呼吸机呼气滤器的研制及防护效果评价

为防止呼吸机呼气管道中的含菌气体扩散污染病房空气,引发交叉感染。利用HEPA材料、活性炭、特殊的缓释杀菌滤材,研制成一套呼吸机呼气除菌过滤装置。经参照有关标准用物理模拟气溶胶颗粒(0.28-0.34um)及微生物气溶胶测试,过滤效率>99.995％,微生物气溶胶滤除率达100％。气流阻力<230Pa,完全能满足临床呼气机的过滤除菌使用条件。     

PHA刺激对淋巴细胞修复DNA损伤的影响

本文报道PHA刺激对淋巴细胞DNA修复的影响的实验结果。以254nm波长的UV照射细胞(30J/m~2)引起DNA损伤,以[~3H]-TdR掺入实验测定非程序DNA合成,用超微量法测定细胞的NAD~+含量,并以[~(35)S]-蛋氨酸掺入,聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影术测定蛋白质生物合成,其结果如下: (1)在被PHA转化的淋巴细胞内非程序DNA合成,随PHA刺激的时间加长而增高;PHA处理淋巴细胞42小时,合成的速率约增加4倍;(2)在转化的淋巴细胞内,非程序DNA合成及程序DNA合成都被N-乙基马来酰亚胺(一种DNA聚合酶α的抑制剂)抑制,表明在DNA修复过程中DNA聚合酶α可代替DNA聚合酶β发挥作用; (3)UV照射后,被PHA刺激的淋巴细胞内NAD~+含量大约减少43.2％,而对照淋巴细胞内NAD~+的含量只减少25％,似乎说明PHA刺激能促进淋巴细胞内的P-ADP-核糖化作用;(4)在受PHA刺激72小时的淋巴细胞内有多种蛋白质合成,这些细胞在UV照射后以含10μg/ml嘌呤霉素的培养基培养,则非程序DNA合成被明显抑制(P<0.01),这提示DNA修复是一需要蛋白质合成的过程。此外,在受UV照射后10-45小时的淋巴细胞内,诱导产生一种分子量大约34000道尔顿的蛋白质。 上述结果表明,当PHA使淋巴细胞从静止状态转化为增殖状态时,有多种酶被诱导。由于这些酶,如DNA聚合酶α及P-ADP-核糖聚合     

综合遗传学公司推出食品沙门氏菌快速诊断试验盒

综合遗传学(Integrated Genetics)公司最近推出它的第一个产品--检出食品沙门氏菌用的快速诊断试验盒。它被称为GENE-TRAK,是以DNA杂交技术为基础的。目前只能用于沙门氏菌的检出。该公司的科学家已分离出DNA探针,含有与沙门氏菌DNA互补的碱基序列模式。分离出可能存在于食品样品中的任何微生物的DNA链后,将沙门氏菌DNA探针加入样品中,若探针与存在于样品中的DNA单链杂交,则表明其中有沙门氏菌存在。     

核酸及蛋白质合成、提取、纯化

921598自动化引物延伸装置〔专,日〕/Toa一Fuel/Jo3154一869:13.11。89一JP一294369(02。07.91)13.11。89 as 294369.92一235530/32(10页)〔译自DBA,1991,10(21),91一12085〕 新装置能将荧光标记的DNA引物加入样品、退火、酶促引物延伸及浓缩。该系统包括:DNA样品容器支撑及定位装置、将样品、引物及缓冲液导人容器的设施、加盖去盖装置、加热及温控装置、样品冷却装置、容器振荡(混匀)装置、低速及高速顺序离心装置以及控制装置(使退火、延伸及浓缩等过程可自动进行)。通过应用混匀和离心过程,可完全消除粘连在管壁上的样品,并且,微…     

