应用斑点酶联免疫吸附试验对实验性临床病料的初步检测

先用实验室保存的口蹄疫病毒A和O两个血清型标准毒株分别制备出单克隆抗体(McAb)和多克隆抗体(PcAb),然后取经人工感染O型猪产生的水泡液或1:10稀释的水泡皮研磨浸出液,滴一滴(约2～4μl)至硝酸纤维素膜。硝酸和醋酸混合膜和醋酸纤维素膜的印圈中央,自然干燥,加封闭液作用30分钟,常规洗条;分组分别滴加ⅥcAb和PcAb,洗涤;加辣根过氧化物酶标记兔抗BALB/C鼠免疫球蛋白结合     

番木瓜茎尖和侧芽的离体培养

植物名称:番木瓜(Carica papaya)。材料类别:茎尖、侧芽。培养条件:取自大田1.4～1.7m高植株上的外植体经10％漂白粉或0.1％升汞(其中加1～2滴Tweon-20)表面消毒8～10分钟,再用灭菌水洗3～4次,切成2～3mm的楔形片。诱导丛芽分化的MS培养基,大量元素提高0.5倍,附加NAA0.1～     

极化过程影响巨噬细胞的铁代谢

本文旨在研究巨噬细胞极化过程对自身铁代谢调节的影响.用20 ng/mLγ干扰素(interferon gamma,1FN-γ)刺激猪肺泡巨噬细胞(3D4/2细胞)24 h,诱导其为M1型巨噬细胞,另外用10 ng/mL白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)联合10 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子(macr...     

果蝇唾腺染色体的观察和制片方法的改进

几年来我们在教学中进行了多方面的实验探索,在果蝇唾腺制片方法上加以改进,采用加蔗糖液保色,树脂胶封边,制备一种半永久制片标本。操作过程如下: 1.取出唾腺,在其上加2滴(37℃)蒸馏水低渗处理10～20分钟,使唾腺细胞涨大有利于染色体的分散。 2.用滤纸吸去蒸馏水,加1滴1N HCl解离8～15分钟(时间随当时的温度而定),吸去解离液,用蒸馏水轻轻冲洗2～3次,将水吸净。     

猪脾细胞干扰素的制备及其某些特性

本文报导了猪脾细胞在新城疫病毒-F株(NDV-F)诱生下,能产生抗病毒物质。此物质具有对胰旦白酶敏感,不能通过透析膜等干扰素性质。粗制猪脾细胞干扰素(PSIFN)在乳猪肾原代细胞上的平均效价为1.3×10~5U/ml。用猪干扰素预处理细胞,再加诱生剂,可提高PSIFN产量。PSIFN对酸(pH2.5),加热(56℃),表面活性剂(0.1％SDS)处理均敏感。比较了PSIFN在几种异种细胞上的抗病毒活性,结果表明:在人胚肺细胞上其效价为2.24×10~6u/ml,这比在猪肾细胞上测得的效价高十几倍。在兔肾和小鼠细胞上效价分别为3.2×10~3u/ml和1.15×10~3u/ml。上述结果表明猪脾脏可作为生产高效价外源性干扰素的良好细胞来源。     

猪脾细胞干扰素与人白细胞干扰素之间的抗原性关系

我们应用中和试验在不同细胞上对干扰素血清与猪脾细胞干扰素(PSIFN)及人干扰素(HuIFN-α)的中和能力进行了试验,结果证明HuIFN-α多克隆抗体具有明显的中和PSIFN的能力。而人免疫干扰素(Hu IFN-γ)抗体具有微弱的中和猪脾细胞干扰素能力。猪脾细胞干扰素不仅可在同源细胞表现出抗病毒活性,而且可在异源细胞表现出较高的抗病毒活性。应用人白细胞干扰素多克隆抗体亲和层析可有效地分离猪脾细胞干扰素,证实猪脾细胞干扰素与人白细胞干扰素之间具有高度的同源性关系。     

何首乌的组织培养

植物名称:何首乌(Polygonum multiflorum)材料类别:茎尖和带有腋芽的嫩茎段。培养条件:茎尖和去叶茎段用0.1％HgCl_2消毒4～6分钟,无茵水冲4～5次,切成0.5～1.5cm长。茎段要求带有一个腋芽并在腋芽以下留有0.5cm左右的茎段。生芽培养基MS+BA1～2(单位:mg/L;下同)+NAA0.02～0.04。生根培养基MS减半+NAA4。蔗糖3％,琼脂0.6％,温度24±2℃,光照度1000～2000lx,日照8～10小时。     

猪血浆制备研究—正交设计法

按照多因素多水平的正交实验结果,制备猪血浆的最佳条件是猪血与8％柠檬酸三钠溶液体积比19:1,离心时间10分钟,转速1200转/分。用此条件制备的猪血浆与羊血浆进行对比试验,证明猪血浆可以用于肝素钠抗凝血效价测定。     

