北京市通州区冬季流感样病例病毒病原谱特征分析

目的了解北京市通州区冬季流感样病例病毒病原谱特征,为制定科学有效的防控措施提供依据。方法采用多重实时荧光PCR法,对2016年11月-2017年2月采集的265份流感样病例的咽拭子样本,检测人流感病毒、副流感病毒、人偏肺病毒、博卡病毒、人冠状病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、腺病毒的核酸。结果本次检测中,任一病毒阳性率为36.60%,其中单一病毒感染占96.91%,混合感染占3.09%。单一病毒感染中,人流感病毒检出率最高(31.70%),其次为鼻病毒(2.26%)。2016年11月-2017年2月,不同月份病毒的总检出率差异无统计学意义(χ~2=1.780,P=0.619)。从年龄组成看,不同年龄组人群病毒的总检出率差异无统计学意义(χ~2=1.691,P=0.639),19~60岁组人群检出的病毒种类多于其他年龄组。结论 2016年11月-2017年2月,北京市通州区引起流感样病例的病毒并非只有流感病毒,也有鼻病毒、偏肺病毒、腺病毒等其他常见呼吸道病毒,建议加强常见呼吸道病毒的监测。     

Vero 细胞流感病毒的大规模培养和纯化

目的：采用反应器技术以细胞为基质培养流感病毒,并探索其纯化工艺。 方法：采用5L反应器无血清条件下以Vero细胞为基质培养流感病毒,病毒收获后,经灭活、澄清,采用阴离子柱去除宿主DNA,亲和柱浓缩流感病毒,最后采用分子筛三步层析法进行纯化。结果：整个纯化工艺HA回收率达102%,蛋白降低率为95.3%,宿主蛋白降低率为99.77%,DNA的降低率为99.99%。结论 本研究成功建立了一种细胞流感病毒的纯化工艺。     

区带超速离心提纯流感病毒的初步探讨

在制备灭活流感疫苗中,采用两次蔗糖速率区带超离心从流感病毒感染的鸡胚尿液中提纯流感病毒是较简便、实用的方法,根据流感病毒分子特性设计了超离梯度并采用适当试验条件,获得了大量提纯流感病毒的初步结果。经血凝、电镜、蔗糖浓度、浮力密度等检验证明此方法是可行的。     

中国浙江地区儿童下呼吸道感染KI多瘤病毒的鉴定

呼吸道病毒感染可以导致大面积人群致病[1],近些年,临床上由于不明原因导致的小儿下呼吸道感染病例屡见不鲜,对于该类患儿一般采取抗生素混合治疗的方法,但是治疗效果不佳.尽管过去几年开展的多项研究已经鉴定到了很多的病原体,如腺病毒,鼻病毒属病毒,冠状病毒属病毒,呼吸道合胞体病毒,流感病毒,副流感病毒等.     

人3型副流感病毒滴度TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的利用TaqMan实时荧光RT-PCR(real-time RT-PCR)技术建立测定人3型副流感病毒培养物滴度的方法。方法根据人3型副流感病毒HN基因的保守序列设计引物及探针,采用10倍系列稀释的体外转录HN RNA为模板,建立定量标准曲线。验证方法的专属性、敏感性、重复性,并对人3型副流感病毒的病毒培养液滴度进行检测。结果建立的方法对HN RNA标准品的检出灵敏度为4.7 copies/μL,标准曲线相关系数为0.998,扩增效率为105%。标准品的实验内重复性CV均0.50%,实验间重复性CV3.60%。系列稀释HNRNA标准品在低温(-80℃)下保存3年后,所测标准曲线的斜率和截距差异均无统计学意义(P=0.673)。用该方法对人3型副流感病毒分离株LZ17、LZ1501和LZ1728进行检测,结果均为阳性,3个病毒分离株滴度检测重复性CV均10.00%;对7种呼吸道非人3型副流感病毒病原体检测均为阴性,表明该方法具有很高的专属性、敏感性和重复性。结论建立的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR技术可以快速、准确地对人3型副流感病毒滴度进行检测。     

