新生大鼠下丘脑GnRH免疫反应性神经元的体外发育

应用神经细胞培养、免疫细胞化学、图像分析等技术,研究了新生大鼠下丘脑促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）神经元的体外发育规律。培养１ｄ即可见ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元;１～３ｄ,ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元生长最快,胞体和突起的平均生长速度分别为４５．５９μｍ２／ｄ和１９．３９μｍ／ｄ,染色加深;培养７ｄ,ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元的胞体截面积、胞体染色强度和突起长度均达最高峰,分别为１７１．２１±４３．１７μｍ２,０．２８９±０．０３４,８７．０１±２２．３３μｍ;培养１４ｄ,ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元的胞体大小和突起长度维持在７ｄ时的水平,但染色减弱。结果提示,培养第１周是ＧｎＲＨ神经元体外发育成熟的关键时期,其发育良好状态可维持到第２周末     

大鼠脑皮质星形胶质细胞的限制性细胞培养

介绍一种新的脑组织星形胶质细胞培养方法即限制性细胞培养（constraint cell culture）。常规分离纯化星形胶质细胞,将其低密度种植,维持在添中低量血清的化学成分限定的培养基中培养,并在长时期内不给予更换或补加培养液。利用波形蛋白(vimentin）和胶质纤维酸性蛋白（glial fibrary acidic protein）抗体的免疫荧光染色法鉴定观察不同培养时期的星形胶质细胞及其形态学变化。结果发现星形胶质细胞在最初的5天之内有一定程度的增殖,未出现过度增殖导致的细胞相互融合现象;接下来的3－5天内细胞形态明显分化,星形胶质细胞突起细长、胞体明显缩小、形态多样,最后细胞突起之间相互连接形成星形胶质细胞网络,并在相当长的时间内保持不变。实验结果显示在限制细胞种植密度和限制给予培养液的培养条件下星形质细胞的体外形态发育与在体的情形基本一致。提示该细胞培养方法可能有助于研究中枢神经系统中星形胶质细胞的生理功能。     

SD大鼠骨髓间充质干细胞体外原代培养及鉴定

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离培养以及扩增的方法并鉴定。方法:取100g左右雄性SD大鼠后肢股骨、胫骨骨髓,原代全骨髓培养法,多次传代纯化,体外扩增后,观察细胞形态,并免疫组化及流式细胞仪检测cd34、cd90、cd105细胞因子,鉴定是否为BMSCs。结果:所获取的细胞呈长梭形,呈现特征性的漩涡状生长,CD34阴性,CD90、CD105阳性。结论:利用全骨髓培养法成功分离骨髓间充质干细胞,10代以内的细胞纯度高,活性好。全骨髓培养较为简便、易行。     

SD大鼠骨髓间充质干细胞体外原代培养及鉴定

目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外分离培养以及扩增的方法并鉴定。方法：取100g左右雄性SD大鼠后肢股骨、胫骨骨髓,原代全骨髓培养法,多次传代纯化,体外扩增后,观察细胞形态,并免疫组化及流式细胞仪检测cd34、cd90、cd105细胞因子,鉴定是否为BMSCs。结果：所获取的细胞呈长梭形,呈现特征性的漩涡状生长,CD34阴性,CD90、CD105阳性。结论：利用全骨髓培养法成功分离骨髓间充质干细胞,10代以内的细胞纯度高,活性好。全骨髓培养较为简便、易行。     

伤害性刺激对大鼠感觉皮质NOS阳性神经元影响的实验研究

研究选用Wistar大鼠18只,分为正常对照组6只,损伤致痛组12只,分别在损伤后30分钟和3小时迅速断头处死。取大脑顶叶,用NOS组织化学法和图像定量分析观察了损伤致痛条件下大鼠感觉皮质NOS阳性神经元的变化。结果显示,损伤致痛后NOS阳性神经元NOS反应产物较对照组增多,图像定量分析结果经统计学处理,实验组与对照组比较有极显性差异（P＜0.001）,实验组30分钟组与3小时组比较有显性差异（P＜0.05）。结果表明NO参与感觉皮质对痛觉信息的中枢调制。     

