甲型H1N1流感病毒HA基因RT-LAMP检测方法的建立与初步应用

目的:建立反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)检测甲型H1N1流感病毒HA基因的方法,并用于检测临床样本.方法:通过在线软件Primer Explorer V4设计H1N1 HA基因的RT-LAMP引物,建立RT-LAMP检测方法,并评价其灵敏度和特异度.结果:与传统RT-PCR方法相比,RT-LAMP检测方法具备更高的灵敏度,达到10个拷贝,并且具有良好的特异性;在76份呼吸道感染儿童的咽拭子标本中检测到2份阳性,与RT-PCR方法检测结果相同.结论:建立的H1N1 RT-LAMP检测方法灵敏特异,简单快速,具备H1N1现场检测应用前景.     

胃癌组织中P16蛋白的异常表达与临床病理学意义

目的:通过研究P16蛋白表达与胃癌发生及胃癌临床病理因素的关系,以探讨检测P16蛋白在胃癌诊断及判断胃癌恶性程度、估计预后和指导临床治疗的临床病理学意义.方法:采用免疫组化S-P法,检测100例胃癌与20例正常胃黏膜组织中P16蛋白表达情况.结果:P16蛋白在胃癌中表达率(36.0%)明显低于正常胃黏膜组织(85.0%)(P＜0.01);P16蛋白表达与肉眼类型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移,TNM分期有关(P＜0.05);P16蛋白表达与患者性别、年龄、原发灶部位无关(P＞0.05).结论:检测P16蛋白的表达对辅助胃癌的诊断有很高的价值,并可作为判断胃癌恶性程度、估计预后和指导临床治疗的临床病理参考指标.     

酶联免疫与胶体金法检测艾滋抗体的效果观察

目的:探讨酶联免疫与胶体金法检测艾滋抗体的检测效果。方法:随机选取2011年1月~2012年1月我院收治及住院的患者1020例,对患者采用酶联免疫与胶体金法的检测方法检测艾滋抗体,观察对比两种检测方法的检测效果。结果:通过对检测效果的观察比较,可得酶联免疫法检测艾滋抗体的检测率为3.47%,胶体金法检测艾滋抗体的检测率为3.57%,两种方法的检测结果比较无显著差异性,无统计学意义(P0.05)。结论:采用酶联免疫与胶体金法检测艾滋抗体均具有良好的检测效果,可以准确、直观的检测出艾滋病病毒,可为艾滋病的诊断、预防和治疗提供参考依据,具有重要的临床价值,值得推广和应用于临床。     

人偏肺病毒TaqMan-MGB探针实时定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的:建立人偏肺病毒(hMPV)核酸特异的快速、敏感的TaqMan-MGB探针实时定量RT-PCR检测方法.方法:分别设计hMPV特异的引物与荧光标记探针,合成hMPV绝对定量RNA模板,建立实时荧光定量PCR方法,并与常规RT-PCR平行比较,对其灵敏性、特异性和可重复性,以及用于临床样本的适用性等进行评价.结果:本方法可对hMPV进行特异性诊断,检测灵敏度可达10拷贝/25 μL,检测线性范围至少可达10 1～10 6拷贝/反应,且实验重复性好,初步应用于北京地区采集的158份临床鼻咽拭子标本,定量RT-PCR检出31份标本阳性,明显高于常规RT-PCR方法(22/158).结论:建立了人偏肺病毒TaqMan-MGB探针定量RT-PCR检测方法,并初步证实可用于临床鼻咽拭子标本的检测,为开展hMPV的流行监测及临床早期诊断提供了技术手段.     

利用环介导恒温扩增法快速检测溶组织梭菌

目的:利用环介导恒温扩增技术(LAMP),设计快速检测溶组织梭菌的方法,研究其反应特性,以期能应用于气性坏疽溶组织梭菌感染的临床现场检验.方法:通过基因比对与引物设计,设计针对溶组织梭菌的环介导恒温扩增检测方法.然后检测该方法对溶组织梭菌及其他干扰菌的扩增情况,对其特异性进行评价.检测该方法对不同浓度溶组织梭菌的扩增情况,对其灵敏度进行评价.最后与全自动细菌培养法进行比较,评价其与常规检测方法的可比性.结果:本LAMP检测方法只针对溶组织梭菌有扩增,对其他15种菌不扩增,显示出良好的特异性.对溶组织梭菌的最低检测限为1× 101CFU/ml,显示其灵敏度较高.与全自动细菌培养法相比,有良好的可比性(P＜0.05),很高的灵敏度(92.6％)、特异性(98.1％)及准确度(97.3％).结论:本试验设计出了针对溶组织梭菌的LAMP检测方法,该LAMP检测方法具有良好的特异性较高的灵敏度,能够用于溶组织梭菌的临床现场检验.     