经鼻蝶入路显微侵袭切除垂体腺瘤的临床疗效

目的:对比观察经鼻蝶显微技术下入路与经鼻蝶神经内窥镜下入路手术切除垂体腺瘤的疗效,探讨切除垂体瘤的良好辅助方法。方法:78例患者分别采用经鼻蝶显微技术下入路和经鼻蝶神经内窥镜下入路手术切除垂体腺瘤。结果:与经鼻蝶显微技术下入路比较,经鼻蝶神经内窥镜下入路手术者住院时间短、肿瘤全切除率高、鼻出血率低、术后并发症发生率低(P<0.05),但是经鼻蝶神经内窥镜下手术切除肿瘤时术中出血需显微镜下止血。结论:经鼻蝶神经内窥镜下手术入路是垂体腺瘤切除的良好手术切除垂体瘤的入路,如有条件也可将二者联合应用取长补短。     

抗流感病毒小RNAs研究进展

流行性感冒是一类由流感病毒引起的呼吸道传染病, 通过季节性流行或全球性爆发严重威胁着人类健康。目前防治流感的主要方法是疫苗和药物, 但存在神经毒性、肠胃副作用、易耐药等诸多限制因素。新的技术特别是小RNAs介导的RNA干扰(RNAi)技术, 因其具有高效、特异、快速等特点, 已成为抗病毒治疗的候选方法之一。随着近年来流感病毒的流行, 应用小RNAs抗流感病毒的报导越来越多, 其中靶向PA、NP和M2的PA-2087, NP-1496和M-950是目前报道的抑制流感病毒效果最好的siRNA。靶向不同流感病毒基因保守区域的siRNA具有更广泛的病毒毒株抑制效果, 靶向不同基因的siRNAs联合使用可取得更好的病毒抑制效果。文章就目前siRNAs和miRNAs在抗流感病毒方面的研究进展及RNAi治疗的前景和问题进行了综述。     

抗流感病毒小RNAs研究进展

流行性感冒是一类由流感病毒引起的呼吸道传染病,通过季节性流行或全球性爆发严重威胁着人类健康。目前防治流感的主要方法是疫苗和药物,但存在神经毒性、肠胃副作用、易耐药等诸多限制因素。新的技术特别是小RNAs介导的RNA干扰(RNAi)技术,因其具有高效、特异、快速等特点,已成为抗病毒治疗的候选方法之一。随着近年来流感病毒的流行,应用小RNAs抗流感病毒的报导越来越多,其中靶向PA、NP和M2的PA-2087,NP-1496和M-950是目前报道的抑制流感病毒效果最好的siRNA。靶向不同流感病毒基因保守区域的siRNA具有更广泛的病毒毒株抑制效果,靶向不同基因的siRNAs联合使用可取得更好的病毒抑制效果。文章就目前siRNAs和miRNAs在抗流感病毒方面的研究进展及RNAi治疗的前景和问题进行了综述。     

合成病毒:对流感病毒研究的贡献

流感病毒是一种单股负链分节段RNA病毒。完全以质粒为基础的反向遗传学技术的建立和发展解决了利用cDNA克隆人工合成流感病毒的难题和技术障碍,并逐渐成为研究流感病毒及生产流感疫苗的重要基础和手段。重点综述了流感病毒反向遗传技术20多年来的发展过程,以及以质粒为基础的反向遗传操作系统在对流感病毒的生命周期、致病性的研究和生产疫苗等方面的巨大贡献。     

亚洲甲型流行性感冒病毒的生物学性状研究 Ⅳ.动物感染实验

已有的文献报告证明雪貂是一种对流感病毒敏感的动物,但此种动物大量繁殖饲养比较困难。多数流感病毒株在小白鼠中连续传代可获得适应,到目前为止,它是唯一的能较广泛应用于流感病毒研究的动物,但适应毒株在小鼠中引起的疾病是病毒性肺炎,与人的流感在各方面都不相同。力此寻求新的对流感病毒敏感的实验动物是迫切需要的。故我们试验了8种实验室常用动物对新分离的亚洲甲型流感病毒的敏感性,除了观察这些动物在感染后的临床症状和抗体产生情况外,并用其鼻洗液或肺组织作病毒分离试验。本文即报告这些试验的结果。     

