低氧时肾上腺髓质素对人胚肺成纤维细胞胶原合成和转化生长因子β1表达的影响

观察低长因子β1(TGF-β1)表达的影响.体外培养人胚肺成纤维细胞,分常氧和低氧24、48、72 h组,用[3H]-脯氨酸掺入法反映细胞总胶原合成和分泌,ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1活化蛋白质含量.低氧24、48、72 h,细胞总胶原合成和分泌分别是常氧组的125.88%和124.74%、183.44%和165.73%、152.55%和172.93%(P＜0.01).低氧24、72 h,ADM(10-7mol/L)组细胞胶原合成分泌减少了19.24%和20.76%(P＜0.01)、9.57%(P＜0.05)和10.98%(P＜0.01);低氧48 h,ADM(10-9、10-8、10-7mol/L)组胶原合成分泌分别降低了5.57%(P＜0.05)和9.19%(P＞0.05)、11.09%(P＜0.01)和14.49%(P＜0.05)、35.41%(P＜0.01)和18.57%(P＜0.05).低氧48 h,细胞培养液中TGF-β1上升了24.17%(P＜0.05),加入ADM(10-7mol/L),TGF-β1比对照组下降了17.53%(P＜0.05);低氧72 h,ADM(10-7mol/L)组TGF-β1下降了19.49%(P＜0.05).低氧时ADM通过阻碍成纤维细胞胶原合成而影响低氧性肺血管改建及损伤组织修复过程,ADM与TGF-β1可能通过相互拮抗,共同调节成纤维细胞胶原的生成.     

低氧对血管内皮细胞肾上腺髓质素基因转录的影响

为研究低氧条件对肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)基因表达的影响,本文观察了低氧引起血管内皮细胞ADM基因转录的变化,并探讨ADM在缺血缺氧性疾病机制中的作用.1 材料和方法(1)HUVEC细胞的培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC(美国芝加哥大学Pritzker医学院Gewertz BL教授惠赠),用含20%小牛血清的M199培养基置于37℃,5%CO2培养箱内贴壁生长,待长满培养瓶培养面后用PBS冲洗2次,加入0.25%胰蛋白酶消化、传代.     

肾上腺髓质素受体及其信号转导

肾上腺髓质素（Ａｄｍ）是新近发现的一种生物活性多肽,在体内有着广泛的分布,参与机体多种生理功能的调节。Ａｄｍ可与两种受体结合：ＣＧＲＰ受体和Ａｄｍ特异受体。Ａｄｍ与体结合后,通过ｃＡＭＰ－ＰＫＡ等信号转导通路发挥舒长血管、降低血压、利尿利钠和抑制细胞增殖等作用。     

慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺组织肾上腺髓质素-2的变化

目的：研究新的小分子生物活性肽肾上腺髓质素-2（ADM2／IMD）及其受体在慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺组织中的变化和可能的作用。方法：SD大鼠随机分成2组（n=10）：正常对照（NC）组和低氧四周（4H）组;放射免疫法测定血浆和肺组织ADM2／IMD和肾上腺素髓质素（ADM）蛋白水平;逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法测定肺组织ADM2／IMD、ADM及其受体（CRLR,RAMP1,2,3）mRNA表达;免疫组化法测定ADM2／IMD在肺细小动脉的定位表达：结果：①4H组平均肺动脉压（mPAP）、右心室与左心室加室间隔重量比[RV／（LV＋S）]高于NC组（P均〈0．01）。②4H组血浆和肺组织匀浆ADM水平分别为NC组的2．3倍和3．2倍（P均〈0．01）,ADM2／IMD水平分别比NC组高89．6％和45．0％（P分别〈0．01、〈0．05）。③4H组肺组织ADM2／IMD与ADMmRNA表达高于NC组（P分别〈0．01、〈0．05）,CRLR和RAMP1mRNA表达显著低于NC组（P均〈0．01）,而RAMP2和RAMP3mRNA表达水平两组间差异无显著性。①ADM2／IMD主要在大鼠肺细小动脉内皮细胞及血管外膜表达。结论：ADM2／IMD与ADM相似,与大鼠慢性低氧性肺动脉高压病理过程密切相关;ADM2／IMD及其受体CRLR／RAMP1基因表达和／或蛋白合成、代谢的改变可能参与了大鼠慢性低氧性肺动脉高压的发生发展.     