人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1常规RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用比较

分别设计HCoV-NL63和HCoV-HKU1特异的引物与荧光标记探针,并合成含靶基因的模板RNA,建立常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR方法,对其灵敏性、特异性和可重复性以及用于临床样本的适用性等进行平行比较评价.结果表明:这两种方法皆可对HCoV-NL63或HCoV-HKU1进行特异性诊断,其中荧光定量RT-PCR方法检测灵敏度均可达10拷贝/25μL反应体积,不同批次重复检测结果间的变异系数均小于5%.上述方法应用于158份临床鼻咽拭子标本,其中荧光定量RT-PCR方法检出6份HCoV-NL63阳性标本,5份HCoV-HKU1阳性标本,而常规RT-PCR方法则分别检出HCoV-NL63阳性与HCoV-HKU1阳性各3份.对常规RT-PCR方法获得的阳性样品进行序列分析证实上述方法的可靠性.本实验成功建立了可用于临床标本检测的人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR检测方法,并初步证实荧光定量RT-PCR检测方法检出率明显高于常规RT-PCR方法,这为开展HCoV-NL63和HCoV-HKU1的流行监测及临床早期诊断提供了有效技术手段.     

外周血Toll样受体2与早产的关系

目的:探讨早产产妇外周血Toll样受体2(toll-like receptor2,TLR2)mRNA的表达水平及与亚临床绒毛膜羊膜炎的关系.方法:选择早产自然分娩组15例,足月妊娠自然分娩组20例,足月要求剖宫产10例.RT.PCR检测母血中TLR2 mRNA的表达及与胎盘亚临床绒毛膜羊膜炎的关系.结果:①早产自然分娩组产妇TLR2高表达,明显高于足月自然分娩组,差异有统计学意义(P<0.05).②妊娠合并亚临床绒毛膜羊膜炎组TLR2较无亚临床绒毛膜羊膜炎组高,有统计学意义(P<0.05).结论:孕妇外周血表达TLR2,与分娩方式及感染情况有关;可能参与了分娩发动,尤其是早产分娩发动.     

XPG基因多态性与奥沙利铂治疗晚期胃癌疗效相关性的研究

目的:研究人着色性干皮病G组(XPG)C46T与奥沙利铂治疗晚期胃癌敏感性的关系.方法:用REAL-TIMEPCR技术检测92例晚期胃癌患者外周静脉血DNA的XPG基因的单核苷多态性(SNP)分型.比较三种基因型与奥沙利铂化疗后患者的2周期化疗临床疗效、中位疾病进展时间(TTP)的关系.结果:92例患者的C/C、T/T、C/T基因型分别为51.09%(47/92)、38.04%(35/92)、10.87%(10/92),C/C与T/T+C/T基因型2周期临床获益率和中位TTP分别为76.59%、6个月和53.33%、4个月,C/C基因型的临床获益率和中位TTP均优于T/T+C/T基因型.结论:XPG基因多态性与奥沙利铂疗效之间存在相关性,其检测结果可以指导胃癌选择奥沙利铂化疗.     

孕早期亚临床甲状腺功能减退与流产发生的相关性

目的:探讨孕早期亚临床甲状腺功能减退与流产发生的相关性.方法:2017年2月至2019年选择在本院进行建档的孕早期孕妇120例,检测血清游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)、促甲状腺激素(thyroid stimulating ...     

实时荧光核酸恒温扩增技术和液体培养法检测解脲脲原体的比较

目的:对实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)和液体培养法检测解脲脲体(UU)的结果进行评估,以选择更为快速、准确、实用的临床检测方法.方法:共采集180例疑似泌尿生殖道感染患者的尿液及2份拭子样本,一份拭子样本用液体培养,另一份拭子和尿液样本用 SAT 检测.结果:液体培养和尿液 SAT 检测阳性率均为61.1%,拭子SAT 检测阳性率为63.3%,其中16例拭子培养和拭子 SAT 检测结果不一致,18例拭子培养和尿液 SAT 结果不一致,但与拭子培养比较,拭子和尿液 SAT 结果均无统计学意义(P>0.05,kappa>0.75).结论:SAT 检测 UU 可以尿液为样本,检测效能与液体培养和拭子 SAT 基本相当,但尿液 SAT 法取样方便,检测快速,适临床实验室对 UU 的检测.     

应用可视化基因芯片技术检测幽门螺杆菌感染个体化药物治疗相关基因

目的:建立一种能同时检测幽门螺杆菌克拉霉素(23S)、喹诺酮(gyrA)耐药位点和人PPI代谢相关CYP2C19的基因多态性情况的基因芯片检测方法.方法:通过分析筛选人基因组CYP4502C19 *2,CYP4502C19*3及幽门螺杆菌克拉霉素和喹诺酮类耐药位点的DNA序列,设计制备了HP感染个体化药物治疗检测基因芯片,并对其特异性、灵敏度、重复性进行了评价.结果:该芯片可以检测出不低于103 CFU/ml的幽门螺杆菌和不低于2ng/μl的人基因组DNA.196例临床标本的芯片检测结果与测序结果基本一致.结论:应用可视化基因芯片进行幽门螺杆菌感染个体化药物治疗相关基因检测具有较高的特异性和敏感性,结果准确且易判读,具有较好的应用前景,可以为临床医生提供用药指导.     

