沙眼衣原体抗原成分的研究进展

沙眼衣原体的感染率不断增加,其危害也越来越大。在欧、美等国和地区,由沙眼衣原体所致性传播疾病已超过淋病奈瑟菌而居首位。当前对沙眼衣原体的研究较多,本文概述了近年来对沙眼衣原体抗原成分的研究进展及其在分型、诊断、致病性、疫苗研究方面的意义。     

抵抗女性生殖道沙眼衣原体感染的免疫新策略

沙眼衣原体是引起沙眼和泌尿生殖道感染的主要病原体。据世界卫生组织2015年统计,全球每年约有1.3亿沙眼衣原体感染新发病例。研究表明CD4^+Th1型细胞免疫应答在抵抗沙眼衣原体感染中发挥着重要作用。因此,研究者依照抗沙眼衣原体感染的免疫应答特点,构建出许多候选疫苗,但都没有成功地应用于临床。近年研究发现,生殖道黏膜组织不仅存在体液免疫和细胞免疫,还驻留着一些引人注目的免疫细胞,提示增强黏膜免疫可作为预防沙眼衣原体感染的潜在途径,是抵抗生殖道沙眼衣原体感染的免疫新策略。本文全面概述了黏膜免疫与女性生殖道沙眼衣原体感染的研究进展,并为今后研制沙眼衣原体疫苗提供一些建议。     

沙眼衣原体质粒蛋白pgp3的研究进展

沙眼衣原体分泌性蛋白在沙眼衣原体致病过程中起重要作用,质粒编码的蛋白pgp3(即pORF5)是迄今为止发现的唯一由沙眼衣原体质粒编码的分泌性蛋白。pgp3在沙眼衣原体感染早期即可表达,在感染人群中具有很强的免疫原性,且人抗体对pgp3的识别具有高度的结构依赖性,对该蛋白的研究将有助于进一步了解衣原体质粒编码蛋白的作用及衣原体致病机制,以寻找更好的衣原体诊断方法和防治措施。本文就沙眼衣原体质粒编码蛋白pgp3的生物学性质及其致病机制作一简要综述。     

沙眼衣原体感染分子流行病学进展

沙眼衣原体是最常见的性传播疾病(STD)的病原体之一,严格寄生细胞内生长,常见侵袭眼结膜及泌尿生殖道黏膜的单层柱状上皮细胞,可导致多个器官炎症性改变,并与肿瘤的发生有关。而不同的基因分型具有不同的组织嗜性和致病表现,使得沙眼衣原体的分子流行病学与临床的关系逐渐成为热点。现就近年来的研究进行一系统回顾。     

基于沙眼衣原体ompl基因限制性片段长度多态性和测序法用于女性生殖道感染沙眼衣原体基因分型

沙眼衣原体D-K型见于女性生殖道感染,尤其是宫颈感染的主要病原体,基因分型针对编码主外膜蛋白(MOMP)编码基因(ompl)多态性,CT各型ompl基因长度略有差异,总长度均在1.1 kb左右,使用ompl基因限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)进行分型,但是不同的引物设计和实验条件,结果的判读不同,结合ompl基因测序法,能构建出不同实验条件下PCR-RFLP酶切图谱,便于临床判读,并且通过BLASTA及多序列比对发现ompl基因序列碱基变异。收集2010年1月至2014年5月在柳州市人民医院就诊的宫颈脱落细胞沙眼衣原体阳性女性,结合omp1基因测序法进行分型,建立反应体系,通过ompl基因测序结果比对,确定本实验条件的参考酶切图谱,用于临床标本的CT分型检测。基于ompl基因的PCR-RFLP技术是目前沙眼衣原体基因分型临床可运用的方法。     

假定蛋白CT440在沙眼衣原体感染细胞中的定位研究

包涵体膜蛋白在沙眼衣原体致病过程中发挥重要的作用.为确定假定蛋白CT440在沙眼衣原体感染细胞中的定位及特征,本研究采用PCR方法从D型沙眼衣原体的基因组中扩增Ct440基因,克隆入pGEX-6p原核表达载体构建pGEX-6p/Ct440原核表达重组体,重组体转化到XL1-blue大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白GST-CT440.纯化后的CT440融合蛋白免疫小鼠制备抗体,间接免疫荧光(IFA)和Western blot测定抗体的特异性.特异性抗体用于分析CT440蛋白在衣原体感染细胞内的定位、表达时相特征及其对衣原体感染的影响.结果表明,CT440蛋白定位于沙眼衣原体包涵体膜上,为沙眼衣原体包涵体膜蛋白;该蛋白在衣原体感染12h后开始表达,直至持续到整个感染周期;转基因在胞浆表达的CT440融合蛋白不影响其后的衣原体感染.本实验为深入研究衣原体与宿主细胞间的相互作用,阐明衣原体致病机制提供了重要的实验依据.     

