酵母浸出粉在奈瑟脑膜炎双球菌培养中的比较观察

目的探索A群,C群奈瑟脑膜炎双球菌(简称流脑)多糖疫苗生产中奈瑟脑膜炎双球菌培养的最适培养基。方法在培养基配制中用增减酵母浸出粉的方法制备相应的培养基,8h收菌,通过菌体的收获量并参考多糖量来确定较好的培养基配比。结果不同培养基用于A群、C群奈瑟脑膜炎菌培养8h后均有收获,其中2号培养基(酵母浸出粉)培养的菌体的浓度明显高于1号和3号培养基,它们之间有显著性差异(P<0.05)此种培养基能提高奈瑟脑膜炎双球菌的产量。结论添加酵母浸出粉的培养基可作为A群、C群奈瑟脑膜炎双球菌培养的最适培养基。     

我国脑膜炎奈瑟氏菌不同血清群菌株DNA G Cmo1％含量的测定

本文采用热变性温度法Tm测定了我国自行分离和建立的脑膜炎奈瑟氏菌10个血清群菌株的DNAG Cmol％,其含量范围在50.3～52.4之间。结果表明10个血清群菌株的DNAG Cmol％含量符合脑膜炎奈瑟氏菌种的特性。数据的建立为进一步脑膜炎奈瑟氏菌的标准化提供了可靠的依据。     

流脑防治的微生态学的实验研究

本文初探人咽部正常菌群对Ａ群、Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌生长的影响。结果显示,调查人群中２４１７％的人咽部存在可抑制Ａ群脑膜炎奈瑟氏菌生长的细菌;一般健康者、流脑病人密切接触者和流脑病人之间差异不显著。对４１株抑制Ａ群脑膜炎奈瑟氏菌生长的细菌的检测可见,有２３株（占５６１０％）对Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌生长有抑制作用;有５株菌对８种实验标准致病菌的生长都有抑制作用,表明人咽部正常菌群对致病菌拮抗作用的非特异性和多重性。部分人咽部正常菌群细菌的代谢产物亦可抑制Ａ、Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌生长     

肺脓疡患者血培养中检出脑膜炎奈瑟菌

脑膜炎奈瑟菌又称脑膜炎球菌（Meningococcus）,是流行性脑脊髓膜炎的病原菌。人类是脑膜炎奈瑟菌的唯一宿主。2004年10月从肺脓疡患者血培养中检出脑膜炎奈瑟菌1例,现将结果报道如下。     

分子分型技术用于流脑疫情的同源性分析

目的应用多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)技术和脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术对大连市2014年4月同一工地两起流脑疫情得到的脑膜炎奈瑟氏菌株进行分子分型图谱分析,了解各菌株之间的亲缘关系。方法对病例的脑脊液标本进行脑膜炎奈瑟菌PCR分群,对另一病例和所有密切接触者分离菌株进行多位点序列分型(MLST)试验和脉冲场凝胶电泳(PFGE)鉴定实验。结果疑似病例标本PCR结果为脑膜炎奈瑟氏菌A群阳性,另一病例和所有密切接触者分离到的菌株PFGE图谱基本相同,表明来自同一克隆系。多位点序列分析结果为ST7。结论两起疫情分离到的菌株型别之间具有高度的同源性,该病原菌类型为ST7的A群脑膜炎奈瑟氏菌。     

PCR结合酶切-序列比对法鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株

目的用PCR结合酶切-序列比对法对B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行鉴定。方法用玻片凝集法对不同来源的15株B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行初步检定,再用PCR结合酶切-序列比对法对上述15株菌株进行进一步鉴定,即用PCR结合酶切法扩增菌株的唾液酸转移酶sia D基因并对PCR产物进行酶切后,用BLAST软件将PCR产物测序结果与Gene Bank中原始sia D序列比对。结果 15株菌株玻片凝集结果均为阳性;15株菌株的PCR产物片段大小均为460 bp;TaqⅠ酶切后,13株菌株的酶切产物片段大小仍为460 bp,其PCR产物测序比对结果与B群脑膜炎奈瑟菌原始sia D序列同源性均达到99%;其余2株酶切产物片段大小约200 bp,与C群脑膜炎奈瑟菌sia D原始基因序列同源性分别为98%和99%。结论 15株菌株经PCR结合酶切-序列比对法鉴定,13株为B群脑膜炎奈瑟菌菌株,2株为C群脑膜炎奈瑟菌菌株;该方法可准确鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株。     

