用裂解气液色谱法鉴定昆虫包涵体病毒的初步研究

用Shimadzu GC-9A气相色谱仪和PyR-2A管式炉裂解器,对11株昆虫包涵体病毒进行了裂解气相色谱鉴定,通过对“指纹图”的分析,既可明显地区分GV、NPV和CPV包涵体病毒彼此间的差异,亦可较好的区别不同分离株间的异同,实验结果初步证明,用裂解气液色谱法分析、鉴定昆虫包涵体病毒是可行的。     

成年大鼠心肌细胞分离培养及兴奋-收缩耦联表征

目的：比较两种细胞分离液分离成年大鼠心肌细胞,进一步表征成年大鼠心室肌细胞兴奋-收缩耦联。方法 Langendorff装置进行主动脉逆流灌流,分别用两种细胞分离液分离成年大鼠心肌细胞,无血清培养并进行腺病毒感染。显微镜下观察单个心肌细胞的形态学特点,荧光显微镜下检测病毒感染。采用IonOptix仪器检测心肌细胞肌节收缩-舒张指标以及心肌细胞钙离子摄入-排出指标。结果两种分离液均可获得70％横纹清晰的长杆状心肌细胞,培养可存活7 d以上。腺病毒感染48 h,绿色荧光蛋白持续表达7 d以上。分离液一获得的心肌细胞不能很好地随电场刺激产生收缩,分离液二获得的细胞可用于检测兴奋-收缩耦联特性,心肌细胞肌节缩短分数为11.61％±2.15％,舒张时间为（0.177±0.031） s,钙瞬变幅度为30.79％±9.74％,钙瞬变衰减时间为（0.300±0.074） s。结论两种分离液均可用于分离和培养成年大鼠心肌细胞,并用于腺病毒转染等长时程研究。分离液二更适用于检测成年大鼠心肌细胞的兴奋-收缩耦联特性。     

花生根瘤菌优良菌株“305”、“4341”和“4464”的选育

用吖啶橙处理花生根瘤菌菌株“009”,从处理液中分离到1211个衍生菌株,经过初筛与复筛,从中选育出“305”、“4341”和“4464”等侵染结瘤能力较强的菌株。血清学反应证明,这些衍生菌株确系亲株“009”的后代。生理生化特征的鉴定结果显示:亲株与衍生物之间以及各衍生物相互之间的共同性较少,而差异性较大。田间试验结果表明,新选菌株对良种和本地花生都有很强的侵染结瘤能力;在花生的新、老种植区以及不同类型的土壤上,都有显著的增产作用;是适合本省土壤,气候和耕作制度的优良菌株。     

直接免疫荧光技术对腺病毒所致儿童流行性“咽结合膜热”的快速诊断

腺病毒是儿童时期病毒性呼吸道疾病的主要病原,在腺病毒的34个型别中,3、7型腺病毒又占首位,危害甚大。近几年来,关于直接免疫荧光技术在婴幼儿腺病毒肺炎早期快速诊断方面的应用,国内曾有些报道。对于有效地防治腺病毒肺炎起到了积极作用。但有些报告对采用咽脱落细胞直接涂片检查腺病毒抗原与病毒分离、血清学试验方面的符合率仍较低,仅为70—80%。而咽标本转种玻片法     

“水稻叶片倾斜法”鉴定油菜素内酯类的两点改进

采用“水稻叶片倾斜法”鉴定油菜素内酯类时有两个问题:一是采用的溶液量少,每个切段得到的液量不均匀,鉴定效果较差;二是方法中采用的马来酸钾是中和反应的产物,制各及配制各处理液时手续繁琐。针对这些,我们采用“广陆矮4号”水稻及从蜂蜡中分离精制的油菜素甾醇为试验材料作民改进,结果如下:     

7型腺病毒E1A基因克隆及真核表达

为了研究7型腺病毒(Ad7)E1A在感染中的致病机制,分离了Ad7d2病毒株,构建了Ad7 E1A基因的真核表达体系.用A549细胞分离培养痰液标本中的腺病毒,应用重叠延伸PCR扩增Ad7 E1A基因外显子,产物克隆至真核表达载体pIRES-Neo,构建重组子pIRES-Neo-Ad7E1A并转染A549细胞,利用Western印迹对其表达产物进行鉴定.克隆测序显示扩增的Ad7 E1A基因外显子包含了完整的编码区基因,pIRES-Neo-Ad7E1A转染A549细胞的表达产物经Western印迹鉴定与设计相符.成功建立了Ad7 E1A 基因的真核表达体系.     