肾上腺髓质素对大鼠损伤性心肌肌浆网功能的改善

通过观察下述五个指标,评价肾上腺髓质素(adrenomedullin,Adm)对大鼠损伤性心肌肌浆网功能的改善程度左心室压力最大变化速率(±dp/dtmax)、肌浆网钙摄取和释放及钙泵活性.皮下注射异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO,69μmol/kg体重)制备大鼠心肌损伤坏死模型.摘取心脏后用Adm灌流,观察左心室压力最大变化速率(±dp/dtmax);制备并提纯心肌肌浆网(sarcoplasmicreticulum,SR)膜,测定SRCa2+摄取和释放速率、SR钙泵活性和钙通道蛋白～3H-ryanodine受体的最大结合量.结果发现,5×10-5mol/LAdm灌流能使ISO损伤的大鼠心脏左室±dp/dtmax分别增加16.9%(2?135±281vs1?980±302)和29.2%(1?375±267vs1?064±355,均P<0.05);SRCa2+摄取和释放率分别增加23.0%(15.0±1.4vs12.2±1.2)和43.5%(6.6±1.0vs4.6±0.6,均P<0.01);SRCa2+-ATPase活性和～3H-ryanodine受体最大结合量(Bmax)分别增加24.2%(P<0.01)和42.2%(P<0.05).提示Adm对ISO诱导的大鼠心肌损伤具有保护作用,其机制可能与Adm增加SRCa2+-ATPase活性、增加～3H-ryanodine所致SRCa2+摄取和释放升高有关.外源性给予Adm对损伤心肌可能具有临床治疗作用.     

血管钠肽抑制低氧对大鼠心成纤维细胞内钙浓度升高的作用

为了观察血管钠肽(vasonatrinpeptide,VNP)对低氧作用时心成纤维细胞增殖的影响,将分离纯化乳鼠心成纤维细胞,随机分为4组对照组、低氧组(2%～3%)、VNP组(10－8～10－6mol/L)和VNP+低氧组。用MTT比色法、～3H-TdR掺入法观察细胞增殖情况,采用激光共聚焦方法研究VNP对细胞内钙浓度(［Ca     

肾上腺髓质素（13－52）降压机制的探讨

本工作在整体和离体大鼠模型上观察研究了肾上腺髓质素（１３－５２）［ＡｄＭ（１３－５２）］的降压机制,发现ＡｄＭ（１３－５２）的降压作用可被一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的竟争性桔抗剂Ｌ－ＮＧ－硝基－精氨酸（ＬＮＮＡ）部分抑制;ＡｄＭ（１３－５２）的舒血管作用依赖于血管内皮并可被ＬＮＮＡ抑制,且具有剂量效应关系,ＬＮＮＡ的这种效应可被Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）逆转;用亚甲蓝（ＭＢ）阻断血管内的环－磷酸鸟苷酸（ｃＧＭＰ）,则导致ＡｄＭ（１３－５２）的舒血管作用消失;放免测定显示ＬＮＮＡ可以降低血管内ｃＧＭＰ含量,而ＡｄＭ（１３－５２）则使后者含量增加,这一现象在ＡｄＭ（１３－５２）与ＬＮＮＡ合用时消失。实验结果提示,ＡｄＭ（１３－５２）的舒血管降血压效应与ＮＯ有关,可能是通过ＮＯ介导的。     