1例流行性脑脊髓膜炎病例的菌群鉴定及分析

目的对2015年河南省1例流行性脑脊髓膜炎(流脑)病例的菌群进行分子分型鉴定及分析,为河南省流脑预防和控制工作提供科学依据。方法对患者脑脊液和血液标本以及37例密切接触者咽拭子标本进行细菌培养,提取DNA进行PCR及多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)分析。用ELISA检测密切接触者血清标本的脑膜炎奈瑟菌A群和C群抗体水平。结果患者和1例密切接触者分离的菌株经细菌培养及PCR鉴定,分别为C群和B群脑膜炎奈瑟菌。MLST分型显示,患者和密切接触者标本分别为ST4821型和ST5664型,两者均为ST4821克隆群。37例密切接触者脑膜炎奈瑟菌A群和C群抗体阳性率分别为91.89%和21.62%,平均抗体质量浓度分别为6.50μg/m L和1.73μg/m L。结论引起流脑疫情的致病菌为C群ST4821型脑膜炎奈瑟菌,当地C群平均抗体含量偏低,需加强流脑A+C疫苗的接种,有效预防流脑的暴发。     

不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖产量的影响

目的 探索不同酸水解酪蛋白对W135群与Y群脑膜炎奈瑟菌(脑膜炎球菌)荚膜多糖产量的影响。方法 分别以NaCl质量分数为37%和14%的酸水解酪蛋白作为有机氮源配制改良半综合高盐培养基和低盐培养基,利用全自动细菌发酵罐分别在两种培养基里培养W135群和Y群脑膜炎球菌,比较这两种菌株在两种培养基中的生长时间、收获液菌密度( A 600 nm 值)、收获液去菌体后与去复合多糖后上清中的荚膜多糖含量,以及纯化后的精糖产量;比较高盐培养基收获液及其2倍稀释液中不同终含量的十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide, CTAB)溶液对多糖沉淀效果的影响。结果 W135群与Y群脑膜炎球菌在两种培养基中的培养时间差异无统计学意义( P >0.05),但高盐培养基收获液的菌密度、收获液去菌体后上清液中的多糖含量均高于低盐培养基收获液,差异有统计学意义( P < 0.05),而高盐培养基收获液纯化后的精糖产量低于低盐培养基,差异有统计学意义( P <0.05)。高盐培养液2倍稀释后,在CTAB终体积分数为0.04%时,W135群与Y群脑膜炎球菌多糖全部沉淀,而未稀释高盐培养液即使CTAB终体积分数提高到0.14%,依然也不能完全沉淀 W135群与Y群脑膜炎球菌多糖。结论 不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎球菌的生长密度和荚膜多糖产量有影响,用CTAB溶液沉淀荚膜多糖时需控制收获液盐含量。     

脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的标准化研究

目的用干粉原料完全替代以消化液为主要原料的培养基配方,实现脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的标准化生产。方法用筛选改良的酪蛋白酸水解物干粉替代50%盐酸酪蛋白水解液,以改良酵母浸出粉替代酵母透析液和酵母浸出粉,适当调整培养基配方,改进并稳定培养基制备工艺,确定适宜质量指标,并对各项质量指标数据进行分析。结果改进后的脑膜炎球菌多糖疫苗干粉培养基有效地降低了批间差异,各项质量指标均符合脑膜炎球菌培养要求,培养基的各项质量指标更加稳定可控,在生产中得到了良好、稳定的生长结果。结论用干粉原料完全替代脑膜炎球菌多糖疫苗培养基中的消化液和酵母透析液是成功的,同时改良的干粉培养基进一步明确了配方标准,使原料准备、制备工艺、质量指标控制更加标准化,有效提高了培养基质量,有利于规模化生产,促进了脑膜炎球菌多糖疫苗生产用培养基的标准化工作。     

