四细胞杂交克隆的NORs活性和均染区的巨染色体

通过聚乙二醇使3个小鼠细胞与1个中国仓鼠骨髓细胞融合,获得四细胞杂交克隆。在第6世代,该杂种细胞含有100条小鼠染色体和5条仓鼠染色体。本文报道在杂种细胞中双亲NORs活性均受抑制,不仅73.2％的仓鼠NORs活性被抑制,而且还有18.3％的小鼠NORs失去了活性。由于在杂种细胞中,仓鼠第3号染色体上的NORs活性仍保留它原来的91.2％,因此我们的结果表明:不同染色体上18s和28s rRNA基因的转录活性可有明显的差异,这可能与它们所在的染色体结构有关。我们首次报道了杂种细胞中所出现的均染色区巨染色体,并对这条巨染色体进行了G-带、C-带和Ag-NORs的分析。对这条巨染色体与18s和28srRNA基因扩增的关系进行了初步讨论。     

5-溴脱氧尿苷抑制中国仓鼠核仁形成区活性的研究

当培养基中BrdU浓度提高至9—30μg/ml时,会使中国仓鼠二倍体细胞和细胞株wg3h的银染NORs(Ag-NORs)总数明显减少。不同浓度的BrdU对中国仓鼠细胞NORs活性影响的研究表明,中国仓鼠细胞NORs活性受抑制的程度随培养基中BrdU浓度的提高而加强,还与BrdU处理的时间有密切的关系。这些细胞在无BrdU的培养基里继续生长30小时后,它们的NORs活性可以得到恢复。BrdU对中国仓鼠细胞NORs活性的抑制作用很可能是一种毒性效应。本文还对BrdU抑制中国仓鼠细胞NORs活性的机制进行了初步的讨论。     

BrdU抗性细胞特性的研究——Ⅱ.四个抗性亚系核仁形成区(NORs)活性和DrdU抑制NORs活性机制的探讨

从中国仓鼠细胞株Wg3h中,通过BrdU处理获得了两个抗30μg/ml BrdU和两个抗60μg/ml BrdU的抗性细胞亚系。银染NORs(Ag-NORs)的分析表明,除了一个抗性细胞亚系外,其他3个亚系NORs的活性都明显地被BrdU所抑制,即主要是表现在细胞Ag-NORs数和携带Ag-NORs染色体数的明显减少。不同BrdU抗性亚系NORs活性被抑制的程度可有很大的差异。在培养基里除去BrdU后,抗性细胞被BrdU抑制的NORs活性可以逐步得到恢复,但其恢复的速度显然比Wg3h细胞缓慢得多。抗性细胞NORs活性受抑制,与Wg3h细胞一样,是由于BrdU毒性的缘故。     

用DNA分子杂交研究两种人体胸苷激酶基因间的同源性

本实验从人体细胞质胸苷激酶(TK-C)基因分离出不含Alu重复顺序的3个DNA片段,分别次级克隆在质粒pBR322上,定名为pRR0.92,pXR1.5和pHK1.25。用pXR1.5和pHK1.25为探针,作Southern印迹杂交分析,都不能与小鼠细胞Ltk、CD-1、A9和BALB/c的DNA杂交。但是pXR1.5能与中国仓鼠细胞E36 DNA 23kb Bam HI片段杂交,出现信号很弱的杂交带.这提示以TK-C基因来说,人同中国仓鼠间的同源程度似大于人同小鼠的同源程度。在降低杂交严紧度的条件下,pHK1.25能与含人体16号染色体而不含17号染色体的人鼠杂种细胞DNA杂交,只是杂交信号极弱。我们推测人体TK-C基因(位于17号染色体)与人体TK-M基因(位于16号染色体)可能有某种程度的同源性,pHK1.25对进一步克隆TK-M基因也许是有用的。     

