一种用于DAPI染色的方法--Steedman's wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedman's wax 包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法.Steedman's wax 作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5 μm的连续切片.Steedman's wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色.与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedman's wax 包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能.     

一种简单而快捷的半薄切片脱树脂新方法

目前,在HE染色、特殊染色或免疫组织化学染色研究方面多采用普通石蜡包埋切片,其切片厚度可薄达4μm,若更薄的切片,切割有一定的难度.对于各种染色而言,越薄的切片,细胞与组织结构越清晰,染色效果越好.环氧树脂(Epon)包埋的组织块不仅用于透射电子显微镜超薄切片的制备,也可用于光镜半薄切片的制备[1].经典的脱树脂的方法是将半薄切片置于氢氧化钠的无水乙醇饱和溶液中浸泡24h,然后再充分水洗.该法耗时长,容易脱片,本实验中摸索出一种简单而快捷的脱树脂的方法,现介绍如下.     

淋巴组织H.E染色"发灰"现象的纠正方法

在常规病理制片技术工作中 ,经常发现淋巴组织 (如淋巴结、鼻咽部组织及扁桃体等 )由于处理不当 ,造成切片染色后组织中间出现发灰现象 ,即镜下核浆染色模糊不清或组织成片不着色。这样将给临床病理诊断带来很大困难。为此 ,我们经大量实验 ,对原组织蜡块再切片后采用下述方法进行处理 ,收到了较好的染色效果。材料和方法1.标本来源 :选取 2 5例 H.E染色切片发灰的淋巴组织原蜡块再进行切片 ,切片厚 5μm。2 .切片的处理方法 :(1)将原蜡块所制切片浸入二甲苯 、 脱蜡各 5 min;(2 )无水酒精 、 浸洗各 2 min;(2 )用无水酒精乙醚等量 (1∶…     

碱性磷酸酶钙-钴法染色的不同包埋方法比较

目的探讨石蜡切片、冰冻切片及碳蜡(聚乙二醇)包埋切片在碱性磷酸酶染色中的应用,综合分析几种组织处理方法的优缺点,以便在病理诊断及科研工作中能找到更适合的碱性磷酸酶染色方法。方法取新鲜乳腺组织及肝组织,每份标本各取3块组织,根据包埋方法的不同,分为3组:石蜡切片碱性磷酸酶染色、冰冻切片碱性磷酸酶染色、碳蜡包埋切片碱性磷酸酶染色。结果 3组切片均可见黑色碱性磷酸酶的存在,其中肝组织内显示碱性磷酸酶呈黑色,沿胆小管分布;乳腺组织内显示碱性磷酸酶呈黑色沉淀弥漫分布于乳腺间质中。结论碳蜡包埋切片在碱性磷酸酶染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,并弥补了常规冰冻切片和石蜡切片染色的缺点和局限性,在病理诊断及科研工作中具有一定的应用价值。     

脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色的影响

目的:探讨脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色影响.方法:用不同脱钙液处理小鼠颅骨标本,组织切片后进行苏木素一伊红染色、甲苯胺蓝染色、醛品红染色以及免疫组织化学染色.结果:经过不同脱钙液处理后的颅骨组织切片组织结构保存完好,肥大细胞的组织化学染色(甲苯胺蓝和醛品红染色),及肥大细胞中胰蛋白酶的免疫组织化学染色清晰.结论:不同脱钙液(8%盐酸脱钙液、EDTA脱钙液、混合酸脱钙液)处理不影响鼻腔粘膜中肥大细胞的组织化学和免疫组织化学染色.     

三种不同脂肪染色方法的比较

目的探讨碳蜡(聚乙二醇)包埋技术、冰冻切片及饿酸染色在脂肪染色中的应用,综合比较几种方法的优缺点,以便在病理工作及科研工作中能找到更适合的脂肪染色方法。方法取新鲜脂肪组织及肝组织,每份标本各取3块组织,分为A、B、C三组:A组和B组标本分别进行碳蜡包埋切片和常规冰冻切片,油红O法染色;C组以饿酸浸染组织块后进行石蜡包埋切片及眦复染。结果 A组切片脂肪滴呈红色,细胞核呈蓝色;B组切片脂肪滴呈红色,细胞核呈蓝色;C组切片脂肪滴呈黑色。结论饿酸染色和碳蜡包埋技术在脂肪染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,弥补了常规冰冻切片脂肪染色的缺点和局限性,在病理检验及科研中具有一定应用价值。     

盐生肉质草本植物海马齿叶片石蜡切片简易方法

海马齿是海边盐生肉质草本植物,由于叶片的肉质化,传统石蜡切片制作路线不能制作出结构完整,效果较好的切片.本实验以传统的石蜡切片方法为基础,在固定方法选择,脱水时间控制,包埋温度,染色等方面做了适合海马齿叶片特点的改良,固定方法采用戊二醛固定液固定24 h,并洗脱;脱水每级梯度时间为1 h,包埋温度在100℃,染色方法采用固绿染色法.结果表明:采用这种改良的方法可以制作出染色清晰,组织结构完整的海马齿叶片切片.这对其它肉质化植物的石蜡切片制作有着借鉴作用.     

