过氧化物酶活性测定

过氧化物酶是卟啉环中含有铁的蛋白质,存在于所有的谷物中,与谷物的呼吸作用有关,是谷物品质变化的指标之一。通常测定过氧化物酶活性的方法重复性不好。本文报道我们对下述方法的改进和发展,实际应用证实,改进的方法操作方便灵敏度高,结果准确。一、方法原理有过氧化物酶存在时,愈创木酚能被过氧化氢氧化成四愈创木酚:     

萝卜贮藏期过氧化物酶活性及同工酶谱研究

为了研究萝卜贮藏期过氧化物酶的活性变化和作用 ,利用愈创木酚法和聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测在贮藏期萝卜过氧化物酶的活性及同工酶谱 ,实验结果表明 :不同品种的萝卜在不同贮藏时期其过氧化物酶活性及同工酶谱存在差异。贮藏时间越长过氧化物酶活性越高 ,同工酶谱酶带增多。萝卜色素含量越高 ,POD活性也越高 ,因此 ,在萝卜贮藏期有可能过氧化物酶在清除细胞内H2 O2 方面起主要作用     

愈创木酚法测定植物过氧化物酶活性的改进

“过氧化物酶活性的测定”是植物生理学呼吸作用一章中必做的实验内容,其目的是让学生掌握愈创木酚法测定植物过氧化物酶活性的原理和方法,了解过氧化物酶在植物生长发育和抵抗不良环境中的作用。但是,在教学中,我们发现按照几种植物生理学实验指导书中的方法（白宝璋和汤学军1993;高俊风2006;王学奎2006）测定的植物过氧化物酶活性明显偏低。     

碳素和氮素对Coriolus versicolor胞外酶分泌的影响

采用单因子相互比较法研究了不同碳素和氮素对彩绒革盖菌胞外漆酶,愈创木酚氧化酶,多酚氧化酶,锰过氧化物酶等木素降解酶分泌的影响,结果淀粉作碳源,干酪素作氮源有利于漆酶的分泌,麦芽粉作碳源,酵母膏作氮源有利于愈创木酚氧化酶和多酚氧化酶的分泌,淀粉作碳源,玉米粉作氮源有利于锰过氧化物酶的分泌。     

青蒿过氧化物酶的克隆及其在体外对青蒿素生物合成的影响

用RACE方法从青蒿(Artemisia annua L.)高产株系001中克隆了一个过氧化物酶.将此基因在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS细胞中进行原核表达得到重组蛋白(APOD1),表达的蛋白分别以抗坏血酸、愈创木酚为底物进行过氧化反应,结果显示,APOD1催化愈创木酚的活力是抗坏血酸的1.8倍左右,由此表明,克隆的APOD1类属于植物经典过氧化物酶(第三大类过氧化物酶).经与其他植物过氧化物酶同源性比较分析,推测APOD1的氨基酸序列与白羽扇豆(Lupinus albus)、辣根菜(Armoracia rusticana)、小麦(Triticum aestivum)、烟草(Nicotiana tabacum)和蕃茄(Lycopersicon esculentum)的一致性分别为42.0%、36.2%、38.9%、33.6%和32.8%.Northern杂交分析表明,此基因在青蒿的根、茎和叶中均有表达.加入APOD1至青蒿细胞提取液有利于青蒿酸向青蒿素的生物转化,但APOD1并不能直接以青蒿酸作为氧化底物.     

抗坏血酸过氧化物酶活性测定的探讨

抗坏血酸过氧化物酶（ascorbateperoxi－dase,EC1.11.1.11,ASP）是以抗坏血酸为电子供体的专一性强的过氧化物酶［3,8］,主要存在于植物叶绿体和胞浆中［3,7］,一般用愈创木酚作为电子供体测定酚特异性过氧化物酶（PPOD）的方法不能测出其大部分活性。它和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氨酶（CAT）、单脱氢抗坏血酸还原酶（MDARD）、双脱氢抗坏血酸还原酶（DHARD）以及谷联甘肽还原酶（GR）一起构成了活性氧清除系统中的酶系统,旦ASP目前被认为是叶绿体中清除H。0。的关键酶「’,‘j。迄今为止,国内还没有文献具体报…     

