濒危植物七子花内生真菌的分离鉴定及抗菌活性筛选

首先从濒危植物七子花中分离到38株内生真菌,综合运用形态特征和分子生物学技术,明确其分类地位。38株植物内生真菌分属于6个属和1个无孢子群,其中交链孢属和刺盘孢属为优势菌群,葡萄座腔菌属、镰刀菌属、赤霉菌属、拟茎点霉属和无孢子群为常见属。以大肠埃希菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌为靶标菌对获得菌株发酵液粗提物进行抑菌试验,发现95%以上的菌株对试测细菌具有一定的抗菌活性,表明七子花内生真菌的抗菌活性十分普遍;其中QZHⅡ10对大肠埃希菌具有较好的抑菌活性,抑菌圈直径为12.0 mm;而QZHⅡ07则对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强,抑菌圈达到15.5 mm。这表明七子花内生真菌具有开发为微生物源杀菌剂的价值。     

墨西哥仙人掌植物内生真菌的研究Ⅰ.内生真菌分离及其抗菌活性筛选

从一种墨西哥仙人掌[Opuntiamicrodasys(Lehm .)Pfeiff]的肉质茎中分离获得31株内生真菌,经形态观察分类鉴定为3个目、3个科、14个属。同时选择2 2种病原微生物作为指示菌进行抑菌试验,研究其抗菌活性。结果表明:3株仙人掌内生真菌分别对细菌、植物病原真菌和皮肤致病真菌多种病原微生物有较为明显的抑制生长作用。     

木本曼陀罗内生真菌抗菌活性的筛选研究

从木本曼陀罗植物内生真菌中筛选高效抗菌活性的菌株。选择与人类和植物相关的36株病原微生物,分别对分离自木本曼陀罗(Datura arborea L.)植物的内生真菌77株进行了发酵代谢产物的抗菌活性筛选研究。结果显示:对细菌病原菌、皮肤致病真菌、植物致病真菌有抑制作用的内生真菌分别有24,9,17株,其中5株内生真菌对10种以上的供试病原菌有明显的抑制作用,活性最好的1株对20种病原菌有较强抑制活性,最大抑菌圈直径达48mm。这说明木本曼陀罗植物内生真菌抗菌能力较强,抗菌谱较广。     

白苞蒿内生真菌的分离及其抗肿瘤抗菌活性筛选

重视药用植物内生真菌的研究,实现利用内生真菌代替药用植物生产活性物质,具有重要的生态学和经济学意义。白苞蒿(Artemisia lactifloraWall.ex DC.)是一种重要的药用植物,已收载于《中国药典》2010年版一部附录,是中药刘寄奴的基原植物之一,具有清热、解毒、止咳、消炎、活血、散瘀、通经等功效,用于肝、肾疾病的治疗。该研究以白苞蒿的根、茎、叶和花为试验材料进行内生真菌的分离,共分离得到白苞蒿内生真菌54株;以人骨髓白血病细胞系(HL-60)、人乳腺癌细胞系(MCF-7)和人前列腺癌细胞系(PC-3)为细胞模型,采用MTT法对54株白苞蒿内生真菌发酵物粗提物的体外抗肿瘤活性进行筛选,发现对3种肿瘤细胞增殖的抑制率在90%以上的菌株共有5株,占总菌株数的9.3%;以白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌3种病原细菌为靶标菌,采用滤纸片法对54株白苞蒿内生真菌发酵物粗提物的抗菌活性进行筛选。结果表明:所有菌株对白色念珠菌均未表现明显的抑菌活性,而对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌有一定抑菌活性的菌株共有17株,占总菌株数的31.5%,其中有2株对金黄色葡萄球菌表现较强的抑菌活性。     

元江印楝植物内生真菌及其抗菌活性筛选的研究

通过抗菌活性初步筛选,从采自云南元江县的印楝(Azadirachta indica A.Juss)植物茎和果实中已分离到的372株内生真菌中筛选出80株作为复筛菌株,经显微形态特征观察鉴定为5目、6科、29个属。选择16种病原微生物作为指示菌检测复筛菌株发酵产物的抗菌活性,结果表明,其中29株内生真菌对细菌、植物病原真菌和皮肤致病真菌中的一种或多种病原微生物有抑制生长作用,活性菌株比例占复筛菌株的36.25%,并显示种群多样性,其中7株内生真菌显示较强的广谱抗菌作用,活性较好的菌株主要分布在曲霉属和交链孢属。     