应用协同凝集技术快速筛选霍乱弧菌粪便标本

<正>对于任何传染病贵在诊断迅速,尤其象霍乱这样传播迅速的疾病。协同凝集这一类快速诊断方法在一些传染病的应用中已肯定是成功的、有效的。 制备10％的葡萄球菌CowanI菌悬液、抗血清致敏。致敏过程:霍乱多价抗血清和小川型(Ogwan)抗血清0.1ml分别加入10％葡萄球菌悬液1ml中,将其混匀,置室温30～45分钟,然后离心;沉淀物中的致敏葡萄球菌在磷酸盐缓冲盐水(含0.1％叠氮钠)中再悬浮,使成2％浓度。试验发现     

猪干扰素基因的克隆和定位

最近,法国农业研究院格里尼翁试验站的病毒学研究人员从猪白细胞干扰素基因中鉴别出一个猪α-干扰素基因,将其转移到大肠杆菌的质粒DNA上,同时对核苷酸顺序进行了测定。研究人员指出,这个顺序的78％和人α-干扰素是一致的。此外,猪α-干扰素是由10多个亲缘基因编码的非常类似的蛋白质群所组成。法国农业研究院细胞遗传学研究人员用放射性同位素标记这个基因,在猪染色体上进行了定位。据报道,这些研究不仅使法国在不久的将来能     

边际多样性方法在中国猪种保护资金分配中的应用

农业动物种质资源面临着严重危机, 有必要构建一个科学、有效的保护方案, 合理分配有限的资金, 以期保护最大的多样性。本文应用边际多样性方法, 以中国18个地方猪种为例, 通过对灭绝概率、现实多样性、边际多样性和保护潜力的分析, 应用3种模型分析了未来群体期望多样性变化趋势, 并提出了相应的资金优化配置方案。在文中所涉及的模型中, 加性模型(Model A)被评定为资金优化配置的最佳模型; 共有10个品种获得保护资金, 其中杭猪获得最高比例(16％)的保护资金; 其次为赣中南花猪(万安猪)、嵊县花猪, 各获得14％; 阳新猪、乐平猪各获得11%; 五指山猪、玉山乌猪、赣中南花猪(冠朝猪)、清平猪、武夷黑猪和嘉兴黑猪分别获得10％、9％、9％、2％、2％和2％的保护资金。结果表明, 分配保护资金需综合考虑群体的受威胁程度、群体遗传多样性和经济重要性等。     

刺玫蔷薇茎尖的组织培养

植物名称:刺玫蔷薇(Rosa davurica Pall)。材料类别:茎尖。培养条件:取带顶芽或侧芽的茎段,在自来水下冲洗20分钟,70％乙醇消毒1分钟,0.2％HgCl_2溶液消毒10分钟,再用无菌水洗5次,在无菌条件下,剥除外围组织,切取茎尖3～4mm。诱导茎尖分化培养基组合如下:(1)MS BA2mg/L(单位下同) NAA0.4;(2)MS BA3 NAA0.4;(3)MS BA3 2,4-D2 NAA0.4:(4)MS KT3 2,4-D2 NAA0.4。生根培养基(5)1/2MS IBA1;     

兔眼越桔幼苗胚轴、子叶诱导再生植株

植物名称:兔眼越桔(Vaccinium ashei)材料类别:无菌苗胚轴、子叶。无菌苗培养:种子用70％酒精浸泡1分钟后,转移到10％的漂白精片过滤液中灭菌15分钟,再用无菌水冲洗三次,接种于0.5％琼脂上,培养温度为25～28℃,光强为2,000lx,每日光照16小时。培养3～4周后幼苗高约2～3cm,子叶绿色。于无菌条件下取子叶、胚轴(5～7mm)作为外植体进行诱导培养。     

透析袋处理

1.把透析袋裁成适当长度(10～20cm); 2.于大量2％NaHCO_3,1mM EDTA溶液中煮沸十分钟; 3.用蒸馏水把透析袋洗净; 4.于蒸馏水中煮沸10分钟(或将透析袋放于充满     

