“香蕉细胞中DNA粗提取与鉴定”简化实验的研究

“DNA的粗提取与鉴定”是高中生物学中分子生物学水平的实验之一。师生结合新课程教材的理论,对“香蕉细胞中DNA粗提取与鉴定”的简化实验进行优化,取得了满意的实验效果。     

从科学、安全、节省角度设计"DNA的粗提取与鉴定"实验

“DNA的粗提取与鉴定”实验是高二（实验修订本·必修）第2册实验9的内容。它是我们感到在新教材中最难做的一个大型必做实验。我们发现做该实验存在以下问题：①实验室空气中酒精浓度高、实验桌上仪器摆放太拥挤易引起严重的安全隐患；②因需要发的临时材料太多而费时太多，以至于不能保证连续2个班的实验；③提取的DNA量太少，鉴定显蓝色太浅，或提取不到失败，[第一段]     

一种高效快速的鱼类标本基因组DNA提取方法

以95%酒精保存的黄鳝(M onopterus albus)和斑鳢(Channa maculates)标本为材料,采用先沉降DNA再去除杂质的方法从鱼类标本中提取基因组DNA。基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测以及PCR扩增结果显示,本方法提取的鱼类基因组DNA的电泳主带清晰明亮;A260/A280值在1.7830-2.0144之间;PCR扩增产物条带清晰明亮,且单一整齐没有拖带,表明本方法可从酒精保存的鱼类标本中提取比较纯净的DNA,能够满足一般分子生物学试验需要。与传统苯酚/氯仿法相比,本方法操作简单快速,避免了苯酚等物质对后续实验的影响,可作为一种常规动物组织DNA提取方法。     

"DNA粗提取与鉴定"实验的改进

新高中《生物》教材中 ,增加了“DNA的粗提取与鉴定”的实验 ,目的在于 :1 )学会 DNA的粗提取和鉴定方法 ;2 )观察提取出来的 DNA。该实验拓宽了与物理学和化学的联系 ,强调了发现知识的过程与方法 ,减少学生需要记忆的文字内容。同时也强调生物学的科学地位。在 2 0 0 0年 1 2月由人民教育出版社出版的《生物·第二册》(试验修订本·必修 )里 ,要求学生做“DNA的粗提取与鉴定”的实验 ,该实验以新鲜鸡血为原料 ,其提取流程略。而在与之相配套的由人民教育出版社出版的《教师教学用书》里 ,又介绍了另一种“DNA粗提取和鉴定”的方法 ,…     

怀孕前后酒精摄入对雌鼠植入前胚胎DNA甲基化模式建立的影响

女性怀孕前后饮酒会对胎儿的发育及神经系统造成不利影响,称为“胎儿酒精综合征”（fetal alcohol spectrum disorders,FASD）。小鼠通常作为研究该病的动物模型。该实验采用体外培养技术及体内冲胚法研究雌鼠怀孕前后酒精摄入对各期植入前胚胎全基因组DNAT基化模式建立的影响。小鼠植入前胚胎体外培养实验发现,体外实验组I（怀孕前酒精处理组1,除8-cell外,其他各期胚胎的DNA甲基化水平明显低于体外对照组;体外实验组II（正常胚胎在含乙醇的培养基中培养）,各期植入前胚胎DNA甲基化水平均明显低于体外对照组。体内实验发现,体内实验组I（怀孕前酒精处理组）与体内的实验组II（怀孕后酒精处理组）,各期植入前胚胎DNA甲基化水平明显低于体内对照组。体内、外实验结果表明：受精前后酒精对各期植入前胚胎DNA甲基化模式的正确建立造成紊乱,该结果可为进一步揭示FSAD发病机制提供一定的实验基础。     

不同保藏处理的昆虫标本DNA提取及其随机扩增多态DNA反应

实验利用CTAB法对柳二十斑叶甲Chrysomelavigintipunctata (Scopoli)、异色瓢虫HarmoniaaxyridisPollas、七星瓢虫Coc cinellaseptempunctataLinnaeus、小地老虎Agrotisypsilon (Rottemberg)、红蜻CrocothemisserviliaDrury、无齿稻蝗OxyaabentataWil lemse和中华稻蝗Oxyachinensis (Thunberg)等 7种昆虫进行了基因组DNA提取。从自然干燥标本、烘干标本及酒精浸泡标本获得的DNA均可用于RAPD PCR反应 ,且烘干标本、酒精浸泡标本提取效果优于自然干燥标本。这种提取方法简便易行 ,容易掌握 ,且耗资小于其它分子生物学方法。     

一种快速、高效提取多种样品DNA的方法

“DNA的提取和鉴定”是高中生物学课程中的重要实验之一,基于学生提出的问题,笔者引导学生对DNA提取方法进行文献梳理和实验优化,探索出了一种快速、高效提取DNA的方法,该方法适用范围广,可以有效提取动物组织、植物组织、土壤微生物、粪便等材料的DNA,该探究活动激发了学生的学习兴趣,培养了学生总结归纳能力、创新思维和实验探究能力。     