活性玫红染料对组织切片染色的观察

[目的]找到苏木精和伊红以外其它染色效果良好的组织切片染色剂。[方法]应用27种直接服装染料对小鼠肝脏组织切片进行染色效果观察。发现其中的活性玫红染料染色能够清晰显示中央静脉和肝细胞核等结构。再用活性玫红染料对小鼠心脏、肾脏、睾丸和肺组织切片进行染色效果观察,同时用伊红进行染色对比观察。[结果]活性玫红染料用蒸馏水溶解后即可使用,配制简单,在5 min之内完成。对心脏、肾脏、睾丸和肺组织切片染色后,肾小囊腔、生精细胞等结构清晰可辨,与HE染色结果类似。心肌横纹也可辨认。活性玫红处理的肝脏、肾脏和睾丸组织切片染色清晰度,高于伊红的染色效果。[结论]找到活性玫红染料这种染色效果良好的红色组织切片染色剂,其制备简单,来源丰富。     

冰冻切片的H&E和LFB染色技术的优化及其在自身免疫疾病中的应用

该文旨在探讨基于冰冻切片样品进行苏木素–伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和快蓝(luxol fast blue,LFB)染色方法的优化及其在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)组织病理分析中的应用。取正常及EAE建模后的C57BL/6小鼠脊髓样品各5份,每份脊髓样品一分为二,分别制成冰冻切片和石蜡切片样品,通过设置不同优化条件对这两组切片进行HE和LFB染色,比较两组切片染色的结果。石蜡切片经过HE染色和LFB染色后细胞的形态结构和组织结构清晰,冰冻切片HE染色和LFB染色后细胞结构清晰度几乎和石蜡切片一致,进一步将该方法应用于分析β-arrestin2基因敲除对于小鼠EAE发生中的病理变化,发现能够很好地重复出基因敲除加重EAE疾病这一现象。冰冻切片染色优化后,基于冰冻切片进行HE染色和LFB染色可以达到石蜡切片类似的效果,并且实验过程简洁快速,大大缩短了实验时间,提高了效率,可以较好地应用于分析自身免疫疾病病理变化,该优化方法将在自身免疫疾病特别是多发性硬化动物模型的研究中有广泛的应用。     

树脂包埋半薄切片在视神经组织学和免疫组织化学研究中的应用

目的探讨半薄切片在视神经组织学和免疫组织化学研究中的应用,寻找一种视神经形态学研究和疾病诊断的有效方法。方法健康Sprague-Dawley大鼠视神经分别行树脂包埋制成半薄切片与石蜡包埋制成石蜡切片,分别采用HE、甲苯胺蓝染色及髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫组织化学方法染色,光学显微镜下观察并比较半薄切片与石蜡切片染色结果的差异。结果石蜡切片HE和甲苯胺蓝染色均显示视神经髓鞘不着色,MBP免疫组织化学染色示MBP阳性着色较重,着色较紊乱,髓鞘着色不清晰。半薄切片HE及甲苯胺蓝染色均显示髓鞘呈环形,着色清晰,颜色对比鲜明;MBP免疫组化染色结果可见髓鞘呈环形,非特异性染色不明显,阳性对比显著,可清晰显示髓鞘结构。结论半薄切片在视神经组织学和免疫组织化学研究中优于石蜡切片,可用于视神经疾病的诊断和研究。     

动物组织石蜡切片H-E染色的快速方法

动物组织石蜡切片及染色技术是普通生物学及动物学实验中必需的实验技能.经过多年的积累和摸索,对组织切片中的苏木精-尹红( hematoxylin - eosin,H-E)染色技术进行了改进,取得了良好的教学效果和实验效果.     

