微繁殖系统中出现的细菌污染

植物组织培养研究者和微繁殖者常常通过肉眼观察来确定培养物是否有污染物.但是,Neo Plants Ltd公司和诺丁汉大学农业学校的C.Leifert及其同事发现,大多数被污染的植物组织培养物看起来都是健康的,尽管其繁殖速度减慢.Leifert等研究了从落新妇、假升麻、墨西哥桔、黄栌、翠雀、扶郎花、黄花菜、玉簪、鸢尾、报春花和唐松草等属植物上分离的198种细菌污染物,发现90%属于芽孢杆菌属、肠杆菌属、微球菌属、葡萄球菌属和乳杆菌属.通过比较从新鲜外植体和培养了一年多的植株上分离的微生物以及考虑污染物的自然生境,可以发现污染的来源. Leifert等进行的研究表明,1/3～1/2的污染是由于操作引起的1/4～1/2的污     

竹节参的组织培养与植株再生

植物名称:竹节参(Panax japonicum)。材料类别:嫩茎、根茎。培养条件: 培养基:(1)MS IAA1 2,4-D1 KT0.1(浓度单位:mg/l,下同);(2)MS IAA1 2,4-D0.5 NAA2.5 KT0.1;(3)MS IAA1 2,4-D0.2 KT2。培养物置于23±1℃,1600—2000lx照光12小时的条件下静置培养。生长与分化情况:嫩茎和根茎截段当置于(1)培养基上,10天后便可见到外植体变粗变厚,切口处凹凸不平,略带白色或微黄色,15天后出现瘤状突起,并逐渐形成致密的淡黄色愈伤组织,初时愈伤组织生长缓慢2～3个月以后生长稍快,将愈伤组织移至培养基(2)后,约经1个月可见愈伤组织表面     

鸢尾的组织培养

植物名称:鸢尾(Iris tectorum)。材料类别:种子。培养条件:培养基:(1)MS+IBA0.5mg/l(单位,下同)+BA1+KT1;(2)MS 0(无生长素的MS培养基)。培养物置于25℃恒温,光照度1000—2000lx,日照10—12小时的条件下培养。生长与分化情况:将一粒种子播于培养基(1)上,进行静置培养。约经2个月后种子萌发,伸出子叶,成为无根子叶苗。子叶苗下胚轴接触培养基处的组织形成膨大的小块突起,形似球状,以后小块数目逐渐增多,形成结节状组织。在播种后的第四个月,可见到结节组织的球状突起处分化出小苗,     

不同培养基组合提高土壤细菌可培养性的研究

为选择性采用多培养基组合以提高土壤细菌可培养性,利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术研究了贫营养、富营养和自然营养培养基在3种培养方式下获得细菌种群的差异。结果表明:平板培养条件下,细菌在贫营养培养基上生长较慢,菌落连续稳定形成。培养5d后,富营养的LB培养基和贫营养的R2A培养基获得菌落数最多,分别是贫营养的0.1×LB培养基获得菌落数的5.1倍和5.3倍。7种培养基中,LB培养基获得细菌种群数目最多,营养成分适当稀释后,培养物中有新的种群出现。贫营养培养基和富营养培养基培养物DGGE图谱相似性低,条带互补性强。三角瓶静置培养时,R2A和LB培养基获得细菌种群数目较多,其它几种培养基获得的细菌类群都能在这2种培养基中找到。试管静置培养条件下,LB培养基获得细菌种群数目最多,某些种群也只出现在R2A培养基和TSB培养基上,R2A及LB培养基与TSB培养基获得的细菌种群差异较为明显。研究结果为特殊培养基设计及选用合适培养基分离土壤细菌提供参考。     

在离体条件下拐芹(Angelica polymorpha)形成胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织过程中几种内源激素的变化(英文)

以拐芹(Angelica potymorpha)的叶柄为外植体,在附加2,4-D(1mg/L) KT(0.5mg/L)MS培养基上诱导脱分化,40天内可形成愈伤组织。在相同的培养基上经过继代培养,可在20天内形成胚性愈伤组织(Embryogenic Callus,EC)和非胚性愈伤组织(Non-Embryogenic Callus,NEC)。将不同天数的培养物作为样品,提取其内源激素;气液相色谱(Gas-Liquid-Chromatography,GLC)测定结果发现,内源ABA,GA_3,CTK和IAA的水平都有变化,尤其是ABA,GA_3。这些结果表明内源ABA和GA_3在胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织的分化过程中起着重要作用。     

