我国农业生物基因工程安全评价的现状、问题与建议

我国农业生物基因工程安全评价的现状、问题与建议吕建秋雷茂良石燕泉程金根（华南农业大学广州５１０６４２）（农业部科技质标司北京１０００２６）农业生物基因工程是指利用载体系统的重组ＤＮＡ技术及利用物理、化学和生物等方法把重组ＤＮＡ导入农业生物体内的技...     

基因工程蛋白下游纯化技术研究进展

基因工程蛋白下游纯化技术研究进展范清林桂向东吴清发魏跃武宋礼华（安徽省生物研究所,合肥２３００３１）自从１９７２年首次发现核酸内切酶,并在同年完成了世界上第一次成功的ＤＮＡ体外重组实验以来,基因工程技术在二十多年的历程中经历了飞速的发展。我国在八十年...     

鲑鱼降钙素基因在大肠杆菌中的克隆与表达

以鲑鱼基因组ＤＮＡ为模板,采用ＰＣＲ获得ｓＣＴ基因,并为ＤＮＡ序列分析所证实。以ｐＧＥＸ－３Ｘ为表达载体,利用体外定点突变技术成功地构建了融合蛋白ＧＳＴ－ｓＣＴ的重组表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ－ｓＣＴ,在大肠杆菌中得到高效表达,其表达量约为菌体总蛋白的３０％;利用亲合层析法对融合蛋白ＧＳＴ－ｓＣＴ进行纯化,再经Ｆａｃｔｏｒ Ｘａ酶切后获得了重组ｓＣＴ,并对其进行活性检测。初步实验证明,重组ｓＣＴ具有较     

棒状杆菌发酵基因工程研究进展

传统的育种方法由于本身的缺陷受到了基因工程育种的强有力挑战,基因工程技术应用于发酵工业创立了全新的发酵基因工程。传统发酵菌种棒状杆菌的分子生物学研究欣欣向荣,棒状杆菌的受体系统、载体系统以及ＤＮＡ转移技术都已取得长足进展。对棒状杆菌的分子遗传机制的阐明使得构建表达载体并表达目的基因成为现实。利用基因突变和基因重组技术选育优良的棒状杆菌发酵菌种,业已取得明显成效。     

位点专一性蛋白酶——基因工程的新工具

位点专一性蛋白酶——基因工程的新工具廉德君（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词位点专一性蛋白酶基因工程随着基因工程技术的发展,通过重组ＤＮＡ技术获得目的蛋白已成为一种常规的实验室操作。将目的蛋白基因和层析“手臂”蛋白或多肽基因融合...     

内切酶SCaI对不同纯度质粒的酶解效率探讨

限制性内切酶ＳＣａＩ适用于多种质粒载体,尤其是融合蛋白表达载体,ｐＧＥＸ系统,因它具有二个ＳＣａＩ酶切位点,因此用ＳＣａＩ酶解图谱鉴定以ｐＧＥＸ系统为载体的重组子甚为便捷。简便碱裂解法提取重组ＤＮＡ省时,省耗。本文探讨了ＳＣａＩ对用常规和简便两种碱裂解法提取的重组ＤＮＡ的酶解效率。结果表明：（１）简便碱裂解法抽提的重组ＤＮＡ,用ＥｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＶ、ＰｓｔＩ、ＢａｍＨＩ等限制性内切酶酶解,可以获     

聚合酶链反应筛选阳性重组体

聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术已广泛用于ＤＮＡ基础研究和临床诊断。本文介绍用它来鉴定靶序列，从而进一步筛选阳性重组体。由于引物Ｔｍ较高，采用二温段扩增法，确实扩增出１０ｂｐ靶序列。文章还讨论了扩增较小片段要注意的条件。     

含小插入片段重组子段选鉴定方法之探讨

基因工程中,重组ＤＮＡ时,当外源ＤＮＡ很小并与载体相差很大时,其目的重组的筛选鉴定工作不仅量大,而且常规鉴定方法无法采用。本文针对此类重组子的鉴定方法作了探讨,提出了三级四步筛选鉴定法,即：质粒筛选、重组鉴定、目的重组鉴定和双酶切鉴定。该法不仅有效地解决了国内解决实验条件下含小插入片段重组子的鉴定问题,大大缩小鉴定范围,而且快速省耗的鉴定方法也为ｐＧＥＸ载体系统的更广泛应用提供了新的启示。     

国内外基因工程制药综述

自 1 972年ＤＮＡ重组技术诞生以来 ,生命科学进入了一个崭新的发展时期。以基因工程为核心的现代生物技术已应用到农业、医药、轻工、化工、环境等各个领域。它与微电子技术、新材料和新能源技术一起 ,并列为影响未来国计民生的四大科学技术支柱 ,而利用基因工程技术开发新型药物更是当前最活跃和发展迅猛的领域[1] 。从 1 982年美国Ｌｉｌｌｙ公司首先将重组人胰岛素 (商品名Ｈｕ ｍｕｌｉｎ)投放市场 ,标志着世界第一个基因工程药物的诞生以来 ,基因工程制药作为一个新兴行业得到各国政府的大力支持 ,各国都积极研究和开发各种基因工程药…     

面向21世纪,尽快开设基因工程高等教育课

基因工程一般认为是指体外将核酸分子（目的基因）插入或重组到病毒、细菌质粒或其它载体中,形成ＤＮＡ重组体,然后再设法导入新的宿主系统内,使目的基因在新宿主内呈现稳定复制和高效表达。这项生物高技术从它诞生那天起,就展现了无比强大的生命力。如今基因工程的发...     