果蝇胚胎石蜡切片制作方法的改良

探索一种不用在卵壳上手工打孔、适用于果蝇胚胎石蜡切片制作的方法。实验前期对果蝇胚胎进行渗透化处理,后期用琼脂糖、明胶、石蜡3种包埋辅佐剂对胚胎进行聚集、包埋、切片,最后进行HE及PASM染色。渗透化处理后的胚胎用琼脂糖或石蜡聚集并包埋后所制切片HE染色均显示胚胎形态结构正常,背景干净,而琼脂糖聚集法所制切片PASM染色背景呈灰色,明胶聚集法所制切片HE染色和PASM染色背景均显杂色且胚胎出现形变。3种包埋辅佐剂中,琼脂糖和石蜡均适于果蝇胚胎结构的保存,石蜡聚集法所制切片2种染色背景均无杂色,因此最适合做包埋辅佐剂。渗透化处理和石蜡聚集法结合后的改良方法适合于大样本且高脂含量的果蝇胚胎石蜡切片的制备。     

常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片的制作

目的探索一种结合常规染色与特殊染色的多种肌组织混合切片的制作方法。方法取实验动物狗的平滑肌、心肌、骨骼肌。所有组织均采取单一包埋制作蜡块。另取心肌组织块,制作显示心肌闰盘的特殊块染标本的蜡块。将四种蜡块切片的蜡带进行组合粘片,同时粘在一张载玻片上。对除心肌闰盘外的三种肌组织切片进行苏木素伊红染色。再将所有切片浸入二甲苯,最后共同封片。结果获得常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片。可在一张混合切片上分别观察到平滑肌、心肌、骨骼肌、心肌闰盘四种结构。不同标本的形态结构保存完好,对比非常清晰。结论采取单一包埋与不同蜡带的组合粘片法,过程简单,操作容易,适合制作常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片。     

植物树脂半薄切片染色方法的改进

以双子叶植物棉花的幼根、幼茎、叶、胚珠和单子叶植物玉米茎为实验材料,制作树脂半薄切片,对样品染色方法等进行了改进,将蕃红-固绿染色、苏木精-伊红染色、氯化铁-苏木精染色方法系统应用于植物树脂半薄切片制备中,获得了结构完整、染色清晰的棉花各器官和玉米茎半薄切片,建立了一套适合于植物树脂半薄切片制作的染色方法。     

脂肪冰冻切片锇酸快速染色介绍

脂肪冰冻切片锇酸快速染色介绍＠梁化印￥解放军第２５２医院病理科脂肪冰冻切片锇酸快速染色介绍梁化印（解放军第２５２医院病理科，保定０７１０００）脂肪染色方法较多，传统的方法步骤繁琐需漂染，不易掌握。近年来，国内将微波应用于免疫组织化学、石蜡切片及特殊染色等方...     

两种切片方法检测肝糖原染色效果的比较

目的比较石蜡和冰冻两种不同切片用于检测牛蛙肝糖原的效果。方法采用石蜡和冰冻两种切片方法制作牛蛙肝脏切片,高碘酸希夫氏（periodicacid-Schiff＇s,PAS）染色法对肝糖原进行组织化学染色,光密度分析糖原含量。结果PAS染色显示肝糖原为紫红色或红色颗粒,冰冻切片中糖原颗粒明显大于石蜡切片,光密度分析显示,石蜡切片中糖原流失明显,与冰冻切片相比,糖原流失了约28％。结论两种切片均可用于糖原检测,冰冻切片制作环节较少、耗时短且染色过程中糖原不易流失。     

病理组织芽生菌感染的特殊染色方法分析

目的 分析比较显示真菌的4种特殊染色方法,旨在寻找一种显示芽生菌并适合于临床病理诊断的染色方法.方法 对病理石蜡组织芽生菌感染标本进行PAS染色、PASM染色、抗酸染色及爱尔新蓝染色(pH2.5),光学显微镜下观察染色效果.结果 HE染色切片上见多数圆形、厚壁、棕色的硬壳小体,PAS染色呈红色,PASM染色呈黑色,抗酸...     

微小组织冰冻快速制片技术

目的摸索提高微小组织冰冻快速制片质量的方法。方法针对小组织冰冻切片中常常出现组织切完、多粒组织切片不全、冰晶、染色不均匀等问题,采用预先制作冷冻平台、快速冷冻等方法来制作优质的冰冻切片。结果组织铺平可使组织切片完整,快速冷冻可减少冰晶形成,使组织结构更清晰,及时固定和加温染色可使细胞核染色更鲜艳,核、质对比明显。结论组织铺平、速冻、固定、染色等都是提高微小组织制片质量的关键。     

一种用于DAPI染色的方法Steedman＇s wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedrnan‘s wax包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法。Steedrnan‘s wax作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5μm的连续切片。Steedrnan‘s wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色。与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedrnan‘s wax包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能。     

介绍一种改良的伊红染色液

在常规HE染色过程中,要求切片核浆对比要分明,细胞浆染色质量的好坏亦至关重要。伊红是细胞浆常用的染色剂,其配制方法较多,多用水溶性伊红染色液,在染色过程中发现水溶性伊红染色液易出现着色过淡、核浆共染及染色后的切片置一段时间后易褪色等现象,给观察切片的组织形态带来一定困难。我们根据伊红的化学性质和染色理论,结合实际应用情况,对传统伊红染液的配制方法进行了一些改良,收到了理想的染色效果。