2,4-D浓度对胡萝卜体细胞胚胎发生及其同工酶的影响

在含有不同浓度2,4-D的MS培养基上生长的胡萝卜组织,培养26天后,不含2,4-D培养基上的培养物,其酯酶同工酶谱比在含有2,4-D培养基上的培养物少一条酶带8(图3)。过氧化物酶同工酶谱中,发现前者出现的酶带1(图4)在后者的酶谱中看不到。 胡萝卜的培养组织和完整的小植物皆具有分泌过氧化物酶和酯酶的能力。总过氧化物酶活力的变化与愈伤组织、胚状体和小植物的形成有一定关系。     

用抗病毒剂清除病毒

人们一般用分生组织或苗尖培养法来清除植物病毒,但使用这些技术并不总是有效。印度National Botanical研究所的S.K.Raj及其同事发现向培养基中加入100～150mg/l抗病毒剂ribavirin(virazole、virasole、viramid、1-β-ribofuranosyl-(H-1,2,4-trizole-3-carboxamide)可完全清除茄子(Solanum melongena)苗尖培养物中的茄子斑皱病毒(eggplant mottled     

小花老鼠簕可培养细菌多样性及其生物学活性研究

小花老鼠簕(Acanthus ebracteatus)是一种生长在红树生态系统的珍稀真红树植物,具有较高的药用价值。为研究小花老鼠簕内生及根际可培养细菌多样性,挖掘其潜在新物种及具有特殊生物学活性的菌株,该文利用7种不同培养基,通过传统稀释涂布法对小花老鼠簕各植物组织及根际土壤可培养细菌进行分离,基于16S rRNA基因序列解析其内生及根际细菌群落结构和多样性特征,应用植物病原菌平板对峙实验和平铺捕食活性测试分析其可培养细菌的抗菌活性。结果表明：(1)基于16S rRNA基因序列分析,发现从小花老鼠簕的根、茎、叶、花及根际土壤中分离得到144株可培养细菌,这些细菌隶属于18目26科37属66种,芽孢杆菌属(Bacillus)和链霉菌属(Streptomyces)为优势菌属,分别占细菌种数的15.1%和13.6%;(2)拮抗多种植物病原菌试验结果显示,获得29株具有拮抗植物病原菌活性的细菌,10株具有广谱抑菌活性,其中链霉菌属菌株拮抗作用最强且菌株Y129为潜在新物种。(3)捕食活性测试结果显示,有5株细菌对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、耐甲氧西林金黄色葡...     

环境保护及农业废物利用

920789采用筛选出的土维中固有细菌增进土镶中烃类的降解〔英〕/Veeehioli,G.I.…2 Environ.Poll-ut一1500,67(s),249~255〔译自DBA,1991,10(12),91一07216〕 采用土壤中分解烃类化合物细菌的混合菌群可促进石油化学废料的生物降解。混合培养物是从土壤中分离出来的。通过将1克土壤加到补充有烃类的无机培养基中可以得到富集的培养物。对混合培养物进行了鉴定,系假单胞菌(尸8e“‘。,口“a约FN了了5一5、假单胞菌FN775一i以及产碱菌(AI-caz‘ge,e。)FN775一2。将芳香烃贮存堆底的残留物与土壤(10%w/w)进行混合。经1个月后,在未接种和…     

环境因素对PlnA诱导类植物乳杆菌产生细菌素效果的影响

【目的】研究人工合成的PlnA (Plantaricin A)诱导类植物乳杆菌L-XM1细菌素合成的功能及环境条件对其诱导效果的影响。【方法】制备类植物乳杆菌L-XM1 Bac?培养物, 用人工合成的PlnA对其进行诱导, 确定PlnA在类植物乳杆菌L-XM1细菌素合成中的作用, 并通过比较不同温度、pH以及NaCl浓度、乙醇浓度条件下PlnA的诱导活性, 研究环境条件对PlnA诱导效果的影响。【结果】在不同温度及pH条件下, 自诱导肽PlnA的诱导活性有很大的差异, 较高的培养温度及pH有利于其诱导活性的发挥。不同浓度的NaCl对PlnA的诱导活性影响不大。乙醇可以减弱PlnA的诱导活性, 高浓度的乙醇完全抑制PlnA的诱导活性。6%乙醇对细菌素合成的抑制可以被700 μg/L的PlnA消除, 含有8%乙醇的培养基中, 恢复细菌素的合成需要浓度高达1 000 μg/L的PlnA。【结论】环境条件可以影响诱导肽PlnA的诱导活性, 乙醇对细菌素合成的抑制可以通过增大PlnA的浓度消除。     

