牛黄对小鼠口腔成纤维细胞功能的调节作用

探讨牛黄对原代小鼠口腔成纤维细胞功能的影响,揭示其在溃疡愈合过程中的作用及机制。本试验采用MTT法、氯胺-T法、明胶酶谱分析和酶联免疫反应测定了牛黄对小鼠口腔成纤维细胞增殖、胶原沉积、金属蛋白酶-2、-9活性和基质金属蛋白酶抑制因子-1合成的影响。结果表明牛黄能显著抑制小鼠口腔成纤维细胞的增殖、胶原沉积和金属蛋白酶-2活性,同时也极显著(P<0.01)抑制基质金属蛋白酶抑制因子-1的产生。结果提示牛黄在溃疡愈合过程中不具生肌作用,可能通过抗炎促进溃疡愈合;其抑制胶原合成的机制可能与极显著抑制基质金属蛋白酶抑制因子-1有关。     

阻断Notch信号的角质形成细胞对成纤维细胞胶原合成的影响

目的:本课题组前期工作已经证明阻断Notch信号对角质形成细胞的分泌功能有所影响,使其分泌的多种促纤维化因子发生改变.本实验将探讨在复合培养的条件下,通过调节角质形成细胞中的Notch信号,了解其对成纤维细胞collagen-1合成的影响.方法:运用角质形成细胞-成纤维细胞复合培养的模型,于复合培养前3天进行血清刺激或者γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断角质形成细胞中的Notch信号,即在角质形成细胞分化前进行干预.然后提升至气液交界面使其达到复层生长和终末分化,后与成纤维细胞共培养,观察阻断Notch信号后的角质形成细胞对成纤维细胞合成collagen-1的影响.结果:在分化前,给予角质形成细胞血清刺激,在复合培养0小时,Notch-1、Jagged-1表达明显升高(P＜0.05),在复合培养第一天,p21表达上调、p63表达下降(P＜0.05),表明在复合培养时,角质形成细胞中的Notch信号明显活化.通过在血清刺激前给予DAPT预处理,在复合培养0小时,角质形成细胞中Notch信号下游分子p21和p63的表达恢复至无血清刺激水平(P＜0.05),表明DAPT组确实阻断了角质形成细胞中的Notch信号.而DAPT组的成纤维细胞collagen-1的表达相对于血清刺激组明显下降,而与无血清组无明显差异,表明阻断Notch信号后的角质形成细胞在复合培养条件下,确实能够抑制成纤维细胞collagen-1的表达,使其合成collagen-1的量恢复至无血清刺激水平.结论:DAPT能够阻断Notch信号的活化,用阻断Notch信号后的角质形成细胞与成纤维细胞共培养,能够明显抑制成纤维细胞合成Ⅰ型胶原的能力,从而抑制瘢痕的增生.     

博莱霉素致肺间质成纤维细胞MMP-2/TIMP-1表达失衡

观察博莱霉素对肺间质成纤维细胞中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及组织金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）表达的影响,探讨博莱霉素引起肺纤维化的机制。体外培养肺间质成纤维细胞,并向培养基中加入博莱霉素,在作用不同时间后收集样本,采用酶谱图测定细胞培养上清液中MMP-2酶活性、ELISA测定TIMP-1量,免疫组织化学法检测细胞中MMP-2、TIMP-1的原位表达,RT-PCR法检测MMP-2和TIMP-1的mRNA水平。结果发现,博莱霉素在2h、12h促进MMP-2的分泌,24h后无促分泌作用;而2-48h,MMP-2的原位表达及mRNA均不受博莱霉素的影响;博莱霉素从12h开始促进TIMP-1及mRNA的表达,并持续至48h。结果表明博莱霉素可引起肺间质戍纤维细胞MMP-2／TIMP-1表达失衡,并可能参与肺纤维化的发生。     