Biolog微生物鉴定系统中接种液的替代

目的：采用市售试剂自行配制Biolog菌种鉴定接种液,代替Biolog公司的原装接种液,用以降低菌种鉴定成本。方法：用实验室自行配制的接种液和Biolog公司的接种液,对120株细菌和50株丝状真菌进行Biolog微生物系统鉴定,对比鉴定结果。结果：用2种接种液进行菌种鉴定时,鉴定板上部分孔的颜色反应不同,但鉴定结果一致。结论：自行配制的接种液可以满足菌株鉴定的要求,具有推广意义。     

由7型腺病毒引起的急性咽结合膜热的暴发流行

急性咽结合膜热(Acute pharyngo conjunctival Fever)是病毒引起的眼结合膜和咽炎的急性传染病和综合症。早年的病原学研究表明腺病毒3、7、8和14型为该病的主要病因。近年又发现肠道病毒70型(小 RNA 病毒)可引起急性出血性结合膜炎。本文报导我们对1984年8月在北京市朝阳区小学生中急性咽结合膜热暴发流行进行病原学研究的结果。我们从这次累及四千多人的流行中,分离鉴定出14株7型腺病毒、并通过临床和血清学研究,确定了所分离的7型腺病毒为本次流行的病因。     

几种层析液对滤纸圆盘分离叶绿体色素的影响

现行高中生物学（必修）教材和教师教学用书．介绍“叶绿体中色素的提取和分离”实验中有关层析液的替代品有很多种,只有通过实验验证．才能知道哪种层析液分离色素效果好。同时在实验验证过程中还能发现更为理想的层析液比例搭配．既容易配制又操作简单。笔者进行了实验探索．现将“几种层析液对滤纸圆盘分离叶绿体色素的影响”的实验过程、实验现象和实验结果阐述如下,以便于各位同仁交流和商榷。[第一段]     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白重组腺病毒的构建与免疫原性测定

应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离株S1毒株的GP5基因序列,然后通过KpnI和XhoI酶切位点把该基因克隆入经过同样双酶切的穿梭载体pShuttle-CMV中.重组穿梭载体经过酶切和PCR鉴定后进行测序,证明所克隆入的基因以正确的阅读框插入.获得的重组穿梭载体经线性化后与腺病毒骨架载体共转化大肠杆菌BJ5183菌株.纯化的重组腺病毒质粒经酶切线性化后转染293细胞获得重组腺病毒.重组腺病毒经纯化后进行RT-PCR和间接免疫荧光鉴定,证明了用PRRSVGP5蛋白基因所构建的重组腺病毒成功的表达了GP5蛋白.猪体免疫试验后收集血清进行中和实验证明所构建的重组腺病毒在猪体内能够诱导产生中和抗体,因此我们所构建的重组腺病毒可以作为PRRSV基因工程疫苗研究候选病毒株.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白重组腺病毒的构建与免疫原性测定

应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离株S1毒株的GP5基因序列,然后通过KpnI和XhoI酶切位点把该基因克隆入经过同样双酶切的穿梭载体pShuttle-CMV中。重组穿梭载体经过酶切和PCR鉴定后进行测序,证明所克隆入的基因以正确的阅读框插入。获得的重组穿梭载体经线性化后与腺病毒骨架载体共转化大肠杆菌BJ5183菌株。纯化的重组腺病毒质粒经酶切线性化后转染293细胞获得重组腺病毒。重组腺病毒经纯化后进行RT-PCR和间接免疫荧光鉴定,证明了用PRRSVGP5蛋白基因所构建的重组腺病毒成功的表达了GP5蛋白。猪体免疫试验后收集血清进行中和实验证明所构建的重组腺病毒在猪体内能够诱导产生中和抗体,因此我们所构建的重组腺病毒可以作为PRRSV基因工程疫苗研究候选病毒株。     

加热调控的溶瘤腺病毒载体构建及其特征研究

溶瘤腺病毒作为近年来新兴的肿瘤基因治疗策略,因具有“细胞溶解”和“旁观者效应”而备受关注．构建了受热休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)基因启动子调控的溶瘤腺病毒载体Ad-HSP70p-E1A,观察该病毒与热疗联合应用对肺癌细胞生长的抑制作用和带动治疗基因在肺癌细胞中表达的效果．体外实验结果表明,Ad-HSP70p-E1A在肺癌细胞株A549内能较好地实现自身复制,并产生一定的溶瘤作用,在联合热疗后,Ad-HSP70p-E1A的自身复制能力和溶瘤效果分别增强了2～10倍和5倍以上．此外,Ad-HSP70p-E1A还可通过反式提供E1A蛋白而使10 moi用量的复制缺陷型腺病毒AdGFP、Ad-CMV-hGMCSF和Ad-CMV-mIL12的表达提升76.64倍、5倍和7倍．     

“蛇茨液”外擦治疗疮疖介绍

“蛇茨液”外擦治疗疮疖介绍湖北省潜江市王场卫生所姚泽林疮疖是一种常见病，多发病，尤以夏、秋多发。自１９９０年来，笔者自拟“蛇茨液”外擦治疗疮疖３００多例。取得了很好的疗效。现简介如下：药物组成：活蝮蛇１条（约５００克左右为佳），山茨茹３０克，地丁２０...     