黔西南薏苡内生真菌多样性及其抗菌活性研究

为进一步了解贵州黔西南薏苡(Coix lacryma-Jobi)可培养内生真菌的多样性组成及其抗菌活性。通过组织块分离法,选取薏苡根、叶和种仁为分离对象,进行内生真菌分离,并通过形态学观察,分子生物学特征对所分离内生真菌进行鉴定。采用平板菌块对峙法对薏苡内生真菌进行抗菌活性筛选。从薏苡根、叶和种仁中共分离纯化获得76株薏苡内生真菌,根据形态和分子生物学特征,它们属于10个目、14个科、26个属和1个不明属以及未知菌;以大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为指示菌株,对薏苡内生真菌进行抗菌活性筛选。其中有25株对大肠杆菌具有抗菌活性,占分离菌株的比例为32. 9%;有34株对金黄色葡萄球菌具有抗菌活性,其比例为44. 7%;有24株对枯草芽胞杆菌具有抗菌活性,比例是31. 6%;有23株对酿酒酵母具有抗菌活性,占比例为30. 3%;对4种标准菌株都有抗菌活性的有13株,占总株数的17. 1%。薏苡的不同组织结构中存在丰富的内生真菌资源,部分内生真菌具有抑制其他微生物生长的活性,具有产生天然活性产物成分的潜力,为工业应用奠定了资源基础,具有进一步发掘和研究的价值。     

内生真菌天然活性产物的研究进展

药用植物内生真菌能够产生许多结构新颖的活性次级代谢产物,已成为发现新天然活性物质的重要源泉。结合作者的工作,文中通过对内生真菌天然产物的分类,对这一领域的研究进展进行综述。     

海南粗榧内生真菌抗肿瘤抗菌活性的筛选

对72株海南粗榧(Cephalotaxus hainanensis Li)内生真菌进行了抗肿瘤和抗菌活性筛选。结果显示, 有9株内生真菌至少对一种指示瘤株具有细胞毒活性, 5株内生真菌对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌活性, 1株内生真菌对辣椒疫霉有抑制作用。这表明海南粗榧内生真菌是寻找有价值的生物活性成分的潜在资源, 其生物活性成分值得进一步研究。     

虎杖内生真菌的分离及产抗菌活性物质的筛选

从植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)的根状茎中分离出24株内生真菌,分别对其液体发酵液进行抗菌活性检测,结果筛选出3株内生真菌具有抗菌活性,它们分别属于曲霉属、青霉属和无孢菌类。     

云南重楼植物内生真菌的分离及抗菌活性筛选

从云南重楼[Paris polyphylla Smithvar.yunnnanensis(Franch.)Hand.Mazz.]块状茎中分离出166株内生真菌,对其进行形态分类鉴定归于4目,6科,20个属,体现了云南重楼植物内生真菌的生物多样性特征。同时,选择与人类和植物相关的37株病原微生物作为抗菌活性筛选指示菌,进行了云南重楼植物内生真菌抗菌活性的初步研究。结果表明,4株内生真菌对细菌、植物致病真菌、皮肤致病真菌多种病原微生物具有显著抑制生长的作用。     

濒危植物七子花DNA的提取及分析

用不同的方法抽提濒危植物七子花嫩叶DNA ,利用紫外分光光度法对其质量进行鉴定 ,以紫外分光光度法及琼脂糖凝胶电泳 -溴化乙锭染色法对其含量进行双重测定 ,显示适合七子花DNA抽提的最佳方法是改进的SDS法 ,该法适合RAPD分析。用此法对七子花植株不同器官的DNA进行抽提 ,其含量分别是 :嫩叶 >枝芽 >老叶 >嫩茎 >老茎。     

七子花减数分裂及小孢子形成

本文研究七子花的减数分裂及小孢子形成过程。七子花小孢子母细胞减数分裂为同时型,从小孢子母细胞后期到游离四分体产生为止,其周围均包围着一层胼胝质体,七子花的四分体主要为四面体型,单核小孢子呈三角形,花药壁的发育为双子叶型。     

七子花不同花器官的愈伤组织诱导效应

以七子花的不同花器官(花萼、花瓣、花丝、花柱、花药及幼蕾)在MS+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 0.6mg/L培养基上进行培养。结果表明,在上述6种器官中,以幼蕾、花萼、花瓣为外植体具有较高的诱导率,且增殖速度快。     

七子花不同器官次生代谢产物含量的分析

对七子花不同器官的黄酮、鞣质、生物碱、皂甙、木质素、绿原酸等6种次生代谢产物的含量进行测定与分析。结果显示：6种次生代谢产物总量和各成分在七子花不同营养器官中的含量均具有一定的差异,总含量以老根最高,但主要以木质素为主;黄酮、总皂甙和总生物碱的含量以叶片最高,分别为24.13、5.51、31.08 g·kg^-1;绿原酸在花中含量最高,其次是叶,分别为38.74、37.13 g·kg^-1;鞣质在幼根中含量最高,为9.33 g·kg^-1;木质素以老根为最高,是120.43 g·kg^-1。这6种次生代谢产物在不同器官中含量与它们的合成途径、运输方向和作用部位有一定的关系。     