沙眼衣原体质粒蛋白研究进展

沙眼衣原体除含有高度保守的基因组外,也含一个7．5kb的隐蔽性质粒,隐蔽性质粒具有8个开放阅读（ORF1-8）,编码8种质粒蛋白pgpl-8。质粒蛋白在沙眼衣原体致病过程中发挥重要的作用,尤其是新近发现沙眼衣原体的唯一一种分泌到胞浆中的分泌性蛋白pgp3和对毒力相关基因具有转录调节功能的pgp4。对就沙衣原体的质粒蛋白研究现状进行了综述。     

genistein对沙眼衣原体感染细胞信号转导的影响

研究酪氨酸激酶抑制剂 genistein对IFN γ诱导沙眼衣原体感染细胞内信号转导的影响。以IFN γ作用于沙眼衣原体 (K血清型 )感染的McCoy细胞 ,用 genistein阻断IFN γ对沙眼衣原体感染细胞的作用。用台盼蓝染色法检测沙眼衣原体感染细胞存活率。用免疫印迹法检测蛋白酪氨酸激酶磷酸化及JAK1/STAT1活化的改变。结果显示 :genistein可拮抗IFN γ降低沙眼衣原体感染细胞存活率的作用 ,且具有剂量依赖效应。genistein可抑制IFN γ诱导的沙眼衣原体感染细胞蛋白酪氨酸激酶磷酸化及JAK1/STAT1活化 ,此作用且与genistein作用的剂量有关。     

衣原体质粒的研究进展

衣原体质粒是一个分子量约为7.5 kb,基因序列高度保守,非整合性的DNA分子,广泛存在于沙眼衣原体的各个血清型中,鼠衣原体和鹦鹉热衣原体也携带该质粒.近年来,人们发现衣原体质粒是一种毒力因子,可以导致小鼠输卵管积水.动物实验显示质粒缺失株可作为减毒活疫苗来预防衣原体感染所致的生殖道和眼睛的病变.不仅如此,衣原体质粒还是一种有效的基因操纵工具,可用于沙眼衣原体致病机制的研究.因此,开展对衣原体质粒的研究具有重要的意义.     

沙眼衣原体分子生物学分型方法研究进展

沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)引起的泌尿生殖感染是最常见的细菌性性传播疾病之一。明确CT分子生物学特征对衣原体疾病病理生理机制的阐明具有重要意义。CT的传统分型方法为血清型分型。CT的分子生物学分型方法主要基于编码CT主要外膜蛋白的omp A基因的序列分析。随着时间进展,新的高分辨率基因分型方法,如多位点序列分析技术、多位点数目可变串联重复序列分析技术、DNA-杂交技术、DAN芯片技术和全基因序列分析技术等为CT分型提供了极大的分辨率。本文对当下应用的多种CT分子生物学方法做一综述,从中获得的信息有助于衣原体相关疾病的针对性预防和治疗优化,旨在减少疾病传播。     

沙眼衣原体生长依赖MEK/ERK信号通路的激活

衣原体感染可激活宿主细胞的MEK/ERK信号通路,但该信号通路对表原体生长的影响尚不清楚.通过Western blot和免疫荧光试验分别检测MEK/ERK信号通路阻断后沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(MOMP)表达及沙眼衣原体感染滴度的变化.研究MEK/ERK信号通路对沙眼衣原体生长的影响.研究发现,MEK/ERK信号通路阻断后MOMP表达减少,同时衣原体感染滴度也明显降低.结果表明沙眼衣原体的生长依赖MEK/ERK信号通路的激活.     

泌尿生殖道沙眼衣原体omp1基因多态性研究

从中国不同城市收集疑为沙眼衣原体(Ct)感染的泌尿生殖道标本323份,巢式PCR扩增Ctomp1基因片段(包括4个变异区),测定其中96份阳性标本omp1基因序列,根据同源性分型并分析其多态位点;根据氨基酸序列,用Mega 3软件构建进化树,分析临床株与相应参考株之间的亲缘关系。从96份沙眼衣原体阳性标本中,检出28种基因变体,其中E型最常见;同时发现Ct E、F型omp1基因高度保守,而其它基因型都显示一定的变异性。进化树分析发现,各临床株与相应参考株之间遗传距离较近。实验结果表明沙眼衣原体omp1基因呈现较大的多态性,可为其疫苗的研制及感染的防治提供重要的实验依据。     

沙眼衣原体生殖道感染的小鼠模型及其应用

沙眼衣原体生殖道感染是严重危害人类生殖健康的一种常见的性传播疾病,研制安全、有效的疫苗是控制其感染的有效措施。在疫苗的研制中选择合适的动物模型非常重要。近几十年来学者们建立了多种沙眼衣原体生殖道感染的小鼠模型,根据接种途径可分为阴道内接种和子宫或卵巢囊内接种两大类。研究发现不同模型各有利弊,本文对两大类沙眼衣原体生殖道感染小鼠模型及其应用进行了综述。     

NALP3炎性体在沙眼衣原体感染中的作用研究进展

沙眼衣原体具有广泛的致病谱,不仅是感染性致盲的首要病因,也是性传播疾病的主要病原体。持续性炎症反应与沙眼衣原体感染致病密切相关。NALP3炎性体是一种细胞内多蛋白复合物,在Ct感染所致的持续炎症反应中发挥重要作用。本文就NALP3炎性体的结构和功能及其在沙眼衣原体感染中的作用作一综述。     