大鼠非致瘤四倍体细胞系的建立及细胞遗传学和酶学特征

从大鼠自然诱发的肉瘤细胞中,我们建立了一个四倍体细胞系(4n=84),命名为RC(ratcell)。它具有典型的成纤维细胞外形,能在玻璃表面贴壁生长,但不能生长在琼脂半固体培养基中。该细胞在含15％小牛血清的RPMI 1640培养基中生长良好,至今已连续繁殖112世代,细胞群体倍增时间约为15小时。染色体G-带分析表明,RC为整四倍体细胞,它的1条X染色体在第32至34区为均染区。RC细胞核仁组织者(NORs)活性显然比大鼠二倍体细胞NORs活性的加倍还高(P<0.001)。这个具有非常高NORs活性的RC细胞系对于研究细胞18S+28S rRNA基因转录活性的调控、基因表达与基因剂量关系有一定的意义。RC细胞还有异常高的磷酸酯酶活性,而且它的同工酶谱也与大鼠肌肉细胞明显不同。体内接种实验和扫描电镜的观察表明,RC是非致瘤细胞。RC细胞各号染色体的C-带图样与大鼠二倍体细胞无明显的差异。     

甘肃仓鼠的核型与分类地位

利用常规核型和带型技术对分布于陕西宁陕的甘肃仓鼠进行了研究, 其核型为2n = 24 = 16 m + 4 sm +2st + 2t 。由于没有得到雄性个体, 所以很难确定性染色体。部分染色体有着丝粒C - 带, 有1 对亚端染色体长臂具较大近着丝粒异染色质带, 暂定为X染色体。3 对染色体上有NORs。与已有报道的大仓鼠染色体比较, 两者有显著差异。因此从染色体特征上看, 将甘肃仓鼠作为大仓鼠的亚种是不合适的。     

小鼠肿瘤细胞染色体核仁组织者的细胞化学观察

本文报道用Ag-AS染色技术对几种小鼠肿瘤细胞(Ehrlich腹水瘤,肉瘤180,淋巴瘤1号)核仁组织者(NORs)的观察结果,发现肿瘤细胞的NORs即18 S+28 S rDNA或核糖体基因的位置和大小与正常细胞的不同。正常小鼠细胞有3—6条染色体带有银染色的核仁组织者(Ag-NORs),分布位置都紧靠在着丝点下方;而三种小鼠肿瘤细胞都有一个中等大小的近端着丝点染色体,其Ag-NOR的位置移至长臂的中部。小鼠淋巴瘤1号     

小鼠在Ⅱ型细胞角蛋白基因CK-4和CK-8定位于第15染色体

用人的CK(细胞角蛋白)cDNA片段为探针,与小鼠-中国仓鼠杂种细胞DNA作Southern印迹杂交,将小鼠CK-4和CK-8基因定位在第15染色体。     

中国仓鼠肺细胞双份染色体及其DNA分子的交换重组

艾菲的咔啉(aphidicolin)能抑制真核生物细胞核内的a-多聚酶,同时还能诱导中国仓鼠细胞核内DNA分子的内复制,由此形成的双份染色体经5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记,单股BrdU替换的染色单体总是位于双份染色体的内侧,而双股BrdU替换的染色单体总是位于双份染色体的外侧。DNA分子在内复制的过程中,经交换重组,表现在双份染色体上为姐妹染色单体内的交换和非姐妹染色单体间的交换。双份染色体中的4条染色单体在有丝分裂中前期,从三维空间构型变为平面构型时,在引力和张力的相互作用下,致使染色单体在交换处发生扭曲,成形染色单体间的交叉,从而使有直接亲缘关系的染色单体仍成对联系在一起呈规则分布状态。     