"DNA的粗提取与鉴定"实验改进

DNA粗提取与鉴定是中学阶段比较重要的实验, 根据高二生物(必修)第2册实验九“DNA的粗提取与鉴定”的实验操作方法,很难得出实验结果。其原因是:实验成本太高,一般中小城市及农村中学的实验经费承受不了;实验准备工作繁重、步骤复杂,操作时     

白腐真菌总DNA提取方法的研究

白腐真菌的巨大而广谱的生物降解能力使其在“三废”治理和环境修复中具有良好的应用前景。为寻求一种简便有效的白腐真菌总DNA的提取方法,在实验中分别采用蜗牛酶法、CTAB法、SDS法和蛋白酶K法进行操作,且对提取的DNA进行紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳（AGE）检测。通过对提取的总DNA浓度、纯度、实验操作过程以及试验成本等方面的比较与分析,得出蜗牛酶法是白腐真菌总DNA提取的理想方法。     

不同保藏处理的昆虫标本DNA提取及其随机扩增多态DNA反应

实验利用CTAB法对柳二十斑叶甲Chrysomela vigintipunctata (Scopoli)、异色瓢虫Harmonia axyridis Pollas、七星瓢虫Coccinella septempunctata Linnaeus、小地老虎Agrotis ypsilon (Rottemberg)、红蜻Crocothemis servilia Drury、无齿稻蝗Oxya abentata Willemse和中华稻蝗Oxya chinensis (Thunberg)等7种昆虫进行了基因组DNA提取。从自然干燥标本、烘干标本及酒精浸泡标本获得的DNA均可用于RAPD-PCR反应,且烘干标本、酒精浸泡标本提取效果优于自然干燥标本。这种提取方法简便易行,容易掌握,且耗资小于其它分子生物学方法。     

严谨与规范是实验成功的法宝

“DNA的粗提取与鉴定”实验成功率很低.介绍了实验实录和实验反思,归纳了实验成功的4个关键步骤,认为严谨与规范是实验成功的法宝,是事业成功的前提.     

"DNA的粗提与鉴定"实验改进

经过多年的反复摸索、实践,笔者对中学生物学教材中“DNA的粗提与鉴定”实验作了一些改进,有利于提高实验效果。 1 实验原理遗传物质DNA为白色丝状物,在细胞中与蛋白质结合在一起,绝大部分存在于细胞核中。DNA不溶于酒精,在低浓度盐溶液中也几乎不溶解,在0．14 mol/L的盐溶液中,溶解度最低,仅为在纯水中溶解度的1％,随着盐浓度的增加,溶解度也增加,至2 mol/L时,溶解度较大,比纯水高2倍。DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。     

内侧前额叶皮质DNA甲基化调控大鼠酒精相关行为

酒精滥用不仅导致组织器官损伤,还易诱发神经精神疾病。研究表明,DNA甲基化在酒精诱导基因表达和行为改变中发挥重要作用,但具体的神经生物学机制尚未被阐明。为了探索DNA甲基化在酒精滥用中的作用机制,本研究选取健康成年雄性SD大鼠(Rattus norvegicus)32只,随机分为饮水对照组(n=16)和慢性酒精暴露组(n=16),运用双瓶选择实验(two bottle choice test,TBCT)评估大鼠酒精偏爱率(alcohol preference),通过旷场行为(open field test,OFT)评估活动状态并检测血酒精浓度。分离两组大鼠内侧前额叶皮质(medial prefrontal cortex,mPFC),提取总DNA,利用简化代表性重亚硫酸盐测序技术(reduced representation bisulfite sequencing,RRBS)构建mPFC甲基化谱,对差异基因进行功能富集和通路分析,筛选与酒精滥用密切相关的甲基化差异基因,运用qRT-PCR技术检测差异基因的表达,验证DNA甲基化对基因的表达调控;利用qRT-PCR和Western blot检测甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)和甲基化CpG位点结合蛋白2(methyl CpG binding protein 2,MeCP2)的表达;同时,还检测了短期酒精暴露(7 d)对大鼠mPFC内DNMTs和MeCP2的影响(n=8/组)。结果表明,慢性酒精暴露大鼠mPFC内基因启动子区甲基化水平显著升高。与酒精滥用密切相关的差异基因中,慢性酒精暴露组Ntf3和Ppm1G启动子区甲基化水平升高,mRNA表达降低;Hap1和DUSP1启动子区甲基化水平降低,mRNA表达升高。慢性酒精暴露使DNMT3B和MeCP2 mRNA和蛋白表达升高,而短期内酒精暴露不影响它们的表达。本研究初步证实DNA甲基化与酒精滥用的发展相关,可能受DNMT3B和MeCP2分子的调控,并发现了与酒精滥用相关的靶基因Ntf3、Ppm1G、Hap1和DUSP1,为研究酒精滥用的神经生物学机制提供了新见解,同时为酒精滥用治疗提供了可能的药理学靶点。     

