从线粒体Cyt b基因探讨红瘰疣螈物种地位的有效性

疣螈属的红瘰疣螈(Tylototriton shanjing)和棕黑疣螈(T.verrucosus)的物种界限一直不清楚。测定了来自中国西南地区14个地点的T.shanjing和T.verrucosus共40只标本的线粒体DNACytb基因(753bp)。结果表明:(1)用邻接法、最大简约法和贝叶斯法等3种系统发育分析法分别重建棕黑疣螈种组系统发育树的拓扑结构不支持T.shanjing是单系群;(2)T.shanjing与T.verrucsus的mtDNA Cytb序列差异平均值仅为1.2%,未达到种级水平。因此,全部T.shanjing样品都属于同一个物种,即T.verrucosus,不支持T.shanjing的物种地位,T.shanjing为T.verrucosus的同物异名,并建议恢复T.verrucosus的中文名红瘰疣螈。根据基于40个样品Cyt b基因序列的系统发育树和遗传变异以及地理分布,这些红瘰疣螈(T.verrucosus)样品聚为3支,即中国西南地区的红瘰疣螈可分为片马、滇中滇西和滇东南3个地理居群。     

红瘰疣螈的体温调节

红瘰疣螈(Tylototriton shanjing)为我国Ⅱ级重点保护野生动物。本实验测定了在不同环境温度条件下红瘰疣螈体温及代谢率变化。结果表明,在10～35℃环境温度范围内红瘰疣螈体温(Tb)与环境温度(Ta)呈正相关,其直线回归方程为:Tb=3.99+0.86Ta(R2=0.99,P0.01);其代谢率(MR)在15～30℃的环境温度范围内随环境温度的升高而升高,在35℃时,其代谢率由于体温过高而急剧降低;在15～35℃之间的6个温度条件下雄性代谢率的回归方程为:MR1=0.374 1-0.355 1Ta+0.113 9T2a-0.010 5T3a(R2=0.47,P0.01,df1=3,df2=46);雌性代谢率的回归方程为:MR2=0.478 8-0.420 3Ta+0.130 4T2a-0.011 8T3a(R2=0.40,P0.01,df1=3,df2=46)。不同于内热源动物的代谢特征,红瘰疣螈的体温调节表现出外热源动物的特点:其体温受环境影响较大,体温生理调节能力较弱。     

红瘰疣螈胚胎发育的初步观察

报道红瘰疣螈（Tylototmon shanjing）的胚胎发育过程。根据胚胎发育过程中的形态变化规律将胚胎发育过程分为22个时期,在室温（25±1）℃的条件下,胚胎发育历时20-22d。描述了各时期的形态特征,并讨论了发育中的一些现象。     

红瘰疣螈皮肤的显微结构观察

对我国Ⅱ级重点保护野生动物红瘰疣螈(Tylototriton shanjing)成体的皮肤结构进行了显微观察。观察结果表明,其皮肤厚薄、微血管、色素分布,以及腺体的分布和大小等方面在身体的不同部位存在差异:头和背部的皮肤厚于腹部;黑色素细胞多分布于真皮浅层,以腹部及背侧无瘰粒处多见;真皮层富含黏液腺和颗粒腺,但分布不均匀;头嵴棱部及背部瘰粒下方颗粒腺的数量多、体积大,并充满分泌物;表皮下腺体外突,其表皮细胞层数减少,形成分泌物有效通道。同时,将红瘰疣螈皮肤与其他两栖类相比可知,其以上皮肤结构特征均体现了红瘰疣螈对山区阴湿环境中陆栖生活的重要适应。     

