仓储小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测技术的优化

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）是小麦仓储过程中的重要危害因子，其污染水平是仓储公司定期检测的重要指标。为提高DON检测的平行性和准确度，文章对仓储小麦DON检测过程中样品制备和酶联免疫吸附法（ELISA）检测关键技术进行优化。结果表明：样品制备过程中，将扦样后的样品先粉碎再分样的处理方法（方法 2）明显优于先分样再粉碎的方法（方法 1），测定样品的相对标准偏差由25.28%降至7.42%。另外，将ELISA检测过程中两种不同的移液枪使用方法（前进移液法和反向移液法）进行比较，发现前进移液法在10次测定中结果相对标准偏差较小，平行性较好；且加样过程中，采用不贴壁加样方式会使检测值更加准确，平行性也较好。优化后的仓储小麦中DON毒素ELISA快速检测技术具有较好的平行性和准确度，可用于实际仓储小麦中DON毒素的准确、快速检测。     

纳米磁性颗粒标记的免疫层析法定量检测人绒毛膜促性腺激素

目的:应用纳米磁性颗粒标记的免疫层析法研制用于早孕检测的快速定量层析试纸条。方法:应用EDC/NHS法标记纳米磁珠、Biodot喷膜仪喷点NC膜、双抗体加心法建立免疫层析试纸条、对磁信号进行检测并与ELISA实验做对比,并对结果进行评价。结果:建立了HCG纳米磁性免疫层析试纸条,检测到底线为1miu/ml的HCG抗原,检测灵敏度达到了同类产品ELISA分析法的标准;用此方法与商品化免疫胶体金试纸条对临床样本进行检测,检测符合率达99%,与ELISA法比较符合率达100%,且检测时间控制在5min以内。结论:该方法简单快速,灵敏度高,不仅可以应用于HCG的检测,同时为体内极微量抗原抗体的快速检测建立了新模式。     

研究报告：金抗体替代ELISA中的天然抗体用于溶菌酶检测

目的酶联免疫吸附测定(ELISA)被广泛用于抗体或抗原的检测,并被视为临床实践中的金标准,可提供相对可靠、灵敏和特异的检测结果。ELISA的本质是抗原与相应抗体之间的特异性相互作用。然而,天然抗体固有的不稳定性是ELISA的一个难以克服的弱点,并可能导致检测结果的重现性差甚至错误的诊断结果。本课题组先前应用构象工程方法开发了一种基于金纳米粒子的人工抗体(简称金抗体)。金抗体可以像天然抗体一样特异性地与抗原相互作用,并且具备远优于天然抗体的稳定性。出色的稳定性使金抗体可能成为天然抗体更好的替代物,用于ELISA中。方法经过必要的优化并与辣根过氧化物酶(HRP)耦联后,制得酶标金抗体10HRP-(Au-400P1),然后用酶标金抗体代替天然酶标抗体用于ELISA检测中。结果通过一系列的实验证明,抗溶菌酶金抗体可用于ELISA特异性检测1～16 mg/L范围内的鸡蛋清溶菌酶(HEWL)样品。结论金抗体可以替代天然抗体用于ELISA检测,并具有优于传统ELISA法的检测准确性和一致性。     

简易快速酶标免疫吸附试验

酶标免疫吸附试验(FLISA)具有敏感、准确等特点。国内通用的微量板法(Microplate)因受到仪器及器材限制,影响一步推广。为此,作者建立一个简易快速酶标免疫吸附试验方法(SR—ELISA)。本法不用分光光度计,不用微量板,不用终止反应。作者用此法测定了肝吸虫病人抗体,为了观察其敏感性及准确性,在测定时间使用了微量板 ELISA及琼脂扩散 ELISA(DIG—ELISA)进行了对比。结果说明 SR—ELISA 与微量板 ELISA 及 DIG—ELISA 具有相同的敏感性,但在操作上更为简易,可在4小     

两种方法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白生物学活性的对比分析

目的 对比分析2种检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(exendin-4-Fc fusion protein, Ex4-Fc)生物学活性的方法。方法 分别用细胞ELISA和报告基因法检测Ex4-Fc的生物学活性,同时对2种方法的专属性、检测范围、重复性、准确性和一致性进行考察。结果 2种检测方法均具有良好的专属性,检测范围基本一致(3.05 ng/mL～50.00μg/mL),重复性验证中RSD均<15%,回收率均在80%～120%之间,且2种方法检测结果差异无统计学意义(P=0.565)。结论 本研究评价的细胞ELISA和报告基因法对Ex4-Fc生物学活性的检测结果均具有良好的重复性和准确性,且两种方法具有良好的一致性,可根据具体的实验条件和要求选择不同的检测方法。     