多功能电泳装置——小型凝胶和电洗提设备同存一箱

Isco公司新生产的小蓝箱(Little Blue Tank)不但便于回收特定凝胶带的DNA和RNA,还改进了水下微型凝胶的特性。这种装置包括一只水平缓冲液箱、一只紫外线透性的9×10cm凝胶盘、一个适用于12样井和3样井胶板的梳子,以及回收样品的两种电洗提附件。电极可防止外侧胶列弯曲(胶列的弯曲会减少有效样品的含量),缓冲液箱的深蓝色又使被淹没的样井显而易见。电洗提杯可快速收集和浓缩凝胶和溶液中的蛋白质和其它大分子化合物。还有小容量的盐阱,它能有效地回收低达几纳克的DNA。电压可选     

一种用于浓缩微量大分子样品的装置

本实验室为解决微量蛋白质样品浓缩的需要,制作了一套简便浓缩装置。该装置是利用两个有机玻璃框板夹着一张透析膜,两外侧分别夹上档板,固定成两排被透析膜平行分隔开的槽。框板上吸收剂槽的底部平齐,而样品槽的底部较深,呈V形。各板之间以及透析膜的接触面上都涂一层均匀的凡士林封闭层,以防止渗漏。 使用时将稀样品液加入底部呈V形的槽中,另一     

日两家公司计划用基因重组菌工业生产酶

生化工业公司和天野制药公司分别向通产省提出把基因重组芽孢杆菌属(Bacillus)的菌用于酶的工业生产的计划书,符合所使用的设备,装置及其运转管理方法等“重组DNA工业化指南”,于5月27日得到了通产省的认可。 根据这次制造计划的认可,工业用酶的重组生产在日本将转向工业化。通产省还认可了在出售产品样品时也符合“重组DNA工业化指南”所规定的安全性标准。     

用EndoV和碱电泳法检测哺乳动物细胞嘧啶二聚体的切除修复

紫外线(UV)辐射是自然环境中重要的DNA致伤因子。UV辐射在DNA造成的最主要一类损伤产物是环丁烷嘧啶二聚体(pyrim-idine dimer,PD),它是由DNA中一条多核着酸链上两相邻嘧啶碱基各自的C5和C6共价连接形成的环丁烷结构。哺乳动物细胞主要通过切除修复途径移除PD,恢复DNA的正常结构。一种从噬菌体T4感染的E.coli中提取的T4核酸内切酶V(EndoV)能特异识别PD,并在该损伤位点切断磷酸二醋键,造成单链断裂。本文即以EndoV为探针,以其敏感位点(endonuclease-sensitive-site,ESS)     

迟钝爱德华氏菌RNA提取及痕量基因组DNA去除方法探究

迟钝爱德华氏菌EIB202是一类细胞壁结构特殊的革兰氏阴性菌,高质量RNA提取相对较难。为了从转录组水平研究这类致病菌的致病机理,需要摸索有效的RNA提取及RNA样品中痕量基因组DNA去除方法。对常规RNA提取步骤进行改进,增加PBS清洗、反复冻融及较高浓度溶菌酶处理等步骤;另外,利用小体系基因组DNA去除系统,Mg2+与Mn2+协同激活DNase I去除RNA样品中基因组DNA污染。利用优化方法提取的RNA在质量及浓度(1 740 ng/μL)方面均有了显著改善,并建立了一套完全去除RNA样品中痕量基因组DNA污染的程序。     

廉价而易于设置的微弹装置

佛罗里达大学和以色列Volcani Center的D.J.Gray及其同事详细介绍了如何设置一种导入DNA的微弹装置,该装置价格低廉,可用手工工具在40分钟内将其安装在实验室工作台上。由Gray研究小组研制的“基因枪”是一种改进的粒子射入枪(PIG)。与常规PIG不同,达种新装置采用塑料真空腔,     

绵羊红细胞的质量对静脉注射用人免疫球蛋白抗补体活性测定的影响

为了分析IVIG抗补体活性测定出现负值与绵羊红细胞质量的关系。采用CH50试验测定IVIG ACA时,在被检样品和其他试验条件相同的情况下,比较了被污染的和未污染的绵羊红细胞对IVIG抗补体活性测定的影响。结果显示,使用被污染的绵羊红细胞(作为试验材料时所得的)检测10份样品ACA(%)均为负值;使用未污染的绵羊红细胞未出现负值。提示被污染的绵羊红细胞干扰了抗补体活性测定,从而引起CH50试验结果出现偏差。     