耐过氧化氢的锰过氧化物酶对三苯甲烷类染料的脱色

[目的]从一株白腐菌Trametes sp.SQ01中获得一种新型的锰过氧化物酶,探讨该酶的底物特异性和对过氧化氢的耐性,以及其对三苯甲烷类染料的脱色能力.[方法]通过丙酮沉淀和DEAE-cellulose 52柱层析法纯化锰过氧化物酶.利用UV-2010紫外可见分光光度法研究锰过氧化物酶对过氧化氢的耐性,同时,用紫外可见分光光度计对三苯甲烷类染料脱色效果进行分析.[结果]通过两步纯化,获得了均一性的锰过氧化物酶.该酶的最适pH和温度分别是4.5和70℃,在pH 3.0-8.0时,酶活相对稳定.该酶在二价锰离子存在下能够氧化2,6-二甲氧基苯酚、愈创木酚、2,2＇-连氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉磺酸)和过氧化氢等化合物,同时也能作用二价锰离子.在与这些底物反应中,最适底物为过氧化氢(Km为3.7 tmmol/L).该酶具有抗过氧化氢漂白能力,锰过氧化物酶与高浓度的过氧化氢(2.5 mmol/L)作用60 min后仍能保持70％的活性.在所测试的染料中,锰过氧化物酶对结晶紫的脱色率最高达到65.8％.二价锰离子和过氧化氢对锰过氧化物酶脱色能力的影响进行研究,与孔雀绿相比,锰离子和过氧化氢对活性艳蓝脱色的影响很小.[结论]Trametes sp.SQ01锰过氧化物酶对过氧化氢的耐受性,以及对三苯甲烷类染料的高效脱色能力表明该酶在染料脱色降解方面有着广阔的应用前景.     

枸杞过氧化物酶的提取工艺优化及其酶学特性研究CSCD

枸杞为常用“药食同源”中药材,在加工、贮藏、运输等过程中易发生褐变,严重影响枸杞的外观和质量。前期研究发现枸杞中具有较高的过氧化物酶(peroxidase, POD)活性,而过氧化物酶在植物的酶促褐变中发挥着重要作用。为更好地控制枸杞酶促褐变的发生,本研究采用响应面法对枸杞过氧化物酶提取工艺进行优化,对枸杞过氧化物酶的性质进行了研究。结果显示枸杞过氧化物酶最佳提取工艺为料液比1∶3,浸提时间5 h,缓冲液pH为6.0,枸杞过氧化物酶活力为(5 148.59±50.00)U,与模型预测值接近,拟合性好,表明所得响应面模型可以很好地预测和分析枸杞过氧化物酶提取工艺条件。枸杞过氧化物酶最适温度为50℃,最适pH为6.0,金属离子Na~+、Ca~(2+)、K~+、Zn~(2+)、Cu~(2+)和柠檬酸对枸杞过氧化物酶起激活作用,抗坏血酸和亚硫酸能抑制枸杞过氧化物酶活性;该酶酶促反应动力学符合米氏方程,过氧化氢浓度一定时,酶对愈创木酚的K_m=21.52 mmol/L,V_(max)=115.47 U/mL;愈创木酚浓度一定时,酶对H_(2)O_(2)的K_m=1.41 mmol/L,V_(max)=148.81 U/mL。本研究可为后续枸杞加工过程中褐变的控制提供参考。     

青蒿过氧化物酶的克隆及其在体外对青蒿素生物合成的影响

用RACE方法从青蒿(Artemisia annua L.)高产株系001中克隆了一个过氧化物酶。将此基因在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS细胞中进行原核表达得到重组蛋白(APOD1),表达的蛋白分别以抗坏血酸、愈创木酚为底物进行过氧化反应,结果显示,APOD1催化愈创木酚的活力是抗坏血酸的1.8倍左右,由此表明,克隆的APOD1类属于植物经典过氧化物酶(第三大类过氧化物酶)。经与其他植物过氧化物酶同源性比较分析,推测APOD1的氨基酸序列与白羽扇豆(Lupinus albus)、辣根菜(Armoracia rusticana)、小麦(Triticum aestivum)、烟草(Nicotiana tabacum)和蕃茄(Lycopersicon esculentum)的一致性分别为42.0％、36.2％、38.9％、33.6％和32.8％。Northern杂交分析表明,此基因在青蒿的根、茎和叶中均有表达。加入APOD1至青蒿细胞提取液有利于青蒿酸向青蒿素的生物转化,但APOD1并不能直接以青蒿酸作为氧化底物。     