COX-2、VEGF-C的表达与喉鳞癌临床病理特征的关系

目的:通过检测喉鳞癌组织中COX-2和VEGF-C的表达情况,探讨其与喉癌各临床病理特征的关系.方法:免疫组化S-P方法检测64例喉鳞癌及33例正常喉粘膜组织中COX-2和VEGF-C的表达,分析二者相关关系,并分析其与喉癌临床各参数的相关性.结果:在喉鳞癌组织中COX-2和VEGF-C的表达较高,其阳性率分别为76.56%、96.77%,与正常喉粘膜中9.09%、3.03%相比差异均具有显著性意义(P＜0.01).COX-2和VEGF-C在声门上型、分化程度低以及晚期喉癌中表达阳性率高(分别为57.58%、96.77%、83.67%和79.07%、90.32%、100%),而在其他类型中表达低,差异具有显著性意义(P＜0.01),COX-2和VEGF-C表达呈正相关.结论:COX-2、VEGF-C的高表达与喉鳞癌的临床密切相关,其对于喉癌的淋巴转移及预后均有重要意义.     

液基细胞、HPV检测与阴道镜宫颈癌的筛查方面的应用研究

目的:探讨液基薄层细胞学检查、HPV-DNA检测、阴道镜检查在宫颈癌早期诊断中的临床应用价值.方法:回顾性分析92例宫颈液基薄层细胞学检查未能明确诊断意义的宫颈非典型鳞状细胞病变患者,进行HPV-DNA检测与阴道镜检查,将检测的结果进行对比研究.结果:阴道镜与宫颈液基薄层细胞检查(TCT)及HPV检测在宫颈上皮内瘤变的灵敏度相比,差异有统计学意义(P＜0.05),阴道镜的检出率最高.随着TCT结果的病变级别提高,HPV感染率也提高,ASCUS组与LSIL组之间差异有统计学意义(P＜0.05).ASCUS、LSIL、HSIL病理活检的阳性率差异明显(P＜0.05),有统计学意义.宫颈的不同病变年龄主要集中在31-50岁之间.结论:宫颈液基薄层细胞学检查异常的患者,应进行HPV检测及阴道镜下活检,三步筛查法可大幅度提高宫颈高度病变的检出率,并且30-50岁的女性应定期做宫颈细胞学检查、HPV检测及阴道镜检查.     

norA基因mRNA表达水平与表皮葡萄球菌氟喹诺酮耐药性的关系

目的:探讨表皮葡萄球菌多药转运蛋白norA基因表达水平与氟喹诺酮耐药性的关系.方法:收集临床分离表皮葡萄球菌菌株,用纸片扩散法(Kirby-Bauer)检测50株表皮葡萄球菌对抗茵药物的敏感性,筛选出耐药和敏感菌株,以标准菌株ATCC12228作为对照;提取表皮葡萄球菌的总RNA,应用荧光实时定量RT-PCR检测表皮葡萄球茵多药转运蛋白norA基因mRNA表达水平.结果:所有菌株均检测到norA基因,临床分离耐药菌株norA基因mRNA表达水平明显高于敏感菌株,统计学分析差异有显著性(P＜0.05).结论:对氟喹诺酮类耐药的表皮葡萄球菌norA基因过度表达,其可能是表皮葡萄球茵耐药的原因之一.     

血清同型半胱氨酸水平与冠心病相关性的临床分析

目的:分析血清同型半胱氨酸(Hcy)水平与冠心病(CHD)的临床相关性,提高对CHD的防治水平.方法:选择2011年2月～2012年6月在我院就诊且确诊为CHD的患者82例,按照患者CHD的类型、冠状动脉病变支数和狭窄程度进行分组后,检测和比较患者血清Hcy水平,并分析其与冠心病严重程度、冠状动脉病变支数和狭窄程度的相关性.结果:血清Hey水平与CHD的严重程度、冠状动脉病变支数和冠状动脉狭窄程度均呈显著正相关(r=0.716,r=0.738,r=0.802,P＜0.05).结论:血清Hcy水平与CHD的发生发展密切相关,通过动态检测患者血清Hcy水平可有助于预测CHD病变的发展并评估患者的预后.     