温度对红瘰疣螈胚胎发育的影响

探讨了不同温度对红瘰疣螈Tylototriton shanjing Nussbaum,Brodie et Yang 1995胚胎发育速度、孵化率及胚长增长速度的影响,并对胚胎发育起点温度和发育有效积温等进行研究。结果表明,在试验温度范围内(10³0℃),随着温度的升高,其胚胎发育速度、胚长增长速度加快,发育时间缩短,孵化率上升。其中孵化率与孵化温度成线性关系(Y=0.0017X+0.95230),发育周期与孵化温度成线性关系(Y=-0.377X+24.154)。但红瘰疣螈有一定适宜温度范围(2030℃),随着温度的升高,其胚胎发育速度、胚长增长速度加快,发育时间缩短,孵化率上升。其中孵化率与孵化温度成线性关系(Y=0.0017X+0.95230),发育周期与孵化温度成线性关系(Y=-0.377X+24.154)。但红瘰疣螈有一定适宜温度范围(20²5℃),超过或低于该温度范围,卵的畸形率和最终死亡率明显增加。应用直线回归法和直接最优化法计算红瘰疣螈胚胎发育的发育起点温度和有效积温分别为0.58℃、68.66日度和0.46℃、69.01日度。     

从线粒体细胞色素b基因探讨矮岩羊物种地位的有效性

用采自四川省的岩羊和矮岩羊共18个头骨或皮张标本，分析了线粒体Cyt6基因1140bp的全序列(其中一个样品只测到802bp的基因片段)。用NJ、MP、ML等系统发育分析法分别重建的系统发育树的拓扑结构完全一致，均不支持矮岩羊是单系群。结果提示：所研究的全部样品都属于同一个物种，即岩羊P．nayaur，不支持矮岩羊的物种地位。根据基于17个样品Cyt6基因全序列的系统发育树和遗传变异以及地理分布，这些岩羊样品聚为5支，根据地理区划和本文分析结果，四川的岩羊可分为摩天岭、川西、川西北、川西南和川北5个种群。基于17个样品Cyt6基因1137bp的编码区，共定义了岩羊的16种单元型，在5个种群间未发现共享的单元型。     

红瘰疣螈的繁殖生态

红瘰疣螈(Tylototriton shanjing)为国家Ⅱ级重点保护野生动物,对其繁殖生态尚无系统的研究.2007 ～2010年在云南省新平县哀牢山对红瘰疣螈形态、繁殖栖息地、求偶和交配行为、产卵及孵化等繁殖特征进行了研究.结果表明,红瘰疣螈雌雄两性在广泛的形态学度量特征上存在着差异;繁殖栖息地主要为稻田和潮湿的沟渠;参与繁殖的雌雄成体性比随繁殖时间的推移而不断变化,繁殖前期和后期雄性比例高,中期雌性比例高.求偶和交配主要在陆地潮湿的水沟中完成,也可在静水中进行.成体产卵活动从5月初持续至6月下旬,呈现出波浪式的产卵进程,个体完成产卵平均时间为(22.2 ±2.7)h.繁殖前期雌螈产卵于稻田,中后期产于多杂草的田埂草丛和泥壁,平均产卵数( 126±18)枚(n=17).平均孵化期(17.3 ±0.1)d(n =225),孵化率59.8％ (n =79),孵化时幼体平均体长12.7mm(n =6).     

降雨决定繁殖期红瘰疣螈的活动性

有尾两栖类的繁殖活动常常受到环境因子,特别是如温度、湿度和降雨等气候因子的限制。红瘰疣螈Tylototriton shanjing是适应云南山地环境的典型有尾两栖类动物。本研究期望通过对繁殖期红瘰疣螈活动个体数量的野外调查和气候因子的分析,弄清影响红瘰疣螈繁殖行为活动的关键气候因子。研究结果显示,繁殖期红瘰疣螈活动个体数量与气温呈显著的负相关关系,与空气相对湿度和降雨量呈显著的正相关关系。然而偏相关和多元回归分析则表明,红瘰疣螈繁殖行为活动与相对湿度和降雨量关系更密切。红瘰疣螈总是在降雨后引起空气湿度增加以及气温下降时进行各种繁殖行为活动,降雨是影响红瘰疣螈繁殖行为活动关键的气候因子。红瘰疣螈的繁殖行为活动与降雨节律保持一致是对云南山地环境的重要适应。     