肾上腺髓质素（13—52）降压机制的探讨

本工作在整体和离体大鼠模型上观察肾上腺髓质素（１３－５２）［ＡｄＭ（１３－５２）］的降压机制,发现ＡｄＭ（１３－５２）的降压作用可被一氧化氮合酶（ＮＯＳ）竞争性拮抗剂Ｌ－Ｎ－硝基－精氨酸？（ＬＮＮＡ）部分抑制;ＡｄＭ１３－５２）的舒血管作用依赖于血管内皮并可被ＬＮＮＡ抑制,且具有剂量效应,ＬＮＮＡ这种效应可被Ｌ－精氨酸（ＬＡｒｇ）逆转;用亚甲蓝（ＭＢ）阻断血管内的环－磷酸鸟苷酸（ｘＧＭＰ）,则导致     

肾上腺髓质素对缺血再灌注后肾功能的保护

目的:探讨肾上腺髓质素(Adrenomedullin,ADM)对缺血再灌注后肾功能的保护作用。方法:在注射外源性ADM蛋白后,建立急性缺血再灌注肾损伤模型,观察ADM对肾功能和氧化损伤指标肌酐(Creatinine,Cr)、尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)、髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)影响。结果:与I组比较,II组的Cr、BUN、MPO、MDA大幅升高(P0.05),表明急性肾损伤造模成功。与II相比,III组BUN、MPO、MDA明显下降(P0.05),表现出一定的保护作用。结论:ADM对缺血再灌注损伤后的肾功能具有一定的保护作用,其机制可能与减少中性粒细胞浸润,抑制膜脂质的氧化,促进微血管重生修复有关。     

肾上腺髓质素对大鼠肠系膜微血管和微淋巴管的作用

应用活体显微电视录象技术,观察上腺髓质素对大鼠肠系膜微血管微淋巴管的作用及其对去甲肾上腺素,内皮素作用的是结果表明,ＡＤＭ直接扩张肠系膜各级微血管和向一淋巴管,拮抗ＮＥ和ＥＴ引起的微血效及微循环血流液态的异常改变。ＡＤＭ的上述作用可被一氧化氮生成抑制剂Ｎ＾９－ｎｉｔｒｏ－Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅ（Ｌ－ＮＮＡ）显著抑制。     

一种新发现的降压活性多肽—肾上腺髓质素（adrenomedullin）

肾上腺髓质素是最近发现的一种新的活性多肽,它广泛分布于机体多种组织中,具有扩张血管、降低血压、抑制内皮素和血管紧张素Ⅱ释放等作用。该活性多肽在正常机体血压调控及高血压发病中的作用正在研究中。     

新发现的哺乳动物心血管肾脏调节因子--肾上腺髓质素2

肾上腺髓质素(adrenomedullin ,ADM)是一种多功能的心血管活性肽,具有强大的舒张血管、降低血压、利钠利尿和抑制血管平滑肌细胞增殖等广泛的生物学效应,在心血管疾病中具有重要的保护作用。最近,YoshioTakei等从河豚的cDNA文库中分离出5种编码ADM样多肽的基因,将其命名为ADM1～5 ,并进一步将ADM1/ 4 / 5分为一组,ADM2 / 3分为另一组。并且发现河豚ADM1与哺乳动物的ADM是直向同源物(ortholog ,即指如把一个基因比作一个个体,那些起源于同一祖先,在不同生物体中行使同一功能的基因)。他们利用河豚肽的序列信息分析鉴定哺乳动物的A…     