运动负荷对骨基质有机成分的影响及其可能机制

骨基质的有机成分主要为骨Ⅰ型胶原基质金属蛋白酶,该酶是细胞外基质降解的重要酶类;基质金属蛋白酶抑制因子则是基质金属蛋白酶活性的抑制剂,它们均为骨代谢过程中的重要标志性物质。本文通过查阅文献资料,对生理、部分病理状态及运动干预条件下,骨基质的Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶及其抑制因子的变化情况进行综述,并对其变化的机制予以阐释。     

MMP-2、MMP-3、MMP-9、TIMP-3及Col-Ⅱ因子在兔软骨细胞损伤后的表达变化

检测MMP-2、MMP-3、MMP-9、TIMP-3及Ⅱ型胶原细胞外基质因子在正常兔关节软骨细胞和划伤后不同时间点的表达变化。在无菌条件下获取兔膝关节软骨细胞,原代体外培养软骨细胞,六孔板内制备细胞损伤模型。用显微镜观察正常细胞和损伤后1 d、3 d和7 d 3个时间点的软骨细胞增殖情况。采用实时PCR检测正常软骨细胞和损伤后1 d、3 d和7 d 3个时间点的基质金属蛋白酶-2、3和9,基质金属蛋白酶抑制物-3及Ⅱ型胶原的m RNA的表达水平。成功分离软骨,经原代培养后成功建立损伤细胞模型。MMP-2损伤后第1天与正常组相比升高,第3天时下降,第7天明显水平最高。与正常组相比,MMP-3在细胞损伤后第1天表达明显下降,随后第3天逐渐下降,第7天与第3天未见明显变化。MMP-9划伤后第1天比正常组升高,第3天上升至最高水平,第7天下降。TIMP-3基因在损伤后第1天与正常组相比明显下降,随后第3天稍有升高,第7天水平最低。Ⅱ型胶原划伤后第1天与正常组相比明显升高,随后第3天呈下降趋势接近于正常组,第7天又呈上升趋势。MMP-2、MMP-3、MMP-9、TIMP-3因子和Ⅱ型胶原在细胞损伤后的不同时间点有不同的表达行为,这可为调节细胞外基质基因治疗关节软骨损伤选择合适的靶基因和时间窗提供实验依据。     

缺血后处理对缺血／再灌注大鼠心肌间质保护效应机制的探讨

目的：观察缺血后处理（IPIC）对缺血／再灌注（I／R）大鼠心肌基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）变化的影响,探讨IPTC保护I／R心脏间质的机制。方法：24只健康雄性SD大鼠随机分为3组（n：8）：假手术组（SC组）、I／R组和IPTC组。记录各组左室血流动力学变化,观察心肌胶原含量,测定血浆中肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）浓度。以Westernblot法测定心肌组织中MMP-2和TIMP-2蛋白表达水平,以实时定量PCR（RT-PCR）法检测MMP-2和TIMP-2的表达水平。结果：与sC组相比,I／R组心肌胶原含量和左室舒缩功能明显降低,血浆cK、LDH活力和心肌MMP-2蛋白表达及mRNA水平明显升高,TIMP-2蛋白及mRNA水平明显降低;而IPTC组,大鼠心肌胶原含量和左室舒缩功能明显升高,血浆cK、LDH活力和心肌MMP-2蛋白表达及mRNA水平降低,TIMP-2蛋白及mRNA水平升高。结论：IPTC对再灌注损伤心肌间质有保护作用,其机制可能与抑制心肌中MMP-2表达,促进TIMP-2表达有关。     