应用高分辨率熔解曲线分析石蜡标本中KRAS基因突变

目的:KRAS基因在结直肠癌患者突变率为30％～50％,并且KRAS基因状态与抗EGFR抗体疗效的密切相关.常用的直接测序法其检测灵敏度低、容易出现假阴性结果.采用高分辨率溶解曲线分析法检测结直肠癌中KRAS基因突变,探索其应用于临床检测的可行性.方法:本文收集20例结直肠癌患者石蜡包埋组织标本,应用高分辨率熔解曲线方法检测KRAS基因突变(2,3号外显子).将KRAS基因突变型DNA(p.G12D)和野生型DNA梯度混合稀释,突变型DNA浓度分别为40％、20％、10％、2％,进行高分辨率熔解曲线方法进行检测,并将扩增产物进行直接测序,比较两种方法的灵敏度.结果:在20例结直肠癌患者中检出5例2号外显子突变,p.G12D 2例,p.G12V 2例,p.G13D 1例,3号外显子未检出突变.HRM方法检测基因突变的检出限可达2％,直接测序法检测基因突变的检出限为20％.结论:HRM法比直接测序法灵敏度高,能精确检测出结直肠癌石蜡标本中低浓度的KRAS突变,有望应用于临床基因突变检测.     

鼠尾胶原建立胶滴肿瘤药敏检测方法的初步研究

目的:用鼠尾胶原建立胶滴肿瘤药敏检测方法(CD-DST),探讨此方法在体外药物敏感性检测中的可行性.方法:建立Hela细胞在鼠尾胶原中培养的三维立体模型;在此基础上进行药物敏感性检测,用MTT、CD-DST两种药敏检测方法检测Hela细胞对4种化疗药物的敏感性.结果:Hela细胞在鼠尾胶原凝胶滴中生长良好,呈克隆样增殖、放射状生长;两种药敏检测方法有较好的一致性.结论:用鼠尾胶原建立的CD-DST技术是可行的,在体外药敏检测中具有一定的临床应用价值.     

牛奶中金黄色葡萄球菌PCR检测方法的建立与应用

目的:建立一种直接从牛奶中检测金黄色葡萄球菌的PCR快速诊断方法.方法:根据已发表的金黄色葡萄球菌16-23SrRNA特异性序列设计并合成一对引物,通过优化反应条件建立从牛奶中直接检测金黄色葡萄球菌的PCR方法.结果:与细菌的常规分离方法相比,PCR法敏感性高,与其它型葡萄球菌无交叉反应,特异性迭100%,检测细菌基因组DNA最低浓度为35ng/μL,能在5h内对送检的牛奶样品直接进行金黄色葡萄球菌的测定,可用于乳制品中金黄色葡萄球菌的检测.结论:成功建立了快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌PCR方法.     

微小RNA-21与PTEN在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:检测微小RNA-21(miR-21)和抑癌基因PTEN在上皮性卵巢癌组织中的表达,探讨二者的相关性及其与临床病理特征间的关系.方法:采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)检测48例上皮性卵巢癌组织、24例良性上皮性卵巢肿瘤及15例正常卵巢组织标本中miR-21表达.采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化酶(SP)免疫组化方法检测上述组织中PTEN蛋白表达,分析mir-21表达和PTEN表达的相关性及其与临床病理特征的关系.结果:茎环Real-time RT-PCR检测miR-21表达的敏感性和特异性良好;miR-21在卵巢癌组织中的相对表达量(4.849±1.813)显著高于良性卵巢肿瘤(1.133±0.291)及正常卵巢组织(P<0.01),PTEN在卵巢癌组织中阳性表达率为(41.66%),明显低于卵巢良性肿瘤(83.33%)及正常卵巢(100%).卵巢癌组织中miR-21表达量与PTEN阳性表达率存在显著负相关(r=-0.447,P<0.01).miR-21及PTEN表达随卵巢癌的临床分期和组织分级的进展分别呈上升及下降趋势,而且二者表达均与淋巴结转移相关(P均<0.01),而与组织病理类型无关.结论:miR-21在上皮性卵巢癌组织中的表达升高,可能通过负性调节PTEN表达在卵巢癌的发生发展中发挥致癌基因的作用,并且与卵巢癌的演进及不良预后密切相关.     

BV蓝在细菌性阴道炎病诊断中的应用

目的:运用BV蓝快速诊断试剂检测阴道分泌物唾液酸酶活性,观察其在细菌性阴道炎病(BV)诊断中的价值.方法:以无菌棉试子采集符合标准的患者阴道分泌物,分别用BV蓝试剂盒、传统Amsel临床诊断标准进行判断.结果:BV蓝试剂盒在诊断BV中与传统Amsel法符合率为92.6%,其敏感性为96.9%,特异性为88.9%,阳性预测值为88.3%,阴性预测值为97.1%.结论:BV蓝试剂盒检测阴道分泌物唾液酸酶活性是诊断BV的可靠方法,与传统方法比,快速、简便、易于推广.