肾上腺髓质素在糖尿病视网膜细胞高表达的研究

探讨肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)在糖尿病视网膜病变(Diabeticretinopathy,DR)发病中的作用。Sprague-Dawley雄性大鼠尾静脉注射链脲佐菌素造模,以血糖测定和尿糖水平测定进行筛选,正常对照组尾静脉注射等量枸橼酸钠缓冲液。成模后继续饲养4周,取出眼球视网膜组织,连续冰冻切片,用免疫组织化学SABC法染色观察各组大鼠视网膜RPE细胞AM的表达情况。糖尿病大鼠成模前,两组动物的体重、血糖和尿糖检测结果间无显著性差异(P>0.05)。成模后4周,糖尿病组与正常组大鼠体重、血糖和尿糖数值差异有显著性意义(P<0.01)。AM在正常组大鼠视网膜节细胞层及内核层均有表达,正常组大鼠视网膜AM的光密度值为76.3±5.3,单位面积AM阳性细胞数为(4.5±1.1)×103/mm2。糖尿病大鼠视网膜内RPE细胞肾上腺髓质素表达显著增强,糖尿病大鼠视网膜RPE细胞AM的光密度值为105.7±11.9,单位面积AM阳性细胞数为(17.9±2.3)×103/mm2。两组相比,差异具有显著性(P<0.01)。AM在糖尿病大鼠视网膜RPE细胞表达量增加很可能是DR发生、发展的重要因素。     

重组肾上腺髓质素表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达

为探索通过体内表达肾上腺髓质素（adrenomedullin,AM）治疗高血压和慢性心衰的可能性,本实验构建了重组AM真核表达载体,并在无内源笥AM表达的K562细胞株上进行了体外表达实验。实验中采用RT－PCR技术扩增AM cDNA片段,并将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1真核表达质粒,构建成含AM cDNA的重组质料pcDNA3.1AM。用脂质体介导将该质粒转染培养的人白血病细腻K562株,在转染的细胞中,用RT－PCR检测证实有AM mRNA存在;用班点免疫分析方法检测转染细胞的培养液上清,证实有AM多肽存在,表明本实验中构建的重组pcDNA3.1AM载体能够在哺乳类细胞中表达AM。     

自发性高血压大鼠和Wistar-Kyoto大鼠心血管组织肾上腺髓质素和肾上腺髓质素原N-末端20肽的水平

本工作观察了自发性高血压大鼠 (SHRs)和Wistar kyoto (WKY)大鼠心肌和主动脉肾上腺髓质素 (a drenomedullin ,ADM)和肾上腺髓质素原N 末端 2 0肽 (proadrenomedullinNterminal 2 0peptide ,PAMP)的水平。以放射免疫分析方法测定血浆、心肌和主动脉ADM含量。用竞争性定量逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法测定心肌和主动脉ProADMmRNA含量。结果发现 ,SHRs心肌和主动脉ProADMmRNA水平分别比WKY大鼠高 66 7%和 73 % (均P <0 0 1)。SHRs血浆、心肌和主动脉ADM ir含量分别较WKY大鼠高 2 9%、76 7%和 79% (均P <0 0 1)。SHRs血浆、心肌和主动脉PAMP ir水平分别较WKY大鼠高 42 5 % (P <0 0 1)、47 2 % (P <0 0 1)和 2 7 3 % (P <0 0 5 )。另外 ,SHRs的ADM和PAMP的比值较WKY大鼠明显增高 (心肌和主动脉分别为 2 0± 0 2 5vs 1 64± 0 3和 2 2± 0 18vs 1 5 6± 0 2 8)。结果提示 ,SHRs心肌和主动脉ProADM基因表达上调 ,ADM和PAMP水平升高 ,但二者升高的比例不一致。SHRs的ADM和PAMP升高不一致的病理生理意义有待进一步研究     

肾上腺髓质素在正常大鼠脑中的分布一免疫组化及原位杂交分析

目的验证大鼠脑内是否存在ADM及其mRNA。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200-250g,应用免疫组织化学法和原位杂交组织化学法检测正常大鼠脑内ADM及其mRNA的表达情况。结果在大鼠脑内ADM及其mRNA阳性细胞主要表达在大脑皮质、海马结构、齿状回、丘脑、室旁组织、脉络丛、室管膜细胞、基底节、血管内皮细胞,其中脉络丛、室旁组织、丘脑为高表达区,其次为大脑皮质、海马。在大鼠大脑内ADMmRNA的表达与ADM阳性细胞的表达相一致。结论ADM及其mRNA在大脑内广泛表达,提示ADM在中枢神经系统内具有重要的作用。     