基于生物多样性的流感暴发研究

为揭示流感病毒在环境中的生存能力,本文提出了一种基于评价流感病毒的生物多样性指标,研究流感病毒大流行的规律。基于1902-2016年的99 861条流感病毒的血凝素蛋白质序列,提取40维特征向量,并采用层次聚类方法获取流感病毒每一年的最优聚类数。进而,基于生物多样性的评价指标,计算出每一年的种群熵值,以表达流感病毒的生物多样性和种群熵变化率,从而衡量流感病毒的变异速率。结合历史数据,通过种群熵评价流感病毒的生物多样性能够与已发生的流感暴发时间很好吻合。以上研究可为流感病毒的暴发预测提供依据。     

甲型H1N1流感病毒核酸荧光定量RT-PCR检测技术

目的:建立基于TaqMan荧光探针技术的甲型H1N1流感病毒实时定量RT-PCR方法。方法:分析H1N1流感病毒基因特性,根据新发甲型H1N1流感病毒突变基因片段设计检测引物和TaqMan荧光探针,建立荧光定量RT-PCR检测体系,体外转录制备RNA标准品,进行特异性、敏感性、重复性及盲样检测评价实验。结果:可特异性有效检测新发甲型H1N1流感病毒核酸,与H1～H16流感病毒基因无交叉反应;对RNA标准品的检测敏感性达103拷贝/μL;重复性实验中,阳性标准品Ct值变异系数(CV)10%,阴性标准品检测结果均呈阴性;12份盲样检测结果特异性好。结论:该荧光定量RT-PCR方法可作为甲型H1N1流感防控的病原快速诊断技术。     

A/H6N1亚型禽流感病毒致病性评估及与2009 A/H1N1亚型流感病毒在哺乳动物体内的遗传兼容性

目的探讨人、禽流感病毒在哺乳动物体内的遗传兼容性,为下一步研究H6亚型禽流感病毒重配和致病性变异的分子机制奠定基础。方法野鸭源A/H6N1亚型禽流感病毒A/Mallard/SanJiang/275/2007以101EID50～106EID50的攻毒剂量经鼻内途径感染小鼠,通过临床症状观察、病毒滴定和病理切片观察进行病毒学和组织学两方面检测对小鼠的致病性;同时,将此病毒与2009年A/H1N1流感病毒A/Changchun/01/2009(H1N1)混合感染豚鼠,分析两株病毒在哺乳动物体内的遗传兼容性。每天采集豚鼠鼻洗液并用噬斑纯化技术获得重配病毒,对获得的重配病毒进行全基因组序列的测定。结果 H6N1亚型禽流感病毒能直接感染小鼠,但对小鼠不致死。106EID50的攻毒剂量可有效感染小鼠,攻毒后第5天,小鼠表现出被毛较粗乱、活动减少、体重下降、呼吸急促的临床症状,但至攻毒后第10天开始康复,而对照组(MOCK)小鼠在14 d的观察期内无明显临床症状。病毒滴定结果表明,该病毒主要在小鼠肺脏和鼻甲骨中复制,病毒滴度可达104.5EID50/mL。病理学观察发现感染小鼠肺泡壁增厚,有大量炎性细胞浸润,纤维蛋白渗出并伴有轻微出血;在A/H6N1和A/H1N1混合感染豚鼠的重配实验中,经过三轮噬斑纯化从豚鼠鼻洗液中分离到6株重配病毒,说明A/H6N1亚型禽流感病毒与A/H1N1亚型流感病毒具有很好的遗传兼容性,能在豚鼠体内能发生重配。结论野鸭源A/H6N1亚型流感病毒无需适应就能够感染哺乳动物;该病毒与A/H1N1流感病毒具有很好的遗传兼容性,在哺乳动物体内能够发生基因重配,产生新的重配病毒,其公共卫生意义应引起高度关注。     

副流感病毒的研究进展

副流感病毒是一类有包膜的单股负链RNA病毒,属副黏病毒,是一种常见的易被忽略的呼吸道感染病原体,主要引起婴幼儿及儿童严重的下呼吸道感染,其致病性仅次于呼吸道合胞病毒(RSV).目前,对副流感病毒的感染,缺乏有效的治疗药物和病毒疫苗.因此,建立快速、敏感和特异的副流感病毒感染的诊断方法,研发新型抗病毒药物和安全有效的副流感病毒疫苗成为研究热点.本研究就副流感病毒的生物学特性、疫苗研究、防治及检测技术作一综述.     