Sensititre YeastOne显色药敏板与微量肉汤稀释法检测曲霉体外抗真菌药物敏感性的一致性研究

目的评估显色药敏板Sensititre YeastOne与微量肉汤稀释法检测曲霉体外抗真菌药物敏感性的一致性。方法使用同样的孢子悬液按照CLSI M38-A2微量肉汤稀释法和Sensititre YeastOne YO10对307株曲霉进行体外抗真菌药物敏感性试验,计算两种药敏方法结果间的基本一致性、分类一致性以及错误率。结果 CLSI M38-A2药敏试验显示98.4%(302/307)曲霉菌株对测试的6种抗真菌药物持野生型状态,Sensititre YeastOne则检出97.1%(298/307)菌株为野生型。除伊曲康唑外,其余5种抗真菌药物在Sensititre YeastOne与CLSI M38-A2间的基本一致性均90%。两种方法在曲霉药物敏感性检测的分类一致性为98.1%(301/307),极显著错误率为0.3%(1/307),显著错误率为1.6%(5/307)。结论Sensititre YeastOne在检测曲霉体外药物敏感性方面与CLSI方法一致性良好,可用于临床实验室曲霉体外药敏检测。     

一步法快速质粒鉴定方法

对《分子克隆实验指南》(第三版)中的牙签法小量制备质粒DNA的方法做了改进,减少了 加样次数,免去冰浴、离心等步骤,改进后的方法在琼脂糖凝胶电泳前仅需一步加样和加热过程, 提高了实验效率。同时结合使用多孔道移液器和96孔板,更适合于在高通量筛选中鉴定阳性克 隆。实验对改进后的方法与《分子克隆实验指南》上的方法进行了比较,表明“一步法”的检测效 果、准确率与重复性均有到较好的结果。     

双抗夹心ELISA法在无细胞百日咳疫苗生产质控中的应用

实验中对无细胞百日咳疫苗的脱毒工序优化后,采用双抗夹心ELISA法来检测百日咳有效组分含量,同时采用效价试验方法来验证结果。ELISA法定量测定有效成分的结果和效价试验结果均证明达到《中国药典》三部2005版的要求。由于双抗夹心ELISA法特异性强,灵敏度高,适用于无细胞百日咳疫苗生产各个环节的质量控制。     

抗菌肽抑菌活性测定方法的研究

探讨建立一种在抗茵肽分离、纯化过程中简单、快速、灵敏的检测抑菌活性的方法。以微量稀释法为基础,利用氯化三苯四氮唑的显色原理设计了简单的显色MIC方法,且用该方法与K—B以及常规微量稀释法做了3种标准菌株的对比。与K—B法及常规微量稀释法相比,TTC微量稀释法可以准确地判断细菌生长抑制终点,得到确切的结果。TTC微量稀释法反应灵敏．操作简便,尤其适合在分离、纯化过程中跟踪检测抗菌肽的活性。     

双歧杆菌脂磷壁酸抗体的制备及其在双歧制品中的检测应用

目的制备双歧杆菌脂磷壁酸抗体并用以检测双歧制品中脂磷壁酸和双歧杆菌活菌的含量。方法提取两歧双歧杆菌脂磷壁酸,加甲基化牛血清白蛋白与佐剂免疫预先已用卡介苗进行多克隆激活的BALB／C小鼠,间接ELISA法检测抗体效价与特异性,用免疫血清经双抗体夹心ELISA法和免疫结合微量培养的方法分别检测酸奶中脂磷壁酸和双歧杆菌活菌量。结果免疫血清最高效价可达1：1280,与所测其他人体双歧杆菌种属存在较强交叉反应,与非双歧杆菌种属无交叉反应。对于脂磷壁酸和双歧杆菌活菌的含量检测取得良好结果,检测线可达10^5 CFU／ml。结论以双歧杆菌脂磷壁酸制备免疫血清,效价高,属特异性好,可用于双歧食品中脂磷壁酸和双歧杆菌活菌的含量检测。