硅基质膜核酸(DNA)纯化柱的去污染与再生

为了建立一种快速硅基质膜核酸(DNA)纯化柱的去污染与再生方法,本实验先后用含低浓度Triton X-100的碱洗液和酸洗液在65℃水浴5 min处理污染纯化柱。结果表明污染纯化柱经碱(酸)相继处理后,其洗脱液中不存在凝胶电泳和PCR可检测到的微量DNA残留。处理过的纯化柱的DNA再结合能力较新纯化柱稍有提高。上述结果表明碱和酸洗液热处理在短时间内可完全去除纯化柱中污染的DNA并提高其DNA再结合能力。     

对多氯联苯的清理迫切需要生物技术

为了清理下水道,加拿大的一家公司,即Microbe有限公司(安大略)计划研究培育几种能降解多氯联苯(PCBs)的细菌。这家仅成立两年的公司还打算和一些工业部门一起研究水处理系统。该公司认为,PCBs是一种较容易被降解的化合物。在美国被环境保护局(EPA)批准对该化合物进行工业规模的处理。该公司将一组取得美国专利的质粒DNA组合到一些在污染区找到的微生物中,所得到的这些微生物能够产生一种特殊的酶(该酶能够去除PCB分子中的氯原子)。这些最有希望     

GM-CSF基因治疗试验准备就绪

今年四月,Whitehead生物医学研究所(Boston,MA)的科学家发表的资料指出,粒细胞-巨噬细胞/集落刺激因子(GM-CSF)是抑制癌变的强有力的免疫刺激因子。现在,Somatix Therapy公司(Alameda,CA)已提出一项试验新药物的申请,以期在最近几周内开始用GM-CSF进行基因治疗。 按照今年六月由重组DNA顾问委员会批准的试验方案,从Johns Hopkins肿瘤中心(Baltimore,MD)的晚期肾细胞癌患者取出的肿物将被送交Somatix,在那里,人GM-CSF基因将被导入肿瘤细胞。产生该因子的细胞将被照射以防止其分裂,然后移植到病人体内。人们希望重组DNA细胞能起到疫苗作     

从凝胶中回收DNA的一种简便方法

从凝胶中回收DNA的方法已见多种报道,其中的电洗脱法较实用,已有几种装置作为商品出售。Wu等的方法无须任何专门设备,而是在DNA电泳区带前方挖槽,槽内嵌半透膜,使样品自凝胶泳入槽内的缓冲液中。该方法说来简单,实际操作却很费劲,尤其在样品数量大或重复操作时,更觉不便。我们按照Wu等的工作原理,制成一种电洗脱器,可使DNA的回收操作变得简单而高效。     

在金黄色葡萄球菌核酸酶测活体系中Ca~(2+)与底物DNA的结合

将携带金黄色葡萄球菌核酸酶(SNase)基因的质粒pFOG405转化到大肠杆菌SE6004中,获得分泌表达的SNase,在该酶的测活体系中,观察到激活剂Ca~(2+)与底物DNA微弱结合,引起底物DNA的UV光谱在260nm附近明显下降。在Ca~(2+)浓度为10mM时,底物DNA紫外区CD光谱在270—280nm和210—230nm处〔θ〕值减少,〔θ〕值为零的点从260nm移至257nm。这一结果表明,Ca~(2+)与底物DNA在缺少SNase的情况下仍能结合,引起DNA分子构象变化。     

激光同位素分析仪测定液态水的氢氧同位素及其光谱污染修正

氢氧稳定同位素示踪技术是研究土壤-作物-大气连续体(SPAC)水分循环的重要手段。激光同位素分析仪以其独特的优点逐渐得到广泛应用,但其在测量植物水时,与同位素质谱仪的测量结果存在差异。本文采用Los Gatos Research公司生产的激光同位素分析仪DLT-100分别测定植物水、土壤水、雨水和地下水等共19个样品,并用其开发的光谱污染矫正软件标记和量化水样品的污染,修正污染水样品的同位素值,然后与同位素质谱仪进行比对。结果表明:土壤水、雨水和地下水等样品均未受到污染,而植物样品均受到一定程度的光谱干扰;植物水的δD和δ18O修正范围分别是1.21‰～26.65‰和0.50‰～18.27‰。该修正方法消除了δD测定的差异,并大大降低了δ18O的偏差。可见,激光同位素分析仪法在测量土壤水、雨水和地下水同位素时可以有效地代替传统的同位素质谱仪法,但对植物水的测量时,则首先需要判断样品是否受到光谱干扰,如果受到污染,仍需同位素质谱法进行确认。     