利用雌激素构建小鼠淋病奈瑟菌感染模型

目的探讨用雌激素构建淋病奈瑟菌感染小鼠模型的方法。方法淋病奈瑟菌WHO-A接种经皮下注射苯甲酸雌二醇和真皮下埋植尼尔雌醇片（雌三醇）预处理的雌性ICR小鼠,小鼠阴道拭子接种T-M选择培养基培养分离淋病奈瑟菌,取小鼠阴道分泌物涂片染色观察淋病奈瑟菌感染情况,比较两种雌激素对小鼠淋病奈瑟菌感染的差异。结果与对照组相比,苯甲酸雌二醇小鼠体内淋病奈瑟菌有短时间的定植,而尼尔雌醇组与对照组无差异。结论雌激素（尤其是雌二醇）有利于淋病奈瑟菌在小鼠阴道内的定植。     

产紫杉醇内生真菌EFY-21的鉴定与生物学特性研究

利用PCR技术克隆了产紫杉醇内生真菌EFY-21的18S rDNA序列,通过同源性分析,初步确定该菌与拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)有较高的同源性,相似性为99%。为了进一步了解EFY-21的有关生物学特性,分别选用PDA、PSA、查氏、玉米粉琼胶、牛肉膏蛋白胨5种培养基,按照常规方法培养,用十字法测量菌落直径;同时选用查氏培养基为基本培养基,分别观察不同碳源葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、果糖、可溶性淀粉,不同氮源KNO3、Ca(N03)2、(NH4)2SO4、NH4N03、(NH4)2HPO4、蛋白胨、尿素,不同培养温度10,15,20,25,28,30,37℃,不同pH值4,5,6,7,8,9对内生真菌菌丝的影响。试验结果表明:EFY-21在PDA培养基上生长最快,生长状况最好;供试的碳氮源中,对EFY-21菌丝生长影响的大小顺序为葡萄糖甘露醇果糖麦芽糖可溶性淀粉;蛋白胨KNO3Ca(N03)2NH4N03(NH4)2HPO4(NH4)2SO4尿素;最适培养温度为25～30℃;最适pH为5～7。     

遮光胁迫下外源NO对盆栽长春花土壤养分含量及幼苗生长特征的影响

为探究遮光胁迫下施加外源NO供体（硝普钠,SNP）对土壤养分变化和长春花（Catharanthus roseus）幼苗生长的影响,设置4种处理（全光照生长为对照、外施SNP、遮光、遮光+外施SNP联合处理）,分析盆栽土壤中C、N、P养分含量和土壤理化指标,测定幼苗的株高、节间距、茎直径、叶长、叶宽、叶面积、全株鲜（干）质量。结果表明：遮光和外施NO联合处理下,土壤含水量、土壤pH和土壤有机碳含量显著增加（P<0.05）,而土壤中全氮、碱解氮、全磷和速效磷含量增加但不显著,土壤C/N和C/P值升高,且C/N值达到显著水平（P<0.05）;相关性分析结果表明：土壤pH与有机碳含量呈显著正相关性（P<0.05）,土壤有机碳含量与株高、叶片鲜质量之间呈显著正相关（P<0.05）。说明施加外源NO能促进遮光胁迫下土壤pH升高,改变土壤中有机碳含量,增加C/N值,改善土壤肥力,促进叶片生长发育,增加长春花的生物量,为长春花的科学平衡施肥和生物碱含量的积累提供一定依据。     