巨噬细胞条件培养基对小脑皮质神经元生存的影响

用快速自动比色微量分析法检测巨噬细胞条件培养基(MφCM)对体外培养的生后7天SD大鼠小脑皮质神经元的作用。实验结果表明,MφCM具有支持神经元生存及增强其活性的作用。此作用以细胞密度1×10~5/孔,MφCM加入量10μl/孔为显著(P<0.05)。不同分子量的MφCM对神经元的作用亦有不同,>10KD分子量的MφCM比<10KD的作用强。     

缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl—2表达的影响

采用免疫组化方法,观察缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl-2表达的影响。结果显示,缺氧2h时Bcl-2免疫反应阳性神经元的平均光密度较缺氧前明显增强,但缺氧4h和重新恢复供氧后24—72h时,Bcl-2免疫反应阳性神经元的平均光密度又逐渐减弱。缺氧后Bcl-2免疫反应阳性神经元数和阳性率亦随神经元存活数的下降而逐渐减少。本结果提示,缺氧早期Bcl-2免疫染色阳性神经元的免疫反应增强可能是脑细胞在缺氧条件下的自我保护机制,Bcl-2可能对海马神经元缺氧损伤具有一定调控作用。     

中缝核提取液对体外培养的中脑黑质神经元存活和生长的影响

中脑黑质是中缝核５－ＨＴ神经元最早期的靶组织之一。为了分析神经元对其靶细胞的作用是受某种特异性蛋白或神经营养因子的影响,本文用中缝核提取液作用于体外培养的中脑黑质神经元,证明了该提取液能促进中脑黑质神经元的存活和生长,其活性部分是分子量大于３０ｋＤ的组份,经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳,呈现一条主带,分子量在４３ｋＤ左右。     

当归对宫内缺氧新生大鼠大脑皮质神经元与VEGF mRNA表达的影响

目的 探讨宫内缺氧对新生大鼠大脑皮质神经元与VEGF mRNA表达的影响以及当归的调控作用.方法 孕14 d健康SD雌性大鼠15只,随机分为对照组、缺氧组和当归组各5只,于孕14 d开始将当归组与缺氧组孕鼠置于低张氧浓度三气培养箱中,制作胎鼠宫内缺氧模型,此前一小时按8 mL/kg分别给予当归和生理盐水尾静脉注射,对照组不缺氧,余同缺氧组.三组孕鼠分娩当日每窝随机选取新生鼠4只,取脑组织多聚甲醛固定,石蜡包埋切片、NSE mRNA、VEGF mRNA原位杂交,400倍拍照、IPP6.0软件图像分析.结果 缺氧组新生大鼠大脑皮质NSE mRNA阳性细胞数较对照组减少,积分光密度值(IOD)降低(P＜0.05),VEGF mRNA阳性细胞IOD值升高(P＜0.05);当归组新生大鼠大脑皮质NSE mRNA阳性细胞数较缺氧组增多、IOD值增高(P＜0.05),VEGF mRNA阳性细胞IOD值增高(P＜0.05).结论 宫内缺氧可致新生大鼠大脑皮质神经元受损,当归注射液对此损伤有一定保护作用,其机制可能是通过上调大脑皮质VEGF mRNA的表达而使缺氧环境改善.     

体外培养的鸡胚神经元迁移的光镜和扫描电镜的研究

用鸡胚神经细胞为材料,建立神经细胞体外培养技术,相差显微镜观察到鸡胚神经元可以沿着神经胶质细胞纤维运动。扫描电子显微镜揭示体外培养神经元与胶质细胞的关系。     

新生BALB/c小鼠大脑皮质神经元细胞培养方法的建立

目的:经改良和优化,建立高纯度BALB/c小鼠大脑皮质神经元培养的方法.方法:采用L-多聚赖氨酸包被细胞培养板,取新生BALB/c小鼠(出生24 h内)大脑皮质组织,经0.25%胰酶消化后吹打成单个细胞,按1×106/孔接种于35 mm的六孔板中,用神经元细胞培养种植液培养6 h后换神经元细胞培养饲养液,培养40 h时...     