用人DNA介导的基因转移修复中国仓鼠细胞的HPRT缺陷

 中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)经N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱变和6-巯基鸟嘌呤(6-TG)选择,得到稳定的次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)缺陷细胞株,酶活性仅为野生型的6.5％。用磷酸钙共沉淀法和电脉冲法向HPRT-细胞转移人宫颈癌细胞(HeLaS_3)基因组DNA,纠正了CHO细胞的HPRT缺陷。酶活性提高了6.9倍,达到野生型的45％。用Alu序列探针进行分子杂交,证实经过基因转移并连续传代15次以上的受体细胞中含人DNA序列。表明人的有关基因已稳定地整合到CHO细胞的染色体中。     

人体淋巴细胞和中国仓鼠杂种细胞FD1的建立和鉴定

本文以中国仓鼠肺细胞Wg3-h(HGPRT~-)和正常人的淋巴细胞作为亲本,借助仙台病毒促融,HAT培养液选择得到FD1杂种细胞。通过观察细胞形态、Giemsa-11分化染色,G-分带、G-6-PD和LDH同工酶的电泳等一系列鉴定指标,以及细胞周期的研究,证实FD1细胞是包含全套中国仓鼠染色体组和少数几条人的染色体(5、11、12、21、22、xq~-、Y等)的杂种,其中还存在中国仓鼠和人体染色体的易位。FD1等杂种细胞的建立将有助于进行人类基因制图以及人体基因的结构功能和表达调控的研究。     

中国仓鼠与草鱼体细胞融合的一初步研究

以仙合病毒作徽合处理,在所观察的分裂相中,有。．,一1％的细胞为含两种动物染色体的新型细 胞— 鼠1鱼杂种细胞。 关徽询：中国仓鼠,草鱼,细胞融合     

细胞培养中癌变原理的研究——Ⅱ.用胰蛋白酶-G-分带法对转化的和正常的金仓鼠乳鼠肺细胞核型的比较分析

用胰蛋白酶-G-分带法对用甲基硝基亚硝基胍(MNNG)转化的金仓鼠乳鼠肺细胞及未转化正常细胞的核型进行了比较分析。为了便于控制胰蛋白酶处理的时间,采用较稀的(0.01%)胰蛋白酶溶液,在室温和pH 8.2条件下处理1—3分钟,然后染色(两步法);或将胰蛋白酶直接加在染液中(一步法),均取得较好的结果。用MNNG 转化的金仓鼠乳鼠肺细胞BHLB-4 系,其染色体众数仍保持二倍性,但用G-分带法进行核型分析的结果表明,某些表面上看来是二倍体的分裂相,其核型实际上是不正常的,表现为某些染色体的单体性或三体性,并出现额外染色体,故称之为假二倍体核型。由此可见,在转化过程中,金仓鼠乳鼠肺细胞的核型发生了一定的改变,但除第8号染色体单体性的出现频率较高(7/20)外,未发现其他规律。     

小鼠网织细胞腹水瘤染色体的研究

本文首次报告了我国建立的小鼠实验肿瘤模型网织细胞腹水瘤(Ascitesreticulum-cell sarcoma,简称ARS)的核型及带型分析结果。ARS是超二倍体肿瘤,染色体众数为44(37.7％)。发现有七条标记染色体。文中着重描述了ARS染色体的形态学特征,G带和C带分布以及核仁组织者区(NORs)的定位。     

人骨形态发生蛋白7在中国仓鼠卵巢细胞中的表达研究

目的:构建重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP7)表达质粒,并研究其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达。方法:将hBMP7重组表达质粒电转到中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中,并用DOT-BLOT和ELISA方法分析检测rhBMP7在重组CHO细胞中的表达。结果:hBMP7 cDNA整合到CHO细胞基因组中并被转录。点杂交和ELISA检测证实rhBMP7在CHO细胞中得到表达。结论:hBMP7成功在CHO表达系统中得到表达。     