b型流感嗜血杆菌培养及细菌溶解产物制备工艺研究

目的研究b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)培养条件及细菌溶解产物制备工艺。方法比较Hib在传统培养基和改良培养基的生长情况,优化改良培养基在生物反应器中对Hib培养条件(p H值、温度、溶解氧等),研究最佳菌体细胞破碎方法及细菌溶解产物纯化制备工艺。结果改良培养基可代替传统培养基用于Hib的生产培养,且Hib在p H7.4、温度为36℃、溶解氧为25%的改良培养基中,生长迅速,菌体产量最高。高压匀浆破碎法的破碎效果明显优于超声波破碎法,破碎效果达到98%以上,纯化后的细菌溶解产物的多糖含量、总氮含量、蛋白质含量、核酸含量及细菌内毒素含量均符合《中华人民共和国药典》(三部)2010版中b型流感嗜血杆菌结合疫苗的质量标准。结论初步建立了b型流感嗜血杆菌培养及细菌溶解产物制备工艺。     

水曲柳和蒙古栎光合特性和生长对不同氮素形态的响应

为了探讨不同氮素形态对树木幼苗生长和光合特性影响的差异,及其对不同氮形态的适应策略,以水曲柳（Fraxinus mandshurica）和蒙古栎（Quercus mongolica）1年生幼苗为研究对象,通过盆栽试验施加硝态氮、铵态氮和有机氮,采用了双因素方差分析,确定氮素形态和树种对生长和光合指标的影响及其交互作用,采用Spearman秩相关分析生长指标和光合指标的相关性。结果表明：氮素形态处理和树种及其交互作用对幼苗的生长和生理指标的影响均达到显著水平（P<0.05）,氮素形态对光合和生长的影响在2树种间存在显著差异（P<0.05）。有机氮处理组较对照组和其他氮素形态处理组更有利于蒙古栎的生长;3种氮素形态处理组的水曲柳生长指标均显著高于对照组（P<0.05）,但是氮素形态处理间水曲柳的生长指标差异不显著（P>0.05）。通过对水曲柳、蒙古栎的生长和生理指标的相关性分析,发现水曲柳的光合指标间呈显著正相关关系（P<0.05）,但光合指标与叶片氮质量分数的相关性不显著（P>0.05）,生长指标高生长量与光合指标光补偿点、光饱和点、暗呼吸速率均呈显著...     

沼泽红假单胞菌J001产辅酶Q10摇瓶发酵条件优化

本试验对沼泽红假单胞菌J001菌株250ml摇瓶发酵辅酶Q10条件进行了优化。结果表明其最佳初始pH值为6.5-7.5,温度为28-31℃,摇床转速100 r min-1,摇瓶装液量为200ml,接种量达10%时可直接进入对数生长期;碳源以NaAc较好,氮源以(NH4)2SO4和NH4Cl较好,磷源用量对考察指标影响不明显;用中心组合设计响应曲面法对碳氮源用量进行了优化,当NaAc浓度为5.39（g l-1）,(NH4)2SO4浓度为0.385（g l-1）即碳氮比为14/1时,对菌胞生长最有利;当NaAc浓度为5.70（g l-1）,(NH4)2SO4浓度为0.365（g l-1）即碳氮比为15.6/1时,对辅酶Q10产量最有利。     

N添加对西南亚高山红桦林根系分泌物及其介导的养分转化过程的影响

目前缺乏对根系分泌物通量以及相关生态后果对不同氮(N)沉降水平响应方向和幅度的深入理解,该研究以西南亚高山典型的红桦(Betula albosinensis)林为研究对象,通过野外原位N添加试验模拟不同氮沉降水平(对照组,0 kg·hm^-2·a(-1);低氮处理,25 kg·hm^-2·a(-1);高氮处理,50 kg·hm^-2·a(-1)),分析了红桦林根系分泌物C输入通量及其介导的根际土壤养分循环过程对不同N添加水平的差异化响应,试图揭示不同N添加处理对红桦根系分泌物C输入通量及其介导的土壤养分转化过程的影响。结果表明：(1)N添加显著抑制了红桦林根系分泌物C输入速率(其中低氮(N25)条件下单位根生物量根系分泌速率均值降低约14.87%)和年C输入通量(低氮条件下降低了约45.01%)(P<0.05),其高氮处理的抑制效应更强。(2)N添加显著抑制了红桦林N矿化速率及其相关的微生物胞外酶活性(P<0.05),并显著降低了其根际效应;N沉降显著抑制了根系分泌物C输入通量及其介导的土壤养分转化过程,并且这种抑...     