大鼠脑微血管内皮细胞的分离与原代培养

为了建立大鼠脑微血管内皮细胞体外培养模型,探索纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法并进行形态学观察。采用2～3周龄的SD大鼠,解剖得到大脑皮质,两次酶消化及牛血清白蛋白或葡聚糖和Percoll梯度离心获得较纯的脑微血管段后,接种于涂布基质的培养皿进行原代培养;培养的细胞采用相差显微镜形态学观察、透射电镜观察及Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测鉴定。结果发现,培养12h即可见细胞从贴壁的脑微血管段周围长出,细胞呈短梭形,区域性单层生长,5～7天内皮细胞融合,内皮细胞纯度达90％以上;内皮细胞的贴壁和生长有赖于所涂布的基质,纤连蛋白／Ⅳ型胶原优于鼠尾胶和明胶;Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测内皮细胞表达阳性,透射电镜观察可见相邻内皮细胞间存在紧密连接结构。提示该方法能成功进行纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养,可用于脑微血管内皮的生理、生化及药理学研究,亦可用于构建大鼠血脑屏障模型。     

成年SD大鼠心肌原代成纤维细胞分离及培养的优化方案

目的:摸索及优选成年SD大鼠心肌原代成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定的实验方法。方法:将成年SD大鼠心脏剪成小组织块,采用以下四种方案(A:0.08%胰酶+0.1%胶原酶II消化15 min,B:0.2%胶原酶II消化15 min,C:0.2%胶原酶II消化60min,D:0.2%胶原酶II消化90 min)提取成年大鼠心脏原代成纤维细胞,再通过差速贴壁分离方法培养原代成纤维细胞。采用倒置显微镜观察成纤维细胞的基本形态特征,并进行Vimentiin免疫荧光染色对培养的原代细胞进行荧光鉴定;采用台盼兰染色对培养的原代成纤维细胞存活率进行鉴定;采用细胞计数对培养的成纤维细胞生长趋势进行鉴定。结果:四种方法均能培养成纤维细胞,但单酶消化60 min可一次性提取较多细胞,并且细胞状态佳,3 d即可传代。72 h成纤维细胞Vimentin免疫荧光染色阳性率高达97%。台盼兰染色可见其细胞死亡率明显降低,并且细胞计数可见细胞生长状态极佳。结论:单酶消化60 min是提取成年SD大鼠心肌原代成纤维细胞的高效、快速、稳定的实验方法,为心脏疾病的基础及临床研究提供了较为理想的细胞学实验模型。     

Localization of Microtubule-Associated Protein (MAP) 1B in the Postsynaptic Densities of the Rat Cerebral Cortex

1. Although microtubule-associated protein (MAP) 1B and its phosphorylation have been suggested to be important for synapse formation among cortical neurons, the localization of MAP1B in synapses has not yet been confirmed. In this report, we examine the localization of MAP1B in synaptic regions. 2. The localization of MAP1B was observed by immunohistochemical and electron microscopic techniques using specific antibodies against MAP1B. 3. MAP1B immunoreactivities were widely distributed in the cerebral cortex and were observed in the postsynaptic area but not in presynaptic terminals. 4. These synapses were classified as the asymmetrical type. 5. Only some synapses exhibited MAP1B immunoreactivities. MAP1B-immunopositive synapses accounted for about half of the total synapses. 6. Such a localization suggests MAP1B's important roles in synaptic functions.     

SD大鼠皮肤组织病理学观察

目的观察不同日龄SD大鼠皮肤组织学结构。方法10％甲醛固定,行石蜡切片,HE染色。结果新生大鼠皮肤较薄,透明层缺乏,皮脂腺发育良好。6月龄时表皮、真皮和皮下组织明显增厚,毛囊增粗,生长旺盛,毛囊深入皮下脂肪层。24月龄时,大鼠皮脂腺及汗腺萎缩,表皮变薄,真皮成纤维细胞、血管数量减少,弹力纤维变细。结论不同日龄SD大鼠皮肤组织学结构有差异。     

