胞作为靶细胞,用LDH法检测口蹄疫重组鸡痘病毒vUTAL3CP1免疫猪的特异性CTL杀伤活性。结果:vUTAL3CP1免疫组在效靶比25∶1和50∶1时,CTL裂解活性分别达到42.84%±32.1%和61.94%±42.8%,显著高于灭活疫苗组与其它对照组(p<0.01)。结论:vUTAL3CP1可以诱导猪产生高水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性,为进一步的FMDV基因工程疫苗的研究奠定了基础。     

Fas介导细胞凋亡及相关免疫调节作用

Fas/CD95作为肿瘤坏死因子(TNF)/神经生长因子(NGF)分子受体超家族成员,在细胞凋亡及体内免疫调节方面发挥重要的作用。细胞在接收到经Fas传递的凋亡信号后,主要经胞浆caspase和线粒体两种途径引发细胞程序性死亡。Fas介导T/B淋巴细胞的凋亡,在这些细胞的早期分化发育和维持机体免疫平衡中起主要作用。CTL和NK等杀伤细胞也通过Fas-FasL介导的细胞凋亡而发挥对靶细胞的杀伤效应。因此,Fas-FasL系统在肿瘤、自身免疫性疾病、艾滋病等疾病过程中发挥重要的作用。     

CD4+T细胞在肿瘤免疫治疗中的作用

近年来,人们对CD4 T细胞在肿瘤免疫治疗中的作用给予了极大的关注,CD4 T细胞不仅可通过IFN-γ依赖性等机制直接杀伤肿瘤细胞,而且在CD8 T细胞的激活、记忆性的细胞毒性T细胞(CTL)应答的产生、维持以及促进其存活等过程中发挥着重要作用,同时激活CD4 T细胞和CD8 T细胞是免疫治疗的理想策略;另外,CD4 CD25 调节性T细胞(Treg细胞)可能被肿瘤表达的自身抗原所诱导,与肿瘤免疫耐受的维持和抗肿瘤应答的下调有关,被认为是免疫治疗失败的主要原因,抑制该细胞亚群可增强治疗性肿瘤疫苗的临床效果.现就CD4 T细胞在肿瘤免疫治疗中的作用的研究进展作一综述.     

IL-6和IL-2联合应用对LAK细胞诱导及其杀瘤活性的影响

淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)能广泛杀伤自身肿瘤、同种异体肿瘤。LAK细胞用于恶性肿瘤的过继免疫治疗是近年十分活跃的研究领域。IL—6是一种多功能细胞因子,在机体免疫系统、防御功能及造血调节中有重要作用。已有文献报道,IL—6可诱导IL—2受体表达,提高PHA刺激的细胞毒T细胞(CTL) 的杀瘤活性。本实验观察了IL—6和IL—2合用对人LAK细胞诱导及其杀瘤活性的影响。(1)在诱导LAK细胞克隆的含     

树突状细胞对小剂量化疗疗效影响的基础研究

目的 研究树突状细胞对小剂量化疗疗效的影响,探讨小剂量化疗的可能机制.方法 以615小鼠的前胃癌细胞株(MFC)造模,在体外用rmGM-CSF和rmIL-4从荷瘤小鼠骨髓细胞分化、诱导未成熟树突状细胞.分为4组:小剂量化疗组、树突状细胞组、小剂量化疗+树突状细胞组、对照组,以BAX试剂盒检测肿瘤凋亡情况.在瘤体内注射树突状细胞,计算抑瘤率、特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的增殖及其对肿瘤细胞的特异性杀伤作用.结果 小剂量化疗能诱导肿瘤细胞凋亡,BAX 基因产物表达增多.注射侧抑瘤率小剂量化疗+DC组、小剂量化疗组、DC组分别为100%、67.22%和57.98%.对侧抑瘤率小剂量化疗+DC组、小剂量化疗组、DC组分别为87.58%、59.69%和48.24%.体内凋亡肿瘤细胞致敏的DC能显著刺激T淋巴细胞增殖,其诱导的CTL对MFC有显著的杀伤作用,在效靶比为40∶ 1、20∶ 1、10∶ 1和5∶ 1时72 h杀伤率分别为87.64%、70.32%、34.63%和13.87%.并能特异性杀伤小鼠前胃癌细胞MFC(P<0.01).结论 小剂量化疗的机制与肿瘤细胞凋亡及免疫促进有一定的相关.     

汉滩病毒核蛋白CTL表位肽联合不同免疫佐剂的免疫学特性研究

目的:研究汉滩病毒(HTNV)核蛋白细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位肽联合不同免疫佐剂免疫C57BL/6小鼠后的免疫学特性,确立一种免疫效果良好的多肽免疫C57BL/6小鼠方案。方法:分别用氢氧化铝、弗氏佐剂和脂质体作为免疫佐剂与汉滩病毒核衣壳蛋白上的CTL表位肽段混合,经皮下注射免疫C57BL/6小鼠,共免疫3次,每次间隔2周;免疫结束后分离小鼠脾细胞,并分别采用ELISPOT和CTL杀伤试验进行检测。结果:HTNV核蛋白CTL表位肽联合弗氏佐剂加脂质体组小鼠脾细胞分泌IFN-γ能力和CTL杀伤能力优于其他各实验组(P0.01)。结论:HTNVCTL表位肽联合弗氏佐剂加脂质体免疫C57BL/6小鼠效果最佳,可为HTNV多肽疫苗的免疫策略提供参考。