Dried nutrient media for the cultivation of pneumococcus and meningococcus

Dried synthetic nutrient medium for the cultivation of meningococci and the accumulation of their biomass has been developed. The kinetics of the culture growth, changes in pH and in the content of dissolved oxygen in the medium during prolonged controlled processes of the cultivation of meningococci in a bioreactor with the use of this medium have been studied. The stable physico-chemical properties and composition of the polysaccharide-protein complex isolated from the biomass of meningococci grown in the above-mentioned medium have made it possible to use it for the preparation of the samples of group B meningococcal vaccine. In addition, dried semi-synthetic nutrient medium for the accumulation of pneumococci without the necessity of introducing blood or serum into the medium has been developed. As regards its biological properties, this newly developed medium make it not inferior to meat media, containing blood or serum, and ensures good yield of biomass.     

丛枝菌根真菌和施氮量对茶树生长、矿质元素吸收与茶叶品质的影响

采用盆栽法研究了不同施氮水平下接种丛枝菌根（arbuscular mycorrhiza,AM）真菌Glomus mosseae对茶树生长、矿质元素吸收及茶叶品质的影响。结果表明,适量的施氮利于AM真菌的侵染和菌根发育,当施氮过量时则会抑制菌根发育。在不同施氮水平下接种AM真菌均提高了茶树地上部、地下部和总干物质量,其中又以接种AM真菌同时施氮量为0.53g kg-1的茶树总干物质量最大,为对照的1.63倍。不同矿质元素受AM真菌和氮肥的影响不一致,在一定施氮水平下接种AM真菌可提高茶树叶片中N、P、K、Ca、Zn和Fe含量,降低Mn和Cu含量;显著增加根中N、P、K、Mg和Zn含量,降低Mn含量,施高浓度的氮（1.06 g kg-1）显著降低了根系Ca和Fe含量。不同施氮水平下AM真菌处理可增加茶叶中可溶性糖和可溶性蛋白含量,提高了茶叶中茶多酚、咖啡碱、氨基酸和水浸出物含量,降低酚氨比,显著改善茶叶品质。本实验条件下,茶树施氮量为0.53 g kg-1时,接种AM真菌改善茶叶品质的效果最佳。     

Effect of C/N ratio and aeration on the fatty acid composition of heterotrophicChlorella sorokiniana

The effect of the carbon to nitrogen (C/N) ratio of the medium and the aeration rate on the lipid content and fatty acid composition ofChlorella sorokiniana was investigated using heterotrophic, batch culture. Both parameters had a significant effect. A C/N ratio of approximately 20, was found to indicate a change from carbon to nitrogen limitation forC. sorokiniana. Cell lipid content was at a minimum at this value and increased at both higher and lower C/N values. Low C/N ratios favoured a high proportion of trienoic fatty acids at the expense of monoenoic acids. Aeration enhanced cell growth, fatty acid yield and the synthesis of unsaturated dienoic and trienoic fatty acids, but reduced cell lipid content. The results demonstrate that the fatty acid composition and lipid content of heterotrophically-grown microalgae can be favourably manipulated by varying culture conditions.     

Influence of the growth phase of Neisseria meningitidis on the accumulation of antigens cross-reacting with human antigens in the culture

The content of N. meningitidis antigens with epitopes cross-reacting with human antigens was studied in the dynamics of the meningococci cultivation. The absence of these antigens in the culture in the middle of the exponential phase of growth and their presence in the culture at the end of the stationary growth phase of growth were shown. Thus the expediency of using the culture in the middle of the exponential phase of growth for obtaining meningococcal (serogroups A, B and C) vaccines was demonstrated. The trend, found to be promising for the development of immunologically safe vaccines which contained no antigens having common epitopes with human antigens, was determined.