濒危植物七子花繁殖器官的形态及其变异

对国家2级保护植物七子花(Heptacodium miconioides)的繁殖器官的形态及其变异进行了研究.结果显示:种群A的生境恶劣,花枝的开花数少,结实状况不及种群B,但因仅开基轮花的花序比例低和开三轮花的花序比例高,果实和种子的变异较大;而种群B的生境条件好,开花结实有明显的改善,但成熟种子的胚发育也不完全,且种子的最大值(由花序Ⅰ产生)不及种群A.说明七子花更适合于生境恶劣的条件下生长.另外,整枝疏花可以改善其结实状况,但效果不显著,说明七子花自身的营养调节能力差.因此,有性生殖障碍是七子花成为濒危物种的主要原因,要消除这种障碍必须研究种群的生态适应机制和种质的更新.     

七子花的繁殖生物学研究

对国家2级保护植物七子花（Heptacodium miconioides)的开花、传粉与结实等繁殖特性进行了研究。结果显示：七子花的花无梗,由多轮紧缩呈头状的聚伞花序组成顶生圆锥花序,多数花序开两轮花（基轮和中轮）,少数只开基轮花。自花传粉的比例高,花后4h的柱头花粉多超过60粒,8h的柱头可多达142粒,其中近1／3的花粉萌发,少数能到达子房。每个子房仅1枚胚珠可育,其平均结实率为40．6％,上轮花的开花会影响下轮花的结实率,降低幅度可达34．8％,早开花的结实也会影响迟开花的结实。表明七子花的结实率很低,资源限制是影响结实的主要因素。     

濒危植物七子花的生殖构件特征

对濒危植物七子花(Heptacodium miconioides)的花枝构成及不同类型花序的结实状况进行了研究。结果显示：(1)在黄经洞(种群B),花枝的营养生长旺盛,单枝的花序数和花数多,平均为23．5个和278朵;在狮子岩坑(种群A)．开多轮花的花序比例高．但花枝的花序数较少,单枝的开花数最少。(2)七子花的结实率很低．可育胚珠的平均结实率均在40％左右,且结实率与花序的开花数量呈显著的负相关关系。(3)花序类型对种子重量也有一定的影响,其中种群A的Ⅰ型花序所结果实的种子最大,但这些种子的胚也未发育完全。因此,七子花成为濒危物种的关键并不是结实的数量,而是结实的质量。     

濒危植物七子花RAPD条件的优化

以改进SDS法抽提濒危植物七子花嫩叶总DNA ,进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析 ,分别测试了镁离子 ,dNTP ,模板DNA含量 ,引物和DNA聚合酶量对反应结果的影响 ,通过各因子的组合研究 ,可知七子花RAPD分析较适宜的扩增条件是 :1 5μLPCR反应体积 ,1×Taq酶配套缓冲液 (1 0mmol/LTris·HClpH 9.0 ,50mmol/LKCl,0 .1 %TritonX_1 0 0 ) ,2 .5mmol/LMgCl2 ,2UTaq酶 (上海华美公司 ) ,1 0ng模板DNA ,2 0pmol引物 (上海Sangon公司 ) ;dATP、dCTP、dGTP、dTTP各 0 .1mmol/L。     

浙江天台山七子花群落种群分布格局研究

以浙江省天台山七子花群落为研究对象,采用相邻格子样方法取样数据,应用方差／均值比的t检验法、负二项参数、扩散型指数、Cassie指标、丛生指标、平均拥挤指数和聚块性指数等方法,分析了七子花群落各优势种群以及七子花种群在各样地中的分布格局,并分立木级对七子花种群在不同样地内的集群强度进行了测定。结果是：群落中各优势种群均呈集群分布;七子花种群在各样地亦呈集群分布,但集群强度有差异;各样地中七子花种群小树的集群强度均大于中树,种群呈扩散趋势。     

天台山七子花群落下土壤微生物生物量的季节动态

研究天台山七子花群落下土壤微生物生物量的季节变化规律及生态特性。根据实测数据分别对根际、根围微生物生物量碳、氮与土壤环境因子之间进行相关性分析,并建立了土壤微生物指标与环境因素之间的回归方程,以此为基础对天台山七子花群落下土壤微生物生物量的季节变化进行预测。回归分析表明：土壤温度、水分对微生物生物量的影响大于土壤pH值对微生物生物量的影响,而且土壤温度、水分对微生物生物量氮的影响大于对微生物生物量碳的影响。土壤温度对微生物生物量碳、氮的影响最大。