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马铃薯卷叶病毒的提纯 总被引:5,自引:0,他引:5
本文提出了一个应用液氮冷冻,一步提取,蔗糖垫层差速离心,Sephadex G-200柱层析以及蔗糖密度梯度离心法纯化马铃薯卷叶病毒的程序,改进后的马铃薯卷叶病毒提纯方法,使病毒产量达到1.18mg/kg酸浆组织,病毒提取物纯度比差速离心者更高,20%蔗糖垫层差速离心能够更加有效地去除宿主细胞成份,纯化病毒的OD260/280,260/240比值分别达到1.77和1.43。 相似文献
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采用杂交瘤技术,以马铃薯卷叶病毒(Potato Leafroll Virns,PLRV)为抗原,用直接将病毒注入脾脏和随后尾静脉注射的方法,免疫BALB/C小鼠。将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合。用Dot-ELISA和间接血凝试验筛选分泌抗马铃薯卷叶病毒抗体的阳性克隆,建立了分泌抗PLRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用微量玻片双扩散法测定单克隆抗体亚类为IgG_1和IgG2a,轻链为λ。注射杂交瘤细胞株A_1、A_3、C_3和D_3于小鼠腹腔,制备出含高效价单克隆抗体的腹水。用获得的四种单克隆抗体对马铃薯卷叶病毒15个分离物进行了鉴定。 相似文献
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经人工接种分离纯化的水仙花叶病毒(NMV),以表现局斑的苋色藜叶片提纯材料,经聚乙二醇(PEG6000)沉淀、差速离心和蔗糖密度离心提纯后,进行6次家兔免疫注射制备抗血清。结果表明注射后3周左右效价最高,经毛细管沉淀方法测定了可达1:5,000。用琼脂扩散方法将此NMV抗血清与来自荷兰的NMV抗血清进行比较,结果发现二者的抗体性相同。应用此法制成的NMV抗血清,以琼脂双扩散、ELISA方法分别对30份水仙组培脱毒试管苗样本进行带毒率检测。结果表明所测得的平均带毒率分别为33.3×和80.0%,并用IEM测定方法验证了ELISA结果的可靠性和准确性。 相似文献
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经人工接种分离纯化的水仙花叶病毒(NMV),以表现局斑的苋色藜叶片为提纯材料,经聚乙二醇(PEG600)沉淀、差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯后,进行6次家兔免疫注射制备抗血清。结果表明注射后3周左右效价最高,经毛细管沉淀方法测定可达1:5,000。用琼脂双扩散方法将此NMV抗血清与来自荷兰的NMV抗血清进行比较,结果发现二者的抗体性相同。应用此法制成的NMV抗血清,以琼脂双扩散、ELISA方法分别对30份水仙组培脱毒试管苗样本进行带毒率检测。结果表明所测得的平均带毒率分别为33.3%和80.0%,并用IEM测定方法验证了ELISA结果的可靠性和准确性。 相似文献
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温州蜜柑萎缩病毒提纯与抗血清制作及其应用 总被引:3,自引:0,他引:3
采用洋酸浆(Physalisforidana)繁殖温州蜜柑萎缩病毒(SDV),改进提纯方法,经5%-25%,酒石酸钾密度梯度离心获得的提纯制剂,在220-300nm下呈单一吸收峰曲线,峰在259nm,谷在237nm,OD259/OD237=1.60,OD259/OD280=1.73,病毒得率约为13mg/kg病叶,电镜观察各视野布满了直径约26nm的球状病毒颗粒,病毒粒子外壳蛋白有两个组分,分子量 相似文献
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马铃薯卷叶病毒(PLRV)基因组研究进展 总被引:6,自引:0,他引:6
张鹤龄 《Virologica Sinica》1996,11(1):1-8
马铃薯卷叶病毒(PLRV)基因组研究进展张鹤龄(内蒙古大学生物系,呼和浩特010021)关键词马铃薯卷叶病毒,基因组TheAdvancesinPLRVGenomeResearchZhangHeling(InnerMongoliaUniversity,... 相似文献
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马铃薯卷叶病毒复制酶基因5端克隆及序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
马铃薯卷叶病毒(Potatoleafrolvirus,PLRV)是正链RNA病毒,属黄化病毒组(Luteovirus)〔1〕,严格虫传,分布广泛,难以控制,侵染马铃薯能引起大面积减产,给马铃薯生产造成巨大损失。PLRV基因组全长6.0kb,有6个读... 相似文献
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应用常规免疫双扩散不能鉴定马铃薯植株中的卷叶病毒(PLRV)。我们用微量玻片凝胶双扩散技术对马铃薯植株汁液中的PLRV进行了鉴定。试验说明,用这种方法可测出马铃薯茎的汁液最高稀释度为1:4,微量玻片凝胶双扩散与普通免疫双扩散灵敏度的比较试验表明,两者可测出提纯PLRV的最低浓度分别为1μg/ml和6μg/ml,但后者不能测出植物汁液中的PLRV。微量玻片凝胶双扩散是目前能够用于检测感病植物汁液中PLRV的最简便易行和可靠的血清学方法。 相似文献
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应用酶联免疫吸附试验检测马铃薯卷叶病毒 总被引:2,自引:0,他引:2
以辣根过氧化物酶标记马铃薯卷叶病毒抗体,采用双抗体夹心ELISA方法鉴定了马铃薯和洋酸浆的茎、叶、根及马铃薯块茎中的马铃薯卷叶病毒(Potato Leafroll Virus,PLRV),结果表明,对提纯的PLRV可测出的最低浓度为25ng/ml,当包被抗体浓度为40μg/ml、酶标记抗体稀释度为1/120时,可测出马铃薯茎、叶和根汁液中的PLRV,感染PLRV的洋酸浆茎、叶和根汁液的消光值,均比无病对照者高二倍以上,虽然感染PLRV的马铃薯休眠块茎维管束组织汁液的消光值高于无病毒对照,且脐部维管束组织消光值高于顶端,但测定打破休眠的感病块茎顶端维管束组织的阳性结果更为可靠和明显。 相似文献