出芽短梗霉胞外酸性漆酶

通过愈创木酚法平板检测10株出芽短梗霉,发现5株菌能够分泌胞外多酚氧化酶,反应最适pH在2.0左右,均属于酸性多酚氧化酶。菌株NG的酶活最高,达110 U/mL。添加H2O2、EDTA以及过氧化氢酶不显著影响菌株NG胞外酶活,表明NG分泌的多酚氧化酶中不含有锰过氧化物酶（MnP）和不依赖Mn2＋的过氧化物酶（MiP）,属于漆酶（Lac）。     

一种具有热滞活性的女贞叶质外体过氧化物酶

采用浸出离心法从女贞叶中分离的质外体蛋白,约占叶片可溶蛋白的1.63%,其中的质外体过氧化物酶占叶过氧化物酶(POD)总酶活性的3.14%.以凝胶过滤和离子交换层析分离纯化得到一分子量为62 kDa的质外体过氧化物酶,其对H202的表观km值为1.3 mmol-L-1,表观Vmax值为189.33 U·mg-1(蛋白);对愈创木酚的表观Km值为1.78 mmol-L-1,表观Vmax值为215.26U·mg-1(蛋白).在蛋白质浓度为10mg·mL-1时,其热滞活性为0.332℃.此种蛋白的酸性氨基酸含量和亲水性氨基酸含量较高,类似于沙冬青和黑麦的抗冻蛋白.     

深山含笑叶过氧化物酶对双酚A清除效应研究

深山含笑是一种常绿乔木,具有较好的园林观赏价值,其叶片在每年春天新旧叶交替时,会陆续凋落而不能实现其经济价值;我们前期研究发现深山含笑成熟叶片具有较高的过氧化物酶活性,而过氧化物酶在内分泌干扰物生物酶法降解途径中发挥着重要作用。为充分开发深山含笑叶的经济价值,提高资源的利用效率,我们对深山含笑叶过氧化物酶进行了纯化并初步研究了其性质;在此基础上,进一步研究了深山含笑叶过氧化物酶在降解环境污染物双酚A上的特性。结果显示,经过非离子表面活性剂(吐温-80)抽提、双水相萃取、DEAE-Sepharose离子交换层析,首次从深山含笑叶片中快速分离提纯结合态过氧化物酶,相对可溶性过氧化物酶纯化倍数为55. 2倍,回收率为19%。该酶的比活力为18 999 U/mg蛋白,以愈创木酚为反应底物的最佳pH值为4. 5,最适温度为50℃;具有较宽的pH稳定范围,热稳定性较好,60℃以下不易失活。深山含笑叶过氧化物酶对BPA具有良好的清除能力,在pH4～7,温度30～40℃,H2O2/BPA摩尔浓度之比达0. 8条件下,经过3 h,10 000 U/L POD对0. 2 mmol/L BPA清除率达90%以上,深山含笑过氧化物酶在酚类物质生物酶法催化降解途径中具有潜在的重大利用价值。     

过氧化物酶和PeroxiBase过氧化物酶数据库

过氧化物酶是存在于生物体中的一大类以过氧化物为电子受体催化底物氧化的酶,在生物体的生命活动中发挥着重要作用.过氧化物酶由多态性丰富的多基因家族所编码,其结构和功能具有多样性.近年来,随着研究和应用的深入,过氧化物酶领域迫切需要建立一个专业的信息交流平台.PeroxiBase数据库收集了大量的过氧化物酶数据,并进行生物信息学加工,为生命科学研究人员免费共享、最大化利用与综合开发过氧化物酶资源搭建了信息平台,在过氧化物酶的研究与应用中发挥着重要作用.     

玉米素对盐渍下葡萄叶圆片H2O2清除系统的影响

研究了盐渍条件下河岸葡萄(Vitis vulpina L.)叶圆片细胞膜相对透性、光合色素和可溶蛋白含量、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)和愈创木酚过氧化物酶(G-POD)活性的变化以及施加玉米素对这些酶的影响。结果表明,叶细胞膜相对透性随盐浓度增加而增强;盐渍引起叶片光合色素和可溶蛋白含量减少并使CAT、AsA-POD和G-POD活性明显下降。玉米素处理明显抑制盐渍效应,可能与其对CAT、AsA-POD和G-POD的刺激作用有关。     

Class Ⅲ过氧化物酶在植物中的作用及其研究进展

过氧化物酶广泛存在于各种有机体中,根据其结构和功能可分为不同的类型,其中ClassⅢ过氧化物酶是植物体内特有的一个多基因家族.ClassⅢ过氧化物酶的功能多样,能够参与生长素的代谢、细胞壁的延伸和加厚、活性氧和活性氮的代谢以及植物的抗病作用等各种生理活动.目前对ClassⅢ过氧化物酶的940个物种中的6 000条序列都已经进行了注释,包括其存在的物种、组织类型以及细胞中的定位等.该文对国内外近年来有关ClassⅢ过氧化物酶的结构特征及其在植物体内的功能等进行综述.     

