直接从人工老化的菜心干种子中提取基因组DNA用于RAPD分析

利用40℃、100％朋对菜心种子进行人工加速老化处理获得了不同活力的种子批,利用平衡酚-氯仿法直接从人工老化的菜心干种子中提取基因组DNA,并对提取的基因组DNA进行了趾PD扩增。结果表明,所提取的基因组DNA量多,而且比较整齐一致。引物S208扩增所获得的基因组DNA指纹图谱上的DNA带清晰、明亮,从而表明利用本方法从人工老化菜心干种子中直接提取的基因组DNA完全可以用于RAPD分析。     

杜鹃属基因组DNA提取及RAPD的检定

以杜鹃花属常绿杜鹃亚属井冈山杜鹃树叶为材料,分别采用修改的CTAB法、碱裂解法、SDS法提取基因组DNA。实验表明,三种方法所提的DNA纯度及产率有差别,从综合结果看,以CTAB法最好,其所提到的DNA大小与λDNA（21kb）相似,经检验该法适合杜鹃花属植物总基因组DNA的提取,所得DNA不需纯化就可直接用于RAPD分析。     

石斛干品基因组DNA的提取与RAPD分析

市场中药干品的药性差异一直是影响中药标准化的瓶颈,而检测技术相对落后是导致这一现象的主要原因。DNA分子水平检测的困难是药材干品的基因组DNA难以提取。本文以铁皮石斛(Dendrobium candidum)干茎为材料,采用了四种方法从干品石斛中提取基因组DNA。结果表明,采用改良的CTAB法可从石斛干品尤其是干茎皮中提取质量较高的基因组DNA,其分子量大于23kb,以此DNA为模板进行不同引物的PCR扩增可获得清晰的RAPD条带。该研究初步建立了石斛干品合适的RAPD技术体系。     

膜翅目昆虫干标本的基因组DNA提取

提出了膜翅目昆虫干标本基因组DNA的提取方法,通过对实验结果和所测得的基因片段（28S D2 rDNA)的分析,表明该方法可行。     

木根麦冬（Ophiopogon xylorrhizus）干叶提取DNA用于RAPD分析

木根麦冬（Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎｘｙｌｏｒｒｈｉｚｕｓ）是我国珍稀濒危植物,分布仅限于云南西双版纳雨林,在植物系统学和保护生物学研究中具有独特的意义。随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）方法是揭示群体遗传多样性的高效、简便方法,但一般均以新鲜材料提取总ＤＮＡ,对一些分布边远地区物种难以采用此法。本文研究从木根麦冬干叶片中提取总ＤＮＡ,进行ＲＡＰＤ分析。样品取自４个居群、４９个个体。选取生长旺盛的叶片,在野外用硅胶快速干燥保存样品。采用高盐低ｐＨ值法提取总ＤＮＡ,每克鲜重所得的干叶可得８０～１６０μｇ。通过对模板ＤＮＡ的各种处理和ＰＣＲ扩增程序的调整,解决了扩增片段边缘弥散、界线模糊、产率低等问题,获得了理想的扩增带型。这一成果对其它从野外直接采样的干叶提取ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ研究具有指导意义     

RAPD法对罗曼蛋鸡基因组DNA多态性分析初报

利用RAPD（随机扩增多态DNA）方法,选用37种10bp的随机引物,对罗曼蛋鸡基因组DNA进行多态性分析,发现其中两种引物（OPS－08,OPY－06）在三代7个品系中都能扩增出多条带并且反映其基因组DNA的多态性,可用于检测出不同品系间的差异,并且这两种引物的碱基序列有80％是对应互补的。     

几种提取枣和酸枣DNA用于RAPD分析的方法比较

利用不同的方法提取枣和酸枣的总DNA,并分析了不同样品状况、抗氧化剂和纯化过程等对所提DNA质量及其RAPD扩增效果的影响。实验显示：用改良CTAB法优于SDS法,可有效去除多糖。加入的抗氧化剂PVP、抗坏血酸、β-巯基乙醇等可有效阻止多酚类物质褐化,但不同抗氧化剂间效果差别不大。分别将样品干燥处理、固定处理、液氮处理、冷藏,与新鲜材料相比,用液氮处理并保存于-80℃的材料与新鲜材料所提DNA相当,而用其他方法DNA都有不同程度降解。不同材料提取结果比较显示：幼叶所提DNA产量和质量优于老叶,并且不需要较多的纯化过程。在有RNA和少量蛋白质时,对扩增结果影响不大。     

利用RAPD法对虹鳟鱼基因组DNA多态性研究初报

本文通过利用RAPD（随机扩增多态DNA）方法,选用20种10bp的随机引物（OPC－01－OPC—20）,用于虹鳟鱼基因组DNA多态性分析,其中发现一种引物（OPC－02）在虹鳟鱼群体中能扩增出多条带,说明该引物能反映其基因组DNA的多态性,可用于检测出不同品系间的差异。     