漏出液用于外周血淋巴细胞培养

为研制一种适宜淋巴细胞生长的天然培养基，我们在漏出液中添加不同浓度的小牛血汪有为培养液，对30例外周血淋巴细胞进行常规培养、制片，并以M199作对照，用淋巴细胞转化率、有丝分裂指数、分裂相质量等指标综合评价漏出液的培养效果。结果显示：淋巴细胞在漏出淮中生长快，分裂旺盛，实验组的各项指标均与对照组无差异（P＞0.05）。     

应用液—液双水相抽提技术分离纯化甘油激酶、a-甘油磷酸脱氢酶及心肌黄酶

用液-液双水相抽提技术分别从嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)菌体、兔肌及猪心肌匀浆液中分离甘油激酶、a-甘油磷酸脱氢酶及心肌黄酶,研究了pH,匀浆液的量、氯化钠浓度及丙酮等因素对分配系数、上下相体积之比,酶活性回收率及分离效果等参数的影响,并确定了抽提上述三种酶的最佳相组成系统。用本文的工艺抽提甘油激酶、a-甘油磷酸脱氢酶及心肌黄酶有下列优点： 1．酶活回收率较高,分别为90％、95％及70％2：分离效果较好,通常提纯三、四倍以上3．各酶均存留在下相,即磷酸钾盐富相中,故可省去聚乙二醇(PEG)的分离工序而直接与后继精制工艺衔接,简化了工艺,在实验室及工业生产中均有实用价值。     

用改良苯酚品红染色液替代醋酸洋红染色液的研究

以往在动物遗传学实验“果蝇唾液腺染色体标本的制作和观察”中,采用醋酸洋红染色液对染色体染色。本文对用改良苯酚品红染色液替代醋酸洋红染色液对果蝇唾液腺染色体染色的问题进行了研究。结果表明,改良苯酚品红染色液对果蝇唾液腺染色体的染色效果与醋酸染洋红染色液的染色效果是相同的。而且用改良苯酚品红染色液还人提高工效,简易节约的优点。因此认为,在对果蝇唾液腺染色体染色中,用改良苯酚品红染色液替代酸酸洋红染色液     

自西安地区医院分离的118株绿脓杆菌的“O”血清分型（群）

血清分型是检测绿脓杆菌交叉感染和追踪其感染源的重要工具。本文用国内生产的绿脓杆菌诊断用12群“O”血清,对自西安市11所医院临床病人创面、呼吸道和尿路感染分离的118株绿脓杆菌进行了血清学分型鉴定。结果发现,118株绿脓杆菌中有115株能被“O”血清凝集,鉴定率为97.46%;有109株能被分型,分型率为92.37%。其中以血清Ⅵ.Ⅰ.Ⅲ三群菌多见,表明西安地区医院绿脓杆菌感染以这三个血清群为主。     

加速苏木精染色液“成熟”的两种方法

海登汉氏(Heidenhain’s)苏木精染色法是一种经典的细胞核和染色体的染色法,广泛地用于动、植物制片和细胞学的压片中,而且对很多难于被其他染料着色的材料,用此法仍能取得比较良好的效果。但该法中的苏木精染色液配后不能马上使用,需放在空气中经一到二个月“成熟”后才能使用。“成熟”即苏木精氧化成苏木素(氧化苏木精)的过程:     

HIV-1 gagpol重组腺病毒疫苗的构建及其免疫原性的研究

目的：构建HIV-1重组腺病毒疫苗并初步鉴定其免疫原性。方法：用Adeno-XExpressionSystem试剂盒将HIV—lgagpol基因片段插入到腺病毒载体上,通过脂质体介导将获得的重组腺病毒质粒Adeno—X-gagpol转染至293细胞,使之自主包装成有感染活性的重组腺病毒tad—gagpol,用western-blotting法鉴定其表达情况;用CsCl密度梯度离心法纯化该重组腺病毒,以5×10^8 pfu／mL的滴度lmL单次免疫小鼠,15天后测小鼠体液免疫效果。结果：克隆序列与设计相符,重组腺病毒疫苗能稳定表达gag—pol蛋白,体液免疫中检测出抗p55和p24的特异性抗体。结论：HIV—lgagpol重组腺病毒构建成功,具有一定的体液免疫原性。     

猴腺病毒GD株的分离与鉴定

目的 体外分离出猴腺病毒(simian adenovirus,SAdV)毒株,并对其进行鉴定,为SAdV的生物学特性、致病机制和诊断试剂等方面的研究提供基础.方法 采用PCR法对猕猴粪便样本进行SAdV筛查,将PCR检测为阳性的样本处理后接种BSC-1细胞,盲传3代后用PCR扩增测序并负染色电镜观察.结果 从广东地区食蟹猴粪便样本中成功分离出一株SAdV,细胞病变明显,PCR检测呈阳性,电镜下可观察到典型腺病毒样形态的病毒粒子,命名为GD株.经测序鉴定,发现GD株属HAdV-G亚属,与SAdV-1进化发生距离最近.结论 GD株的分离成功,使猴腺病毒基因转移载体的构建成为可能,有助于猴腺病毒替代载体的发展.