高纯度大豆卵磷脂对中国仓鼠肺细胞染色体畸变作用

目的研究高纯度大豆卵磷脂对中国仓鼠肺细胞（cHL）染色体畸变作用。方法测定高纯度大豆卵磷脂对CHL细胞的半数抑制浓度（IC50）,根据IC50设立不同剂量组,进行正式试验,分别观察高纯度大豆卵磷脂接触CHL6h,24h及加S9后6h染色体的畸变情况,根据标准进行结果判定。结果染毒6h,24h及加S9后染毒6h染色体畸变为阴性。结论高纯度大豆卵磷脂不能引起CHL细胞染色体产生畸变作用。     

PBNA诱导体外培养的金仓鼠肺细胞瘤性转化的研究

选用次代培养的新生金仓鼠肺细胞,首次在体外证实了水不溶性弱致癌物N-苯基-β-萘胺(N-phenyl-β-naphthylamine,PBNA)的瘤性转化活性。细胞经PBNA悬液处理后30-60天显示出恶性细胞的生物学特性,包括失去接触抑制,在体外能无限制生长,出现交叉重叠的转化细胞灶,细胞获得ConA凝集性,在琼脂半固体培养基上生长成集落,有异常(三极分裂、四极分裂)有丝分裂,在免疫抑制的新生小鼠皮下接种后形成瘤结节。扫描电镜示其与对照细胞有不同的形态特征。     

人参皂苷Rb_3对中国仓鼠肺细胞染色体畸变作用

目的研究人参皂苷Rb3对中国仓鼠肺细胞（CHL）染色体畸变作用。方法测定人参皂苷Rb3对CHL细胞的半数抑制浓度（IC50）,根据IC50设立不同剂量组,进行染色体畸变试验,分别观察人参皂苷Rb3接触CHL细胞6 h、24 h及加S9后6 h染色体的畸变情况,根据标准进行结果判定。结果染毒6 h、24 h及加S9后染毒6 h染色体畸变为阴性。结论人参皂苷Rb3不能引起CHL细胞染色体产生畸变作用。     

程序性细胞死亡抑制基因Dad-1在水稻和玉米中的FISH定位(英文)

Dad-1是一种在动物和植物中都非常保守的细胞程序性死亡 (PCD) 抑制基因。作者利用 FISH (荧光原位杂交)首次把单拷贝水稻Dad-1基因物理定位在水稻第2号染色体短臂的端部(Fig.2 A,B&C)。我们还分析了它在玉米基因组中的同源序列。Southern 杂交结果显示在玉米基因组中确实存在水稻Dad-1 的同源序列(Fig.1)。FISH进一步展示了三个杂交信号分别在玉米4、5号染色体长臂和9号染色体短臂上(Fig.2 D,E&F),其信号距着丝粒的百分距离(FL值)分别为 91、98和96。其杂交位点的位置与水稻Dad-1所处的相对位置是相似的,它们都处于染色体臂的端部。这表明在一定的程度上,Dad-1基因不仅在序列同源性上而且在所处的染色体位置上具有保守性。 水稻Dad-1基因在水稻中的杂交信号检出率 (38%) 高于玉米中的。这表明与玉米相比,水稻Dad-1 基因的编码序列更容易与水稻染色体杂交;它与玉米中的相应序列可能只是部分同源。     

三种壁虎染色体核仁组织者的银染色观察与蹼壁虎的核型

本文以骨髓细胞为材料, 采用常规制片法和一步银染色技术,首次报道了无蹼壁虎、铅山壁虎和多疣壁虑的NORs,并用α-巯基乙醇短期培养无蹼壁虎的骨髓细胞,分析其核型。结果表明,3种壁虎都仅显示一对NORs,也未见有融合现象。其中无蹼壁虎的NORs位于第18对染色体的次缢痕区,而铅山壁虎和多疣壁虎分别位于第19对和第14对上。另外,我们从C带分析中发现,铅山壁虎和多疣壁虎的NORs位点均为结构异染色质区。经α-巯基乙醇培养的无蹼壁虎的染色体明显“拉长”。具次缢痕的染色体可从以往报道的第 19 对调整为第18对,其次缢痕区也比直接制作的标本大而清晰。