一步法提取植物DNA用于大规模RAPD分析

ＲＡＰＤ技术已广泛地用于植物的系统演化、种群多样性、群体遗传学及杂种种子纯度的鉴定等工作中〔１～３〕。本文基于快速节省的原则对碱液法提取植物ＤＮＡ进行一些改进。１材料与方法ＤＮＡ提取方法取１０～２０ｍｇ幼叶 ,加１００μｌ０ ５ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ（或附加０ ５ %～１ ５ %巯基乙醇）研磨后 ,取４０μｌ研磨液加入２００μｌ１００ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ ＨＣｌｐＨ７ ６缓冲液（或附加０ ５%不溶性聚乙烯吡咯烷酮 ,ＰＶＰ）中 ,８０００×ｇ离心５ｍｉｎ,上清液即可用于ＰＣＲ反应。ＰＣＲ反应体系含１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉ…     

大花蕙兰基因组DNA提取及RAPD反应条件探索

用SDS、CTAB和改良CTAB法分别提取大花蕙兰叶片基因组DNA,发现以改良CTAB法提取的DNA纯度高,产率也较高。以5’-GGTGCTCCGT-3(’BA440)为随机引物,并以大花蕙兰品‘种金杯(’Cymbidiumhybridiumcv.HiroshimaGoldenCu“pSunnyMoon”)的DNA为模板,对RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA)反应体系进行了优化研究,结果表明,25μl反应体系中,Mg2 、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA和dNTP5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:2.0mmol/L、1.0U、0.20μmol/L、25ng和0.20mmol/L。扩增程序优化为:94℃预变性4min;94℃变性0.5min,37℃退火1min,72℃延伸1min,40个循环;最后72℃延伸7min。     

洋葱细胞质雄性不育系70及其保持系71基因组DNA的RAPD分析

采用RAPD技术,对洋葱细胞质雄性不育系70及其保持系71的基因组DNA的多态性进行分析。结果表明,在被检测的100条随机引物中,46条引物具有扩增产物,5条引物扩增出多态性条带。对这5条引物进行重复筛选和单株验证,只有G02扩增出的多态性片段,且表现稳定。推测该标记与育性有关。     

栗属植物基因组DNA的提取及RAPD、SSR分析

以中国板栗、茅栗和锥栗的叶片为材料,提取栗属的DNA。针对栗属植物富含多酚类等次生物质的特点对栗属DNA的提取方法进行了改良,采用CTAB-蛋白酶K法加重复抽提,去除栗属植物中的相关次生物质,获得了高质量的DNA。所提取的DNA完全满足PCR、RAPD、SSR等一些分子生物学实验要求。     

两个地区东方田鼠基因组RAPD分析比较研究

目的　从DNA的水平分析比较两个地区东方田鼠的分子遗传特征,探讨以RAPD标记鉴别两个地区的东方田鼠。方法　筛选6条10bp的随机引物对洞庭湖和青铜峡地区的东方田鼠基因组进行了随机扩增多态DNA(RAPD)分析,并对这两个地区的东方田鼠的基因组DNA进行了比较。结果　①两个地区东方田鼠的所有受试个体中共有的片段数为20条,这是两个地区东方田鼠的共性所在;②两个地区东方田鼠各有其特异性扩增片段;③引物S17和S80可作为鉴别两个地区东方田鼠的特异性引物;④不同地区的东方田鼠其不同个体之间的共享度较低,且存在较大差异;两个地区东方田鼠的遗传背景均呈非均一性。结论　运用RAPD方法可以作为鉴别不同地区东方田鼠的基因多态性的标记。     

大白菜杂交种'冠春'杂交率的RAPD分析

从春大白菜品种‘冠春’及其亲本中提取基因组DNA,用320个随机引物进行RAPD扩增,从中筛选出5 个可将亲本和子代区分的引物S4、S47、S73、S134和S194。S4产生父本特征带S4-370;S47和S134产生母本特征带S47-700 和S134-1200;S73和S494产生亲本互补的特征带S73-660、S73-730和S494-400、S494-1770,上述谱带均在子代中出现。以这5个引物产生的特征谱带建立杂交种‘冠春’及其亲本的RAPD特异指纹。通过对134个‘冠春’的种子进行纯度鉴定,结果表明2个父本和4个母本与大田检测结果完全一致。进一步验证了4种鉴定大白菜杂交种方法的可行性。     

两个不同地区东方田鼠杂交子代RAPD标记分析

目的研究不同地区东方田鼠杂交后产下的子代的遗传特性.方法筛选4条10bp随机引物对宁夏和洞庭湖地区东方田鼠杂交子代的基因组进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析,并对不同地区亲代以及子代相互之间的基因组DNA进行相似性分析.结果①所有东方田鼠均有相同的扩增片段出现;②两个不同地区的亲代分别有特异性片般;③亲代的DNA带型均能在子代中找到;④同一胎次东方田鼠之间基因共享度大约在72%～96%之间.结论RAPD分析能在一定程度上反映出东方田鼠种的特性以及亚种的特异性,而且同一胎次之间基因共享度较高.     

银杏DNA提取及RAPD分析

采用SDS裂解液和苯酚/氯仿/异戊醇提取液从银杏叶中提取银杏总DNA,并进行DNA样品分光光度测定和琼脂糖凝胶电泳分析。通过引物筛选和反应参数优化,选用3个随机引物对DNA样品进行RAPD扩增,获得较为清晰并有一定多态性差异的扩增谱带,初步摸索出适合于以银杏叶为材料的DNA提取方法和RAPD扩增程序,为研究银杏遗传多态性及种质资源研究提供一种实用的分析方法。