猪科的系统发育与系统地理分化

猪科动物是最为昌盛的哺乳动物之一，但它们的分类及系统发育关系却尚待解决。为此， 用PCR直接测序法测定了一个红河猪(Potamochoerus porcus)、一个马来西亚野猪(Sus barbatus)以及数头欧亚野猪(Sus scorfa)线粒体细胞色素b全序列1 140 bp。结合从GenBank中获得的其他猪科物种胞色素b序列，用邻接法和最大简约法构建了猪科物种的系统发育关系，其结果显示苏拉威西鹿猪与其他猪科物种为姐妹群的关系。非洲物种疣猪和河猪聚为一枝，而欧亚猪属物种聚为另一支。各物种在系统发育关系中的位置与它们的地理分布对应。猪属物种可以被划分为3个种组：分布于菲律宾群岛、苏拉威西岛及其邻近岛屿的猪属物种形成一个种组，包括苏拉威西岛疣猪、菲律宾疣猪和印度尼西亚疣猪；欧亚野猪种组，包括欧亚野猪和姬猪；须猪和爪哇疣猪形成一个种组。     

红瘰疣螈玉龙雪山种群的两性异形

分别测量于2018年6—8月采自云南丽江玉龙雪山的32只(17♂,15♀)红瘰疣螈Tylototriton shanjing成体的全长、头体长、头长等13项形态特征指标,并检验该物种的两性异形。结果表明:雌性平均全长为160.72 mm±3.02 mm(n=15),雄性平均全长为138.58 mm±2.57 mm(n=17),雌性与雄性平均全长比为1.160,两性异形指数为0.138,属雌性大于雄性的两栖类;全长在两性间的差异有统计学意义;除了雌性的头宽、尾宽、尾高和腋至胯距外,其他形态特征与全长均有显著或极显著相关性;以全长为协变量的协方差分析结果显示,红瘰疣螈的头体长、头长、吻长、尾长和前肢长在两性间的差异有统计学意义;雌性的尾长和前肢长随全长的生长速率大于雄性,而头体长、头长和吻长随全长的生长速率小于雄性。生育力选择假说能解释红瘰疣螈玉龙雪山种群的两性异形现象。     

捕食风险对红瘰疣螈幼体生长发育的影响

捕食风险是两栖动物幼体表型和生活史进化重要的选择压力之一。红瘰疣螈Tylototriton shanjing为云南山地环境中典型的有尾两栖类,山地环境水体水量的迅速减少常导致红瘰疣螈在幼体发育阶段捕食风险增加。本研究通过实验,观察红瘰疣螈幼体的体长和体质量在不同捕食风险环境中的变化、变态时体型以及完成变态发育的时间差异,探讨捕食风险对红瘰疣螈幼体个体早期发育的影响。实验设计4个不同的捕食风险处理:无任何捕食者的无捕食组、有同种个体化学信号的同种异体组、有同种尾受伤个体化学信号的断尾组、有入侵物种——克氏原螯虾Procambarus clarkii信息的外来物种组。结果显示,红瘰疣螈幼体在不同捕食风险环境中的生长发育过程不同。在生长发育前期,所有处理组的幼体生长均相似,而在中后期,有捕食风险存在的3个处理组生长发育显著加快,最终变态时的体长和体质量要比无捕食风险组更长和更重,体型更大。幼体在有捕食风险存在的处理组完成变态的时间要比无捕食风险组显著更短。这表明,红瘰疣螈幼体在面对捕食风险增加时,通过在胚后发育后期加快生长和缩短发育时间,尽快完成变态,离开幼体发育水体来适应高捕食风险的水环境。     