反向遗传学技术在流感病毒研究和防控中的应用

流感病毒严重危害动物和人类健康.完全以质粒为基础的反向遗传系统的建立在流感病毒研究和防控领域是一个具有里程碑意义的事件.作为一个强有力的工具,反向遗传技术的应用拓宽和加深了流感病毒的基础和应用研究,在人流感和动物流感的防控中发挥了重要的作用.本文简要回顾了流感病毒反向遗传技术的发展历程,重点介绍了该技术在流感病毒致病性、跨宿主传播以及疫苗研制方面的研究进展.     

实时聚合酶链反应方法检测人偏肺病毒的比较研究

人偏肺病毒(the human metapneumovims,hMPV)是2001年首次从荷兰儿童的鼻咽部吸出物中分离出来的,为一种负链RNA病毒,初步被归属于副粘病毒科偏肺病毒属。hMPV和流感病毒、副流感病毒、腺病毒、鼻病毒、冠状病毒、人呼吸道合胞病毒(hRSV)一样可导致儿童、成人及免疫功能受损患者的急性呼吸道感染(ARTI)。在儿童病原体不明的ARTI中,hMPV占1．5％-10％。但是,该病毒在     

HRCT及后处理技术在诊断鼻区复合性骨折中的价值

目的:探讨CT高分辨率扫描及其后处理技术在鼻区复合性骨折诊断中的应用价值。方法:77例鼻区骨折病例采用横轴面和冠状面高分辨率扫描并进行多平面重组(MPR)、容积重建(VR),分别评价有无骨折并分型。结果:77例鼻区骨折病例中:单纯性鼻骨骨折14例,单纯性鼻旁骨骨折5例,鼻区复合性骨折58例。在58例鼻区复合性骨折中:横轴面诊断与HRCT+MPR+VR诊断不一致23例,冠状面12例。结论:横轴面、冠状面高分辨率扫描均应结合后处理技术才能避免在鼻区复合性骨折诊断中漏误诊。     

牛副流感病毒3型HN基因原核表达及间接ELISA方法建立

用构建的HJ-1株牛副流感病毒3型HN基因原核表达载体pQE30-HN,在E.coli XL1Blue中表达了重组HN蛋白,并用电洗脱方法从电泳凝胶中纯化了该重组蛋白作为包被抗原,建立了检测该病毒抗体的ELISA方法。建立的ELISA最佳工作条件分别是:抗原浓度为6μg/mL,血清稀释度为1∶50,封闭液为5%脱脂奶粉,封闭条件为37℃60min,酶标抗体工作浓度为1∶10 000;阳性临界值为OD450≥0.30。该方法与病毒中和试验符合率高达96%,板内和板间重复性试验变异系数均小于10%,重复性较好。该方法与牛冠状病毒、传染性鼻气管炎病毒和呼吸道合包体病毒阳性血清无交叉反应。应用该方法检测黑龙江省部分地区323份奶牛血清样本,对牛副流感病毒3型抗体血清阳性率为57.89%。该ELISA方法的成功建立为进一步研发ELISA试剂盒提供了技术基础。     

流感病毒诊断方法及试剂研究进展

流感病毒流行广泛、种类繁多、变异迅速,是人类最主要的健康威胁之一。在流感预防控制的不同环节,对流感病毒诊断试剂的灵敏度、特异性、简便性和使用成本有不同的要求。患者标本类型和采样质量对流感病毒诊断的准确性有较大影响。本文就当前国内外流感病毒诊断技术的研究现状和发展趋势进行了综述。     

反向遗传学技术在流感病毒减毒活疫苗研究中的应用进展

流感病毒是一种威胁人类健康的重要病原体,具有季节流行性,可以引起暴发性感染,对公共卫生及经济带来打击。接种疫苗是目前保护人类免受流感病毒感染的最佳医疗干预措施。安全性与有效性的平衡是疫苗研发追求的目标,减毒活疫苗则能够实现两者平衡,有望在预防免疫中发挥巨大作用。随着反向遗传学技术的成熟,其在流感病毒减毒活疫苗的研发中也发挥着越来越大的作用,使减毒病毒株的构建更加简便,减毒方法更加多元。本文主要就反向遗传学技术在流感病毒减毒活疫苗研发中的应用进行简要综述。