重组家蚕病毒表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白

将传染性囊病病毒ＨＺ９６株主要宿主保护性抗原ＶＰ２的ｃＤＮＡ基因克隆到杆状病毒转移载体ｐＢａｃ－ＰＡＫ８中,获得重组转移载体ｐＢａｃＰＡＫ－ＶＰ２,载体ｐＢａｃＰＡＫ－ＶＰ２与修饰病毒Ｂｍ－ＢａｃＰＡＫ６线性化基因组ＤＮＡ共转染单层家蚕Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ（Ｂｍ）Ｎ细胞,经细胞内同源重组,筛选到重组病毒。ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫鲩迹结果表明,ＶＰ２在家蚕培养细胞和家蚕幼虫中均得到了表达。     

基因靶位操作的原理与策略

基因靶位操作（ｇｅｎｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）是８０年代发展起来的一项重要分子生物学技术,是通过外源ＤＮＡ与染色体ＤＮＡ间的同源重组,定点修饰、改造基因组特定位点的技术。１同源重组同源重组是基因靶位操作技术的分子生物学基础。ＤＮＡ同源重组在基因转化和遗传...     

蛋白质工程

蛋白质工程张海银（广州市中华英豪学校５１０９６０）叶言山（安徽省庐江矾矿中学２３１５００）蛋白质工程（Ｐｒｏｔｅｉｎｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）是在重组ＤＮＡ方法用于“操纵”蛋白质结构之后发展起来的分子生物学分支。它是以蛋白质分子的结构及其功能为基础,通...     

荧光素酶基因的克隆表达及其产物纯化和鉴定

利用能形成多角体的杆状病毒载体系统ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３,把萤火虫荧光素酶（Ｆｉｒｅｆｌｙｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ,Ｌｕｃ）ｃＤＮＡ克隆到转移功体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋３／３通过共转染草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ,Ｓｆ）细胞得到重组毒株ＴｎＮＰＶ－Ｌｕｃ－ＯＣＣ,在该重组杆状病毒株中Ｌｕｃ基因受到合成启动子和ＸＩＶ启动子的双重调控。该重组杆状病毒株在Ｓｆ９细胞中能形成多角体,有Ｘ－     

基因诊断

基因诊断王庆忠（山东省潍坊教育学院生物学系青州２６２５００）基因诊断又称ＤＮＡ诊断或遗传诊断,它利用重组ＤＮＡ技术作为工具,直接从基因水平检测致病微生物的存在和种类,人类遗传病的基因缺陷等,从而成为临床诊断领域中病原体检查、遗传病诊断、癌基因和抗癌基...     

日本血吸虫中国大陆株基因多态性研究

对日本血吸虫中国大陆株湖南、湖北、江西、安徽、四川、云南隔离群以及一个实验室传代品系从基因水平进行了多态性研究。首先,在用ＰＣＲ－ＳＳＷＣＰ技术分析了２８Ｓ ｒＤＮＡ－Ｄ２高变区基础上,测定了该区安徽和云南隔离群的ＤＮＡ序列;其次,用ＰＣＲ获得了含有ＩＴＳ的ｒＤＮＡ片段,并对其进行了酶切点重复序列的多态性分析;最后,用ＲＡＰＤ技术分析了全基因组ＤＮＡ的多态性。结果表明,安徽与云南隔离群的２８Ｓ ｒ     

位点特异性重组技术在分子生物学中的应用

位点特异性重组技术系统通过对ＤＮＡ进行准确切割和重新连接,能够导致ＤＮＡ发生包括切离、倒位或相互易位等形式的重排,从而使得在染色体水平对真核生物基因组进行遗传改造,以及对转基因动物和植物中转基因的表达进行有效的控制成为可能。来自大肠杆菌Ｐ１噬菌体的Ｃ...     

编码天麻抗真菌蛋白cDNA的分子克隆

用重组ＤＮＡ 技术研究了编码天麻抗真菌蛋白（ＧＡＦＰ）的基因,从天麻（Ｇａｓｔｒｏｄｉａ ｅｌａｔａＢｌ．）块茎中提取Ｐｏｌｙ（Ａ） ｍ ＲＮＡ 后合成ｃＤＮＡ,构建成表达型ｃＤＮＡ 文库,用纯化的蛋白质探针通过免疫筛选找出对应的ｃＤＮＡ 克隆。在进一步证明所选用的ｃＤＮＡ 克隆含有重组的λ－ｐｈａｇｅ ＤＮＡ 后,提取和纯化含有插入片段重组子的ＤＮＡ,用Ｅｃｏ ＲＩ酶切分析可见插入片段。已分离出编码天麻抗真菌蛋白的基因     

融合蛋白基因工程应用及研究

通过重组ＤＮＡ技术将不同的基因或基因片段融合在一起,经表达后可以得到由不同的功能蛋白拼合在一起而形成的新型多结构域的人工蛋白,这是一种极具潜在应用价值与理论意义的方法。目前这种方法已被广泛应用于诜我领域的研究中,并已显示出较高的价值,本文尝试对融合蛋白研究的几个领域的发展情况进行综述。     

生产氨基酸的基因工程菌研究进展

随着抗癌药物制剂、氨基酸输液制剂及甜味二肽生产的飞速发展,对原料氨基酸的需求量日益增长。传统的发酵工业越来越不能满足需求,势必被以基因工程为基础的新兴发酵工业所代替。通过建立大肠杆菌及棒状杆菌的高效载体受体系统,运用ＤＮＡ重组、定向突变等手段,对代谢途径及关键酶进行了深入系统的研究,为代谢工程注入了新的活力,为获得高产、优质且易于自动化生产的菌株打下了基础