云南新平哀牢山红瘰疣螈的陆地求偶交配行为模式

红瘰疣螈Tylototriton shanjing为云南山地环境中典型的有尾两栖类,其求偶交配行为模式尚未被系统研究。2013—2014年对云南省新平县哀牢山繁殖期红瘰疣螈在陆地环境中的求偶交配模式进行了观察。研究结果显示,红瘰疣螈的求偶交配行为是按照一定时序进行的,整个过程由定位、静止展示、劝导展示和精子转移4个阶段组成。在求偶交配中雄性个体行为包括:警戒、追逐、阻拦、蹑行、嗅探、轻推、诱导、扇尾、侧行和产精包等类型。雌性个体的行为包括离开、静止、跟随、纳精包等类型。雄性行为较雌性复杂,雄性在求偶交配行为过程中占据主动。雌雄的识别主要以视觉为主,整个求偶交配过程中无抱握行为,雄性尾部的运动也比较单一,这些行为的变化可能是对在陆地求偶交配的适应。     

香港瘰螈eDNA引物和TaqMan探针的设计与确认

环境DNA(e DNA)技术是近年来新兴的一种野外水生生物调查方法。本研究旨在设计一组香港瘰螈(Paramesotriton hongkongensis)特异的引物和TaqMan探针并确立此eDNA方法在水样中的实用性,以期进一步调查其野外种群分布。测定11种瘰螈物种的线粒体细胞色素b(Cyt b)基因序列,然后使用Primer Express 3.0软件设计引物和TaqMan探针。通过比对NCBI基因库及进行退火温度梯度测试,验证引物和TaqMan探针的特异性。通过测试不同浓度的引物和TaqMan探针,优化q PCR扩增效率。然后检测养殖不同数量香港瘰螈的水缸水体中eDNA,以评估已建立的q PCR方法灵敏度。同时,测定香港瘰螈e DNA降解速度,以估计其在水中的持续时间。实验结果显示,本研究所设计的引物和探针只对香港瘰螈呈阳性扩增,而对同属的其他10个物种均呈阴性。优化的q PCR效率为93.9%、最低检测浓度为10DNA拷贝数。已建立的qPCR方法能灵敏地检测出在养殖1只香港瘰螈24h实验水缸水体的DNA拷贝数为(13.56±3.35)/ml水样。另外,降解实验发现,采用0.45...     

氧化乐果对红瘰疣螈胚胎及蝌蚪生长发育的影响

本文研究了氧化乐果对红瘰疣螈Tylototriton shanjing胚胎及蝌蚪生长发育的影响。结果表明,氧化乐果对红瘰疣螈胚胎发育过程中的出膜期和开口期毒性较大,其余各期毒性较小。随着氧化乐果浓度的增大,红瘰疣螈的畸形率和死亡率逐渐增大。gosner22期蝌蚪的安全浓度是0.05 mg·L~(-1)。在安全浓度内,0.03 mg·L~(-1)氧化乐果溶液对蝌蚪的生长具有明显的促进作用,浓度高于0.03 mg·L~(-1)则对蝌蚪的生长发育有明显的滞育作用,对其生长的影响主要表现在10 d以后,这与处理时间延长,毒物在蝌蚪体内富集有关。氧化乐果对红瘰疣螈胚胎及蝌蚪生长发育有显著的影响和损伤,该研究为农业生产科学合理使用农药提供了依据。     

基于线粒体Cyt b基因的线蛱蝶亚科的系统发育

基于线粒体Cyt b基因部分序列，以波蛱蝶为外群，采用邻接法、最大简约法和贝叶斯法分别构建了中国线蛱蝶亚科10属25种蝶类的系统发育树，探讨了各主要类群间的系统发育关系。其结果表明，所有线蛱蝶亚科聚为两大枝：第一枝包括环蛱蝶属、菲蛱蝶属、蟠蛱蝶属和缕蛱蝶属，其中缕蛱蝶属与环蛱蝶族亲缘关系较近；第二枝包括丽蛱蝶属、穆蛱蝶属、线蛱蝶属、带蛱蝶属、律蛱蝶属和翠蛱蝶属，其中线蛱蝶属为非单系群，翠蛱蝶属和律蛱蝶属则为单系发生，并构成姐妹群。     