香蕉组织培养过程中内生菌污染的控制

研究了体外培养一种孟加拉传统香蕉(Musa spp.Cv. Kanthali)的茎尖组织。茎尖的原始细胞表面经无菌处理(0.1%HgCl2处理12min) ,接种6~15d后外植体地下茎部分仍有微生物污染(大部分是细菌) ,杀死了85%的外植体。为确定无污染培养基,将等量外植体分别浸泡在含400mg/L氨苄青霉素和200mg/L庆大霉素(两种光谱抗生素)的培养基中1h。结果表明,经抗生素处理的外植体完全没有污染,但培养3周后不能再生。进行二次继代培养后,其中一部分外植体吸收了培养基并胀大,颜色由苍白转变成浅绿或深绿。三次继代培养后数天,不再观察到外植体的生长,所有经抗生素处理过的外植体都开始死亡。在未经抗生素处理的活外植体中,单个茎发育的最佳培养基是:MS 4.0mg/L BA 0.5mg/L KT 15% CW,平均生长时间为18~21d,但再生率很低,只有30%。茎细胞增殖的最佳培养基是:MS 4.0mg/L BA 2.0mg/LIAA 15% CW,每个茎平均只萌发3~4个芽。最后,在添加0.5mg/LIBA的一半浓度的MS培养基中,体外培养茎最大生根率达到90%。     

用抗生素消除橡胶培养物中的常见污染物

在植物组织培养系统中很少有关于成功控制微生物污染物的报道。然而,Z.A.Wilson和J.B.Power说,他们已有办法消除如污染橡胶树茎切段外植体的十种常见的细菌和酵母。他们测试了21种不同的抗污染物的抗生素。结果是,没有一种能单独对所有微生物有效,链霉菌和四环素杀死了七种细菌,红霉素杀死了六种。制霉菌素能控制酵母。每毫升培养基中加入32μg红霉素,16μg制霉菌素和16μg链霉素,即可使外植体的污染程度     

菊花名种“绿牡丹”叶片再生植株

植物名称:菊花(Chrysanthemum morifolium)名种“绿牡丹”。材料类别:将展开的幼叶。培养条件:基本培养基用MS,诱导愈伤组织附加激素(mg/1),6-苄基嘌呤2,萘乙酸0.05。诱导芽分化的培养基与上面相同。分化根的培养基为MS培养基,附加萘乙酸0.4。培养温度25—28℃。每天光照10—12小时,光强为10001ux。     

野牛草成熟胚离体培养及植株再生

1植物名称野牛草[Buchloe dactyloides(Nutt.)texoka]. 2材料类别成熟胚. 3培养条件(1)愈伤组织诱导培养基:MS 2,4-D1.5～6.0 mg·L-1(单位下同) 6-BA 0.1 脯氨酸1 000 水解酪蛋白(CH)500 谷氨酰胺500 α-酮戊二酸100 硫代硫酸银(STS)5;(2)愈伤组织继代培养基:MS 3/2MS(有机) 2,4-D 2.5 6-BA 0.1 CH1 000 聚乙烯吡咯烷酮(PVP)200或维生素C(vC)200;(3)再生培养基:不附加任何植物生长调节物质的MS基本培养基(MS0).所有培养基中均添加3%蔗糖、0.56%琼脂,pH 5.8.愈伤组织诱导及继代培养为暗培养,不定芽分化及植株再生过程中光照12 h·d-1,光照度为1 500lx,培养温度为(25±1)℃.     

毛叶杜鹃叶片的不定芽分化

植物名称:毛叶杜鹃(R.mollicomum)材料类别:叶培养条件:培养基:1/4MS+Z2(mg/l)。培养物置于25℃恒温,1000～2000lx光照度,日照10～     

铁线蕨的组织培养及植株再生

1植物名称铁线蕨(Adiantum capillus-veneris). 2材料类别茎尖. 3培养条件(1)愈伤组织诱导培养基:MS 6-BA2.0 mg·L-1(单位下同);(2)愈伤组织继代增殖培养基:MS 6-BA 1.0;(3)愈伤组织分化培养基:1/2MS 6-BA 0.5;(4)再生植株壮苗培养基:1/2MS 6-BA 0.1;(5)生根培养基:1/2MS NAA 0.5.以上培养基均含蔗糖30 g·L-1、琼脂0.7%,pH 5.5～5.8.培养温度(25±2)℃,光照度1 500～2 000 lx,光照12 h·d-1.     