不同型别的基因工程干扰素抗病毒活性的比较

对大肠杆菌生产的不同型别的基因工程干扰素rIFN-α1(α1)、rIFN-αA(αA)、rIFN-β17ser(β17ser)和rIFN-γ(γ),以及自然人白细胞干扰素nIFN-αco,在不同细胞上对不同病毒的抗病毒活性做了比较研究。证明:①α1抗病毒作用的细胞谱较广,尤其在牛肾MDBK细胞和猪肾PK细胞上有很高的活性,分别为在人细胞上的29倍和7倍。β17ser和γ在异种细胞上活性极低,在鼠、猪和牛肾细胞上的活性为人细胞上的1～2％以下。②5种干扰素对麻疹、CoxB1、Sindbis、腺病毒7型和Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒的抗病毒活性无明显差异。但不同病毒对干扰素的敏感性有明显差别,以Sindbis病毒为最敏感,7型腺病毒最不敏感。③5种干扰素对流行性出血热病毒均有明显的抗病毒作用,尤以人α1型和β干扰素作用最强,α1对出血热病毒的抗病毒活性是对滤泡性口膜炎病毒(VSV)的1/2.85,人β干扰素是对VSV的1/4.1。上述结果为人基因工程干扰素的临床应用提供了实验依据。     

桤木根瘤共生固氮研究技术与观测

本文介绍光学显微镜和电子显微镜技术在研究桤木根瘤共生关系中的应用,并报道桤木的培养与有关结瘤的新技术。 寄主植物的培养 欧洲桤木种子经自来水冲洗后,用漂白粉溶液(NaOCl 5.25％v/v)表面消毒10—15分钟,再用无菌蒸馏水洗涤三次,移入S/P种子—包装生长袋(大小为16×18厘米,由高压聚酯薄膜制成),每袋放2—6粒种子,并加20毫升无氮Crone溶液。 无氮Crone溶液的母液制备如下:KCl,75;CaSO_4·2H_2O,50;MgSO_4·7H_2O,     

重组人干扰素α2b阴道泡腾片的研制

目的:制备重组人干扰素α2b阴道泡腾片,并对其质量和局部用药安全性进行研究。方法:将重组人干扰素α2b经制粒干燥,用酸、碱分开制粒法制备重组人干扰素α2b阴道泡腾片,按照《中国药典》对其性状、重量差异、崩解时限、pH、干扰素效价、水份含量、稳定性以及局部刺激性进行了考察。结果:本品处方、工艺合理,制备过程对干扰素生物活性影响较小;制剂质量符合规定,在4℃低温条件下保存具有较好的稳定性;局部刺激试验对家兔阴道组织无明显的刺激性。结论:该制剂质量稳定、可控,具有良好的稳定性和安全性。     

昆虫病毒重组质粒的快速提取

质粒的提取与纯化是基因工程的重要内容。我们用昆虫杆状病毒BsNPV DNA的Bam HI片段与质粒pBR322重组得到重组体pBSa18和pBSb36。用LB摇床培养。 质粒pBR322 DNA用Gonzalls等(1980)的常规法提取。重组质粒的提取是离心40ml培养液收获细胞,加pH7.8 4×TEA缓冲液50ml,GSE(甘油50％,SDS 5％,EDTA0.1M)18ml,70℃保温10分钟,-20℃冷冻过夜,次日在4℃离心12 000r/min15分钟,取上清直接进行制备性琼脂糖凝胶电     

涡虫神经纤维的硫酸铜-硝酸银显示法

整体染色:(1)在10毫升福末林(普通的);45毫升95％乙醇;2毫升冰醋酸組成的混合剂內固定24—48小时。(2)不用洗滌,轉入70％乙醇內3—10天。(3)在蒸餾水內洗滌一小时。(4)在50℃下,在10％硫酸銅(CuSO_4·5H_2O)內浸3小时。(5)不經洗滌,在50℃下,轉入1％硝酸銀內1.0—1.5小时。(6)在蒸餾水內洗3分钟,連續三次,每次一分钟。(7)在40—45℃时水浴內,在下述显影剂內还原,显影剂配法:1％連苯三酚10毫升;56％乙醇(一般为60％)     

95例SARS患者的Th2细胞因子反应及其临床意义

本研究共收集95例罹患严重急性呼吸综合征(SARS)的医护人员的急性期和恢复期血清,用ELISA方法测定血清中白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子β(TNF β)以及转化生长因子β(TGF-β)水平,用流式细胞仪测定急性期患者外周血CD4+和CD8+T细胞比例.结果显示,SARS患者病程初、中期血清IFN-γ无明显改变;IL-2在起病2月内无显著变化,但在病程3～5个月时降低;IL-4在健康对照和患者均未能测出;TNF-β在SARS感染的1周内和病程第2个月内下降.与上述细胞因子形成对比,患者IL-10以及TGF-β均在发病起即持续升高直至整个病程.这些细胞因子的变化均与激素的使用无关(P＞0.05).SARS患者急性期CD4+T细胞和CD8+T细胞急剧减少.可见,SARS相关冠状病毒感染可引起Th2细胞因子反应,可能损害患者的细胞免疫功能而促进体液免疫,IL-10和TGF-β可能在SARS的发病中起作用.