在金黄色葡萄球菌核酸酶测活体系中Ca~(2+)与底物DNA的结合

将携带金黄色葡萄球菌核酸酶(SNase)基因的质粒pFOG405转化到大肠杆菌SE6004中,获得分泌表达的SNase,在该酶的测活体系中,观察到激活剂Ca~(2+)与底物DNA微弱结合,引起底物DNA的UV光谱在260nm附近明显下降。在Ca~(2+)浓度为10mM时,底物DNA紫外区CD光谱在270—280nm和210—230nm处〔θ〕值减少,〔θ〕值为零的点从260nm移至257nm。这一结果表明,Ca~(2+)与底物DNA在缺少SNase的情况下仍能结合,引起DNA分子构象变化。     

用硫酸铵沉淀法从液体培养物中纯化噬菌体λDNA

噬菌体是近年来DNA克隆最常用的载体之一。因此高质量的λDNA的制备是DNA重组的一项关键性技术。所谓高质量的λDNA制品应不被宿主菌的DNA所污染,DNA链必需完整而不被折断成碎片,并能被工具酶所加工。迄今制备λDNA的方法的主要差别在于对噬菌体颗粒的纯化步骤并存在一些缺点:PEG沉淀结合CsCI梯度离心法费用大。得率低,而且费时,不适合于多个样品DNA的快速提纯。纤维素酶DE-52层析法的缺点是大量的溶菌物过柱后,DE-52会结块,而且要有多套层析设备。直接从PEG沉淀的噬菌体颗粒提取的DNA往往纯度不高,需要有亚精胺存在时才能被限制性内切酶所切割。1989年,Ziai等首先用(NH_4)_2SO_4从平板培养法制备的噬菌体溶菌物中沉淀λgtll颗粒。用RNase处理去除污染的宿主菌RNA后,先用蛋白酶K,再用NaOH处理使λ噬菌体颗粒裂解,再用酚抽     

基于微量DNA样本的简化甲基化文库构建方法研究

RRBS(简化甲基化测序)是一种有效研究DNA甲基化状态的测序方案。文库构建是该方案中最关键的实验步骤之一,RRBS文库构建往往因为酶切产物少,文库构建步骤繁多等因素,导致DNA起始量需要1 ug以上。然而很多来源于人的样本,如冰冻组织穿刺、石蜡切片、显微微切割等,都往往只能获得100 ng以下的DNA,无法满足常规RRBS文库构建的起始DNA总量要求,从而大大限制RRBS技术的应用范围。本研究主要探讨并设计了基于微量DNA样本(100 ng)的RRBS文库构建策略,主要通过优化Msp I酶切条件、DNA片段大小筛选、缩减反应步骤及减少DNA转移次数等技术手段,大大提高了DNA回收率,进而建立了2种有效使用微量DNA样品的RRBS文库构建方案(即EA-Method和WB-Method方案)。EA-Method方案在处理100 ng左右的DNA时,有经济、快速、高效的特点,但文库质量略差于WB-Method方案;WB-Method方案可将DNA起始量降低至10 ng,并且文库质量高。为验证WB-Method方法的可靠性,研究人员选取了3种志愿者样本(全血和口拭子),采用WB-Method同时进行常量和微量RRBS文库构建,并进行Illumina Hiseq平台测序,数据通过生物信息分析得到微量RRBS检测的CpG,CHG,CHH中C碱基的甲基化比例与常量RRBS结果一致。同时,该方法可以大大降低DNA损耗及损伤,因而该方法可将RRBS技术应用到更广泛的样本类型中去,有效拓展RRBS的研究领域。