肾上腺髓质素对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的调制

应用全细胞膜片钳技术研究了肾上腺髓质素 (ADM )对豚鼠心室肌细胞L 型钙电流 (ICa ,L)的影响及其信号传导机制。结果发现 :ADM ( 1～ 10 0nmol/L)浓度依赖性抑制ICa,L(P <0 0 5 ) ,并可被ADM特异受体阻断剂ADM2 2 52 ( 10 0nmol/L)完全阻断。用蛋白激酶A特异拮抗剂H 89( 10 μmol/L)预处理 ,对ADM抑制ICa ,L的作用无影响。但用蛋白激酶C (PKC)特异性拮抗剂PKC19 36 预处理 ,可完全阻断ADM的抑制效应 ;而PKC特异性激动剂PMA则可以模仿ADM的抑制效应 (P <0 0 5 )。上述结果提示 :ADM作用于特异性ADM受体可浓度依赖性地抑制豚鼠心室肌细胞ICa ,L,而此作用可能是PKC介导的。     

肾上腺髓质素在正常大鼠脑中的分布-免疫组化及原位杂交分析

目的验证大鼠脑内是否存在ADM及其mRNA。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200-250g,应用免疫组织化学法和原位杂交组织化学法检测正常大鼠脑内ADM及其mRNA的表达情况。结果在大鼠脑内ADM及其mRNA阳性细胞主要表达在大脑皮质、海马结构、齿状回、丘脑、室旁组织、脉络丛、室管膜细胞、基底节、血管内皮细胞,其中脉络丛、室旁组织、丘脑为高表达区,其次为大脑皮质、海马。在大鼠大脑内ADMmRNA的表达与ADM阳性细胞的表达相一致。结论ADM及其mRNA在大脑内广泛表达,提示ADM在中枢神经系统内具有重要的作用。     

人肾上腺髓质素原N端20肽受体——MrgX2的分离鉴定

肾上腺髓质素原N端20肽[proadrenomedullin N-terminal 20 peptide,PAMP（1～20）/PAMP-20]及其类似物PAMPl2（二者均来源于肾上腺髓质素前体肽prepro-adrenomedullin,prepro-ADM）,是具有舒张血管、降低血压效应的内源性多肽,其降压效应通过抑制交感神经末梢和肾上腺嗜铬细胞分泌儿茶酚胺而实现。     

颈动脉注射肾上腺髓质素对去缓冲神经大鼠最后区神经元自发放电的影响

在63只切断两侧缓冲神经的麻醉sprague-Dawley大鼠,应用细胞外记录的电生理学方法,观察颈内动脉注射肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)对最后区(area postrema,AP)神经元自发电活动的影响。实验结果如下:(1)在记录到的78个自发放电单位中,颈内动脉内注射AM(0.3 nmol/kg),引起其中47个单位的自发放电频率由2.99±0.24增加到4.79±0.29 spikes/s(P<0.001),20个单位自发放电频率由3.24±0.46下降至1.97±0.37 spikes/s(P<0.001),另外11个单位自发放电频率无明显改变;平均动脉压和心率无明显变化。(2)颈内动脉注射降钙素基因相关肽受体阻断剂CGRP_(8-37)(3 nmol/kg)不能改变AM对自发放电的兴奋效应;(3)颈内动脉注射L-精氨酸(30 mg/kg)可减弱AM对自发放电的兴奋效应。以上结果提示,AM对最后区神经元有兴奋作用,此作用不是由降钙素基因相关肽受体介导,但可被NO前体L-精氨酸所减弱。