基质金属蛋白酶9对糖尿病足溃疡愈合影响的研究进展

在糖尿病足患者溃疡创面分泌物中,基质金属蛋白酶9 (matrix metalloproteinase-9,MMP-9)过高是预测糖尿病足的发生及足溃疡难愈的主要指标,其可能的机制包括:高水平MMP-9降低VEGF的表达、抑制成纤维细胞的生物学行为影响糖尿病足溃疡愈合;失衡的MMP-9/TIMP-1比值影响糖尿病足溃疡愈合。选择性MMP-9抑制剂(包括小分子抑制剂、高级伤口辅料抑制剂、基于干扰基因水平表达的RNA抑制剂)可以作为促进糖尿病足溃疡愈合的手段,但仍需大样本、多中心随机对照试验以及长期随访进一步验证其疗效及安全性。现查阅近年来涉及MMP-9和糖尿病足溃疡相关的文献,综述MMP-9对糖尿病足溃疡愈合的影响及其机制研究进展。     

白细胞介素1β抑制心肌成纤维细胞胶原合成并促进其分解

本文应用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-thymidine, 3H-TdR)掺入法及3H-脯氨酸(3H-proline, 3H-Pro)掺入法观察白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)对Spague-Dawley乳鼠心肌成纤维细胞DNA及胶原合成的影响,并用明胶酶谱法和Western blot检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs) MMP-2、 MMP-9活性及MMP-2和MMP-9蛋白表达,用RT-PCR检测MMP-2、 MMP-9的mRNA表达.结果显示:(1)0.1、1、10、100ng/mL的IL-1β作用于细胞24h后,各组3H-TdR掺入量明显较对照组低(P<0.05, P<0.01),同时3H-Pro掺入量明显降低(P<0.05, P<0.01);而0.01ng/mL的IL-1β作用于细胞后,对3H-TdR掺入量和3H-Pro掺入量无明显影响.(2)不同剂量(0.01～100ng/mL)的IL-1β均刺激MMP-2和MMP-9活性升高,并呈剂量依赖性.IL-1β增加MMP-2和MMP-9蛋白表达(P<0.05, P<0.01).(3)IL-1β(0.01～100ng/mL)刺激MMP-2和MMP-9 mRNA表达升高(P<0.05, P<0.01).以上结果表明,IL-1β通过减少心肌成纤维细胞的细胞分裂来降低胶原的合成,同时促进MMP-2和MMP-9的转录及转录后的表达来促进胶原的分解,提示其在心肌重塑过程中起一定作用.     

葛根素对糖尿病大鼠肾功能及肾组织MMP-3、TIMP-1表达的影响

目的 探讨葛根素对糖尿病大鼠肾小球结构、功能及肾组织基质金属蛋白酶3(MMP-3)、组织抑制剂1(TIMP-1)表达的影响。方法 腹腔注射链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型,每日ip葛根素注射液,共16周。采用原位杂交法检测肾小球TIMP-1 mRNA表达,流式细胞术和免疫组化检测肾皮质MMP-3、TIMP-1及Ⅳ型胶原、层粘连蛋白表达。结果 糖尿病组较对照组肾小球TIMP-l mRNA及蛋白表达增加,MMP-3、TIMP-1及Ⅳ型胶原、层粘连蛋白表达亦增加;葛根素用药组较糖尿病组TIMP-1 mRNA、蛋白及MMP-3、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白表达减少。结论 葛根素对糖尿病大鼠肾功能、形态的影响具有保护作用,除降低血糖外,调节肾小球MMP-3、TIMP-1表达式从而减轻肾小球细胞外基质沉积也可能是其作用途径之一。     

MMP-2与Ⅰ型胶原关系的研究进展

MMP-2与I型胶原分别为基质金属蛋白酶家族的重要成员和细胞外基质的主要成分,近年来研究发现,MMP-2与Ⅰ型胶原的表达与调控在多种与胶原代谢有关的疾病中起着重要作用。通过增强或抑制MMP-2来调控I型胶原,进而防止疾病的发生发展已成为很多疾病的研究热点。对MMP-2与Ⅰ型胶原关系更新的认识也引起了越来越多的关注,必然带动对MMP-2与Ⅰ型胶原更深层次的研究,本文就近年来有关MMP-2与Ⅰ型胶原的研究进展做一综述,为多种胶原代谢疾病发病机理与防治的探究提供新的思路和理论依据。