乳鼠坐骨神经植块法的雪旺氏细胞培养

目的:改善并建立一种新的大鼠雪旺氏细胞(SCs)的培养方法,为研究外周神经损伤修复模型及其它外周神经相关实验提供高纯度、多数量的SCs。方法:麻醉后显微镜下解剖并分离新生3天内SD大鼠的坐骨神经,采取植块培养的方法,显微镜下尽量剥除坐骨神经纤维外膜,并梳理松解坐骨神经的神经纤维束。梳理后剪碎坐骨神经,每小块种植于培养皿中,使用纯血清培养4小时,再加入正常的DMEM/F12培养基,消化培养2-3代。最后用S-100及GFAP免疫荧光染色进行纯度鉴定。结果:本实验在总结前人实验的基础上,联合创新采用坐骨神经外膜剥除、神经内膜梳理、纯血清培养以及胰酶差速消化等方法,短时间内获得SCs的纯度可达99%以上,可用于进一步对雪旺氏细胞的功能进行研究。结论:这种选用乳鼠坐骨神经植块、血清培养的方法简单易操作,无需额外的生长因子及抑制因子,可在短期内获得大量高纯度的SCs。     

Low [3H]Cytochalasin B Binding in the Cerebral Cortex of Newborn Rat

The concentrations of glucose transporter in the cerebral cortex and brainstem of neonatal (4–7 days old) and adult rats were measured using [³H]cytochalasin B binding. There was significantly lower binding in neonatal cortex (1.9 ± 0.7 pmol/mg protein) compared to adult (8.9 ± 2.5 pmol/mg protein). Scatchard analysis indicates this difference is due to a lower B_max (neonate, 9.7 pmol/mg protein; adult, 18.6 ± 1.3 pmol/mg protein). Measurement of [³H]cytochalasin B binding in microvessels prepared from cortex of adult (28.1 ± 3.5 pmol/mg protein) and neonate (12.8 ± 1.9 pmol/mg protein) indicates a lower binding in the microvasculature of neonates, whereas no such difference was seen in the binding in microvessels prepared from adult and neonatal brainstem (adult, 11.8 ± 2.3 pmol/mg protein; neonate, 9.4 ± 2.7 pmol/mg protein). In both adult and neonate brain, there is an enrichment of glucose transporters in the microvasculature.     

SD大鼠无菌性腹膜炎的形态学改变

目的-了解以40%酒精为溶媒经腹腔连续注射SD大鼠后所发生的无菌性腹膜炎的组织病理学改变。方法-SD大鼠脏器分离后固定于11%福尔马林内,常规脱水、透明、石蜡包埋,制片,HE染色,光学显微镜观察。结果-对照组大鼠未发生腹膜炎,溶媒组和给药组大鼠可见较严重的腹膜炎,其主要病理改变发生在肝、脾、胰、胃肠道、子宫、膀胱等脏器的脏层腹膜。肝、脾、胰被膜增厚、机化。胃肠道、子宫浆膜增厚、机化。膀胱外膜增厚、机化。上述损害停药4周也未见恢复。结论-高浓度酒精为主要成分的溶媒经腹腔连续给药可致无菌性腹膜炎。     

视皮层神经元活动的振荡和同步振荡现象

视皮层神经元电活动的振荡和同步振荡现象是神经生理学实验的最新发现之一.这一研究成果在认知科学界引起广泛关注.学术界对它在认知心理学上的解释、作用及意义有不同的评论.     

Influence of Seizures on Lipids of Homogenate and Neuronal and Glial Nuclei of Rat Neocortex

Lipid composition of homogenate and neuronal and glial nuclei of the brain cortex of Wistar rats was studied under normal conditions and after seizures induced by injection of picrotoxin. Seizures increased contents of lysophosphatidylcholine, sphingomyelin, and total phospholipids in the homogenate. In neuronal nuclei contents of total phospholipids, sphingomyelin, phosphatidylcholine, and phosphatidylserine decreased, and contents of free fatty acids and lysophosphatidylcholine increased. In glial nuclei content of total phospholipids decreased and content of free fatty acids increased. The role of changes in the lipid composition of the neocortex cells during seizures and the involvement of lipid messengers in signal mechanisms are discussed.