青海藏区B型沙眼衣原体的分离培养与鉴定

【目的】对青海藏区沙眼患者标本进行沙眼衣原体分离培养与鉴定。【方法】分别采集患者的单眼结膜和结膜囊拭子标本至1 mL样本保护培养基中。取50μL样本采用离心法感染BGM细胞,37°C培养72 h,连续传代3次,相差显微镜观察衣原体包涵体。对临床样本和分离株分别进行主要外膜蛋白基因ompA序列分析。【结果】共采集了45例活动性沙眼患者的115份临床样本,其中54份样本为ompA PCR阳性,15份样本为沙眼衣原体培养阳性。ompA分析发现,青海藏区沙眼衣原体有3个不同的同源ompA变异株,均为基因B型,都包含有一个泌尿生殖道型沙眼衣原体特有密码子。分离株QH111L和QH111R分别来自编号111患者的左眼和右眼样本,它们ompA基因的可变区有一个非同义碱基差异。该碱基变异仅存在于111号患者的左眼样本中,说明QH111L可能是新出现的ompA突变体。【结论】青海藏区的眼型沙眼衣原体流行株为基因B型,至少存在3个不同的ompA变异株。从青海藏区分离培养了15株眼型沙眼衣原体,发现同一患者的左右眼样本中的沙眼衣原体有不同ompA。本研究为研制沙眼疫苗和诊断试剂奠定了基础,也将有助于理解沙眼的进化和传播。     

IFA筛选经EMS诱导的沙眼衣原体突变株

目的:用甲基磺酸乙酯(Ethylmethylsulfone,EMS)诱导D型沙眼衣原体突变,利用间接免疫荧光法筛选出突变菌株,为研究不同衣原体基因的功能提供实验依据。方法:将D型沙眼衣原体标准株接种Mc Coy细胞,加入EMS诱导突变,收集存活菌株,利用空斑实验进行衣原体的分离和纯化,并用不同衣原体蛋白单克隆抗体做间接免疫荧光实验筛选突变株。结果:用间接免疫荧光筛选经EMS作用的沙眼衣原体,筛选出三株包涵体形态偏小的菌株(56#、58#、95#),一株圆形包涵体的突变株(61#)和一株D413N表达阴性的突变菌株(83#)。结论:用EMS作为诱导剂诱导D型沙眼衣原体突变,并成功筛选出三种突变株。为寻找衣原体功能基因与衣原体表型之间的联系奠定了实验基础。     

沙眼衣原体感染后大鼠输卵管糖蛋白的变化

目的：研究沙眼衣原体（chlamydial trachomatis,CT）感染后,输卵管粘膜的结构及糖蛋白的变化。方法：60只成年Wistar雌性大鼠随机分为实验组和对照组,实验组单侧卵巢囊接种沙眼衣原体E型株,对照组接种2SP代替沙眼衣原体,分别于接种后第0.5、7、14天取材,在光镜下观察输卵管的结构变化,并采用PAS-Alcian blue染色显示输卵管内糖蛋白组分的变化。结果：对照组输卵管粘膜结构和糖蛋白组分无明显变化;实验组输卵管受损部位主要局限于粘膜层,PAS-Alcian blue染色显示沙眼衣原体感染可导致中性糖蛋白分泌减少。结论：沙眼衣原体的感染可使输卵管糖蛋白组分发生改变,这可能与反复感染的宫外孕、输卵管性不孕的发生有关。     

肺炎衣原体的生物学特性与临床

自30年代发现衣原体后,在很长时间内,人们认识到的衣原体只有两类：沙眼衣原体（ChlaopdiatTachomarts,CT）和鹦鹉热衣原体（Chlaapdiapsittaci,CP）,并对它们进行了广泛、深人的研究。随着对衣原体认识的深人,新发现一种衣原体——肺炎衣原体（Chlaapdiapneumon。ae,Cwn）．回生物学特性1．1发现与命名：1956年我国台湾小学生进行沙眼的疫苗检测时,从沙眼患者的结膜中分离出一种新的衣原体,分离出的头两株分别命名为TW－－183和AR－－39,最初认为它是CT的一个株,并将此株统称为TWAR．进一步对衣原体的原体超微结构及DN…     

沙眼衣原体感染细胞中IFN—γ信号通路的初步研究

研究IFN γ诱导激活沙眼衣原体感染细胞中信号转导。采用Westernblotting检测IFN γ作用于沙眼衣原体K型株感染的McCoy细胞引起蛋白激酶磷酸化及其对Jak1,Stat1p91诱导活化的浓度效应和时相特点。IFN γ可以在短时间内引起沙眼衣原体感染细胞蛋白激酶的瞬时磷酸化 ;并在短时间内激活Jak1,Stat1p91,不同浓度作用下 ,5 μg/L时达最大活化 ;10min时活化程度最高。IFN γ可诱导沙眼衣原体感染细胞蛋白激酶磷酸化 ;并激活Jak1,Stat1p91。