火龙果茎基因组DNA提取方法改良

火龙果(Hylocereus undulatus)是近年发展起来的一种新兴热带水果, 其茎富含多糖、多酚及其它次生代谢物, 黏性极大, 很难从中提取高质量的DNA。特别是一年生以上的老茎, 目前尚未有较好的DNA提取方法。为了解决这一难题, 该研究对CTAB+Tris-HCl洗涤法进行了3种方式的改良。结果表明, “改进三”方法可不受取样时期和取样部位的限制, 从一年生以上火龙果茎中提取的DNA质量最好且不含黏性物质, 可用于酶切与分子标记等生化和分子生物学实验。该研究探索了一条较为理想的火龙果茎DNA提取方法, 值得推广应用。     

火龙果茎基因组DNA提取方法改良

火龙果(Hylocereus undulatus)是近年发展起来的一种新兴热带水果, 其茎富含多糖、多酚及其它次生代谢物, 黏性极大, 很难从中提取高质量的DNA。特别是一年生以上的老茎, 目前尚未有较好的DNA提取方法。为了解决这一难题, 该研究对CTAB+Tris-HCl洗涤法进行了3种方式的改良。结果表明, “改进三”方法可不受取样时期和取样部位的限制, 从一年生以上火龙果茎中提取的DNA质量最好且不含黏性物质, 可用于酶切与分子标记等生化和分子生物学实验。该研究探索了一条较为理想的火龙果茎DNA提取方法, 值得推广应用。     

“DNA的粗提取与鉴定”实验的改进

"DNA的粗提取与鉴定"实验是人教版高中生物学中的一个重要实验,但教材中给出的实验方案存在一些不足。通过多次实验,从提取DNA的实验材料、提取方法、鉴定方法等方面进行了改进,取得了较好的实验效果。     

一种经济高效的用Silica提取纯化质粒DNA的方法

目的：为了达到批量提取质粒DNA的目的,在多次实验的基础上,建立一种经济、高效的质粒提取方法。方法：以pUC18、pET28b、pCAMBIA1304等3种质粒为材料,分别采用silica法和碱裂解法提取质粒DNA,通过质粒DNA浓度的紫外分光光度法定量测定、电泳分析和HindⅢ酶切鉴定,对两种质粒提取方法的效果进行了比较与评价;对silica法进行了改进和优化,进行大批量重组子的提取和验证。结果：silica法和碱裂解法提取质粒DNA效果相当,都可进行后续实验,但silica法具有经济、高效、无毒的优势。结论：silica法是一种简单、经济、高效的质粒提取方法,可用于批量质粒DNA提取。     

"DNA的粗提取与鉴定"实验的改进

“DNA的粗提取与鉴定”实验是高中生物学教学中的一个重要实验,此实验教材中是用鸡血作为实验材料,实验时存在实验操作繁琐,学生一堂课很难完成实验。实验过程中较难观察,在析出DNA黏稠物时,难以估计加入蒸馏水的量等问题,实验费用太高,对普通学校来说,买活鸡显然不现实,与市场上的小商贩联系购买新鲜鸡血,很难定时、定量地保证供应。为此我们对此实验加以改进：[第一段]     

仿刺参基因组DNA提取方法改进

开发了利用仿刺参管足活体取样提取基因组DNA的方法。按照传统方法提取仿刺参基因组DNA需要杀死实验对象并剖取体腔内纵肌(通常100mg)作为实验材料,并且实验过程中常常因为仿刺参的生物学性状而影响最终实验效果。以仿刺参在生活状态下拔取少量管足(10～20mg即可)作为取样源,在保持仿刺参的生活力不受影响的同时提高了取样效率。对仿刺参基因组DNA的提取方法进行了改进优化,并在常规海洋动物基因组DNA提取方法的基础上增加了部分操作步骤。与常规的基因组DNA提取方法相比,改进后的方法获取的基因组DNA完全符合后续实验要求。而且可随时根据即时效果(中间检测)和后续实验要求调整实验步骤,更增加了实验的可操作性。     

日本基因公司开发出不需破碎植物和细菌就可在短时间内提取DNA的试剂

日本基因公司宣布,开发出在短时间内可提取高纯度DNA的试剂“ISO PLANT”,并在近期商品化。使用这种试剂可以用普通方法,不需破碎植物组织,只浸入试剂且在1～2小时以内提取DNA。 传统的DNA提取法主要是碳酸法。“ISO PLANT”使用苯甲基氯化物代替之。由于苯甲基氯化物会破坏植物组织的细胞壁、细胞膜、核膜等,可在进入“ISO PLANT”的表面活性剂的作用下溶解DNA。因此,能省去了破碎植物组织的操作。另外,碳酸有毒,不使用这种药能更安全地进行DNA提取。与传统法(CTAB法)比,菠菜DNA的产率约增加3倍,拟南芥增加到了4～7倍。水稻、郁金香