哺乳类基因工程的一些实验操作 实验10X噬菌体DNA 体外包装

一、需用的菌株及其特性鉴定 1.菌株及其基因型 (1）大肠杆菌E. coli BHB2688，基因型为：N205 rec＾一〔rimm"`9 clts, b2, red-, Earn, Sam/r.lo (2）大肠杆菌E. coli BHB 2690，基因型为： N205 recA- [rimm"9`. cIts, b2, red-. Dam, Sam/r]. (3）大肠杆菌E. coli K802，基因型为：hsdR+, hsdM+.} gal-, met-, SUPHO 2.鉴定clrs基因 (1) BHB 2688和BHB 2690各自接种在2只LB 培养基上。一只置32℃下培养，另一只置42℃下培 养。在32℃培养的平板上挑取单菌落，接种在LB培 养液中，32℃培养过夜。 (2）再将培养液中生长的细菌划线接种在2只 LB培养基上，分别置32℃和42℃下培养。如果细菌 只在32℃ 下生长，则可用于制备包装用的抽提物。 3.鉴定，cA基因 (1)在LB平板上，平行划线接种BHB 2688, BHB 2690和K802o (2）用厚纸遮住培养皿的一半，打开培养皿盖置 紫外线下照射。然后在犯℃下培养过夜。 (3）厚纸遮挡部分的培养基上，BHB2688和BHB 269。生长，紫外线照射的培养基上则不生长。K802 不受紫外线照射的影响都能够生长。     

茅尾海红树根际土壤可培养细菌多样性及抑菌活性研究

为挖掘茅尾海红树植物根际土壤可培养细菌资源,研究其抑菌活性,该文使用培养基对茅尾海5种红树植物(红海榄、黄槿、无瓣海桑、桐花树、阔苞菊)的7份根际土壤进行富集培养,选用6种不同分离培养基对富集样品进行可培养细菌的分离纯化,基于菌株16S rRNA基因序列信息进行物种多样性分析,并采用纸片法筛选具有抑制表皮葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌活性的菌株。结果表明:(1)从7份红树植物根际土壤样品中分离到120种可培养细菌,隶属于35科47属,其中链霉菌属(Streptomyces sp.)占菌种总数的 14.2%,同时发现5种潜在新菌株。(2)通过抑菌活性初筛,发现9种细菌的发酵粗提物对至少一种致病菌具有抑菌活性。综上表明,茅尾海红树植物根际土壤可培养细菌多样性丰富,并且部分菌株具有抑制人类致病菌活性。该研究结果为新型抗生素的开发与利用提供了菌种资源。     

有棱丝瓜的组织培养及快速繁殖

1　植物名称　有棱丝瓜 (Ｌｕｆｆａａｃｕｔａｎｇｕｌａ)品种“绿旺”。2　材料类别　真叶、下胚轴、上胚轴及胚芽。3　培养条件　基本培养基为 ( 1 )ＭＳ。诱导愈伤组织培养基 :( 2 )ＭＳ 6 ＢＡ 5ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＮＡＡ 0 .5。诱导胚性愈伤组织及分化培养基 :( 3)ＭＳ 6 ＢＡ 2 ＩＡＡ 0 .2 ＩＢＡ 0 .2。胚性愈伤组织继代增殖培养基 :( 4 )ＭＳ 6 ＢＡ 4 ＫＴ0 .5 ＮＡＡ 1。生根培养基 :( 5 ) 1 /2ＭＳ ＩＡＡ 0 .2。以上培养基 ｐＨ均为 5 .8。糖浓度在培养基 ( 1 )、( 2 )、( 4 )、( 5 )中为 3% ,在培养基 ( 3)…     

砂梨品种的试管繁殖

植物名称:砂梨(Pyrus pyrifolia)。品种:“幸水”、“杭青”、“黄花”及“青云”。材料类别:一年生幼龄和九年成龄嫁接树的茎尖、腋芽。培养条件:接种培养基为1/2MS大量元素,MS微量元素,有机物和铁盐。附加BA 1.0mg/L(单位下同),NAA 0.2,GA_3 2.0。增殖培养基为(1)MS;(2) 同接种基本培养基;(3) N_6大量元素,MS微