花椰菜(Brassica oleracea var botrytis)下胚轴培养过程中过氧化物酶活性及同工酶谱的变化

花椰菜下胚轴外植体在MS+6BA 5 ppm的培养基上能分化出芽,在MS+2,4-D2ppm的培养基上能脱分化而形成愈伤组织。用3种不同的酚类物质(咖啡酸、阿魏酸、愈创木酚及联苯胺)作氢供体发现分化过程中的过氧化物酶活性高于脱分化过程,其中以咖啡酸作氢供体显示的活性最高,阿魏酸及愈创木酚次之,而联苯胺最小。用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离阴极向及阳极向过氧化物酶同工酶,在分化及脱分化培养过程中均不断出现新的酶带,前者有13条,后者为11条,两者的差别主要在阴极向酶带,在分化过程中多了两条酶带(C_1和C_3),同时C_2带活性也比脱分化的高。阳极向酶带也有差别,A_2和A_2两条酶带在分化过程中逐渐加强,但是在脱分化过程中却逐渐消失。反映了两个过程生理上的差别。     

稻瘟病菌过氧化物酶体产生与降解的关键基因

过氧化物酶体(peroxisomes)是真核细胞中一类单层膜包被的细胞器,参与多种生化代谢.过氧化物酶体起源于内质网,过氧化物酶体形成相关的蛋白称为Peroxin,其编码基因通常写作PEX.细胞中过氧化物酶体的选择性消解称为过氧化物酶体自噬(pexophagy).参与细胞自噬(autophagy)的基因(ATG)大多参与过氧化物酶体自噬.近年来,丝状真菌中过氧化物酶体形成与降解机制的研究进展迅速,相关基因不断被鉴定.本文对相关研究进行了简要评述,并以稻瘟病菌为例,对丝状真菌基因组中可能的PEX和ATG基因进行了检索.发现稻瘟病菌中存在除PEX15,PEX17,PEX18,PEX21,PEX22,ATG19,ATG25,ATG30和ATG31之外的大多数PEX和ATG基因;同时,还存在多个丝状真菌特有的基因.说明过氧化物酶体的产生与消解在酵母、丝状真菌与哺乳动物之间相对保守,同时又各具特性.     

产漆酶的草菇菌株的筛选

以Bavendamn反应和愈创木酚滴定法为初筛方法,从18株草菇中筛选高产漆酶菌株.结果表明,在加入了0.4mmol/L鞣酸的Bavendamn培养基平板上,通过所显颜色深度及显色圈直径选出13株强阳性菌株;以愈创木酚滴定法筛选出5株显色时间较短且显色较深的菌株.最后,通过液体发酵复筛,测得V123菌株酶活最高,培养8d其漆酶达78U/mL,其次是V8菌株活力为65U/mL.V123和V8可作为草菇中漆酶的高产菌株供以后的研究.     

黑斑蛙过氧化物酶活性测定条件的研究

本文报道了测定黑斑蛙过氧化物酶活力的两套方法.应用细胞组织化学的方法,对黑斑蛙的肝组织过氧化物酶的原位染色,以显示过氧化物酶在细胞中的分布.此外,还探讨了一种新的过氧化物酶活性检测方法,以联苯胺为底物,利用分光光度法测定反应液的吸光度,以吸光度的变化速率来表征过氧化物酶的活力.通过试验确定了该方法适宜的工作条件,包括酶浓度、温度、pH值等,得到酶活性变化的相关数据.     

酵母过氧化物酶体的形成机制

过氧化物酶体是细胞中一种重要的细胞器.过氧化物酶体在细胞功能的发挥和人体健康方面有着重要作用.目前,以酵母过氧化物酶体为模型,研究过氧化物酶体的形成机制是研究热点.从过氧化物酶体起源、生成方式介绍最新研究进展,总结在酵母细胞中参与过氧化物酶体形成的必需基因(pex),及其编码Peroxin蛋白在过氧化物酶体形成过程中的...