中国地鼠线粒体Cyt b基因测序及其分子进化

目的测定中国地鼠线粒体DNA细胞色素b基因部分序列,分析其分子系统进化关系。方法提取中国地鼠肝脏的总基因组DNA。设计合成特异引物进行PCR扩增,经检测进行测序。用Blast与GenBank中啮齿类其他常用实验动物的物种细胞色素b基因进行同源序列比较,分析其碱基组成及变异情况,并用邻接法、最大简约法、最小进化法构建了分子系统树,在分子水平上探讨中国地鼠和常用啮齿类实验动物的进化关系。结果获得了中国地鼠线粒体Cytb基因的部分序列,共936bp。结论中国地鼠和金黄地鼠的亲缘关系最近,与小鼠、大鼠存在的差异相对大,与豚鼠的亲缘关系最远,与传统的分类地位基本吻合。     

鲹科鱼类线粒体DNA控制区结构及系统发育关系

采用PCR技术获得了9种鲹科鱼类的线粒体DNA控制区全序列,并结合从GenBank中下载的3种鲹科鱼类的相应序列采用Clustal W排序后,对控制区结构进行分析,识别了其终止序列区、中央保守区和保守序列区3个区域,指出了终止相关序列的主体是TACAT与其反向互补序列ATGTA以及一系列保守序列（CSB-F、CSB-E、CSB-D和CSB-1、CSB-2、CSB-3）,并给出了它们的一般形式,同时在康氏似鲹控制区的5′和3′两端发现重复序列。以尖吻鲈作为外类群,应用邻接法构建的分子系统树表明：鲹科鱼类分为鲹亚科、鰤亚科、鲳鲹亚科和鰆鲹亚科4个亚科,各自形成单系群;鲹亚科与鰤亚科形成姐妹群,鲳鲹亚科再与他们聚在一起,鰆鲹亚科处于鲹科鱼类的基部,与前面3个亚科聚在一起。     

三疣梭子蟹的第二次卵巢发育规律

2005年3—5月，在室内养殖条件下对第二次卵巢发育的三疣梭子蟹进行连续采样，系统研究了其第二次卵巢发育期间的卵巢指数（GSI）、肝胰腺指数（HSI）、卵巢外部特征、卵巢发育分期及其组织学变化。结果表明：① 三疣梭子蟹第二次卵巢发育过程可以分为4期,Ⅰ期卵巢为乳白色或者淡黄色细带状,卵巢中主要为卵黄合成期的卵母细胞和内源性卵黄合成前卵母细胞；Ⅱ期为淡黄色或橘黄色，主要为外源性卵黄合成期的卵母细胞；Ⅲ期卵巢为橘红色，主要为外源性卵黄合成期的卵母细胞和近成熟期的卵母细胞；Ⅳ期卵巢发育基本成熟，肉眼可见卵粒，主要为成熟期的卵母细胞；② 三疣梭子蟹第二次卵巢发育期间，GSI显著增加，HSI变化不显著，GSI和发育天数呈显著正相关性，HSI和GSI的变化没有显著的相关性。     

亚洲疣猴与猕猴牙齿的比较

为了研究亚洲疣猴牙齿形态与功能适应性之间的关系，建立异速生长公式比较分析生活于同一大陆的猕猴。主成份分析用来分析来自异速生长公式的残差。结果表明：疣猴出乎意料地展示了比猕猴更小的门齿。导致此结果的可能原因是：疣猴与猕猴之间的食物差异性。但是，这种差异小于亚－非大陆种类。也就是说，在过去的500万年左右的时间里，生活于同一大陆的疣猴和猕猴已经产生了一些对环境和食性的趋同性。当每一个疣猴属分别与猕猴进行比较时，它们之间的差异性揭示了地理分布的差异。金丝猴（Rhinopithecus）和长尾叶猴（Semnopithecus）具有比其他疣猴发达的臼齿。欧氏距离的结果说明疣猴和猕猴牙齿的差异性揭示了它们在系统发育方面的关系。