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马铃薯卷叶病毒外壳蛋白基因的合成,分子克隆和全序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
施一Shen 《Virologica Sinica》1992,7(4):432-435
以分离自马铃薯主栽品种“紫花白”的马铃薯卷叶病毒(PLRV)分离物的RNA为模板,用人工合成的引物,用反转录和随后PCR扩增的方法合成了PLRV外壳蛋白(CP)基因的cDNA,并克隆于pUC19中。进一步用限制酶切和核苷酸序列分析表明,合成的cDNA由627个核苷酸组成(包括起始和终止密码),序列中有Hinc Ⅱ和BamH Ⅰ两个酶切位点,与国外报道一致。和国外的4个PLRV分离物CP基因序列对比结果,具有高度同源性,其同源率达99.0—99.7%。 相似文献
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将本室合成、克隆的马铃薯卷叶病毒(PotatoLeafrolVirus,PLRV)中国分离株的基因间隔区(intergenicsequence,IS)双链cDNA以正、反向两种方式分别构建于转化载体pROK2中,通过致瘤农杆菌介导,以马铃薯叶圆片为转化材料,转化马铃薯栽培品种Desire,获得了转基因植株。卡那霉素抗性分析和PCR检测目的基因,证明PLRVIS双链cDNA已经整合到转基因马铃薯的染色体基因组中。将转基因植株移栽网棚用蚜虫接种PLRV,观察症状并用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测转基因植株中PLRV含量。结果表明,表达PLRVIS正意和反意RNA的转基因植株,接种病毒后表现无症状或症状轻微,PLRV平均滴度均较未转基因对照植株低。表达正意RNA的转基因植株PLRV滴度降低43%~72%,表达反意RNA的转基因植株PLRV滴度降低72%~86%,由此可见,表达PLRVIS反意RNA的转基因马铃薯对PLRV抗性较强。 相似文献
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马铃薯卷叶病毒基因间隔区转化的马铃薯抗病性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
将本室合成、克隆的马铃薯卷叶病毒(Potato Leafroll Virus, PLRV)中国分离株的基因间隔区(intergenic sequence, IS)双链cDNA以正、反向两种方式分别构建于转化载体pROK2中,通过致瘤农杆菌介导,以马铃薯叶圆片为转化材料,转化马铃薯栽培品种Desiree,获得了转基因植株.卡那霉素抗性分析和PCR检测目的基因,证明PLRV IS双链cDNA已经整合到转基因马铃薯的染色体基因组中.将转基因植株移栽网棚用蚜虫接种PLRV,观察症状并用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测转基因植株中PLRV含量.结果表明,表达PLRV IS正意和反意RNA的转基因植株,接种病毒后表现无症状或症状轻微,PLRV平均滴度均较未转基因对照植株低.表达正意RNA的转基因植株PLRV滴度降低43%~72%,表达反意RNA的转基因植株PLRV滴度降低72%~86%,由此可见,表达PLRV IS反意RNA的转基因马铃薯对PLRV抗性较强. 相似文献
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用设计合成的两对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株PLRV-Ch RNA为模板,经反转录PCR扩增,将复制酶基因3'端0.6kb和5'端1.2kb,克隆于pUC19中,分别构建了重组质粒pLR3和pLR5,并分五段进行了序列分析。将获得的核苷酸序列氨基酸序列与国外报导的四个PLRV分离株的相应区段的序列同源性进行了比较。结果表明具有高度同源性。文中对核苷酸序列中存在的问题移码序列和其下游的茎环 相似文献
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高效价甘薯羽状斑驳病毒抗血清的制备 总被引:6,自引:0,他引:6
用嫁接方法将甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)接种到I.setosa上扩繁,以0.2mol/LpH7.2PBK缓冲液、垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提取纯化SPFMV。纯化的SPFMVOD260/280的比值为1.25。将纯化的SPFMV免疫家兔制备抗血清,在环状沉淀和微量沉淀试验中,用提纯病毒测定抗血清的效价均为1:4096;以SPFMV-IgG为第一抗体,应用Dot-ELISA对甘薯和I.selosa叶片中的SPFMV分别作了测定。 相似文献
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特异切割马铃薯卷叶病毒复制酶基因负链的核酶研究 总被引:6,自引:0,他引:6
根据锤头状核酶的作用模式,设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯地病毒中国分离株(PLRV-Ch)复制酶基因负链RNA的核酶序列,以体外转录的PLRV-Ch复制酶基因负链RNA作为底物,与转录的核酶RNA共同保温,以检测核酶对底和的体外切割作用。实验结果表明,核酸疼 RNA对PLRV-Ch复制酶基因负锭RNA具有特异切割作用。 相似文献
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用^32P标记cDNA探针进行核酸斑点杂交检测马铃薯卷叶病毒(PLRV) 总被引:2,自引:0,他引:2
利用克隆的马铃薯卷叶病毒(PLRV)外壳蛋白(CP)基因cDNA,用切口平移法制成^32P标记探针,通过核酸斑点杂交,对马铃薯卷叶病毒RNA,提纯的马铃薯卷法病毒和感染PLRV的马铃薯茎、叶、声 相似文献