慢病毒载体系统介导hUC—MSC绿色荧光蛋白和荧光素酶共表达技术体系的建立

目的建立慢病毒载体系统介导的人脐带间充质干细胞（hUC-MSC）绿色荧光蛋白（GFP）和荧光素酶共表达技术体系。方法 GFP和荧光素酶共表达慢病毒载体与相应包装质粒psPAX2和pMD2.G经聚乙烯亚胺介导共转染HEK293T细胞以包装病毒;病毒感染P4代hUC-MSC 12 h后,再行嘌呤霉素筛选24 h,普通光学显微镜观察细胞形态,荧光显微镜下观察GFP的表达情况,IVIS Kinetic成像系统拍照以观察和记录慢病毒感染后hUC-MSC荧光素酶的表达情况;MTS法行细胞生长曲线作图,同时,普通和实时定量RTPCR法检测细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1和p21WAF1/CIP1的表达。采用方差分析和t检验进行统计学分析。结果慢病毒感染并不会造成体外培养hUC-MSC形态的明显改变,而荧光显微镜和IVIS Kinetic成像系统的观察结果则分别证实,GFP和荧光素酶经慢病毒载体系统的介导可在hUC-MSC中成功地共表达。此外,细胞生长曲线作图结果表明,对照和GFP及荧光素酶共表达慢病毒感染后hUC-MSC的生长增殖速率相仿（P〉0.01）;实时定量RT-PCR法检测结果则显示,与对照慢病毒感染相比,GFP和荧光素酶共表达慢病毒感染后其细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1和p21WAF1/CIP1mRNA表达水平分别是对照组的1.11倍（P=0.130）、0.54倍（P=0.000）和0.78倍（P=0.005）,表明外源GFP和荧光素酶共表达对体外培养的hUC-MSC生长增殖等表型无显著影响。结论慢病毒载体系统可有效介导外源基因在hUC-MSC中的表达;同时,GFP和荧光素酶在hUC-MSC中的共表达也将极大地方便其体内转归的示踪。     

二甲双胍对人脐带间充质干细胞形态、增殖、表面标志及细胞周期的影响

目的探讨不同浓度二甲双胍（METF）对人脐带间充质干细胞（hUC-MSC）形态、增殖、表面标志及细胞周期的影响。 方法取健康足月新生儿脐带在体外分离出hUC-MSC进行传代培养,至第3代（流式细胞仪分析）对细胞进行鉴定,取第6代处于对数生长期的hUC-MSC （相对老化）,将对照组与不同浓度METF （0.1,1,5,10,20?mmol/L）干预的细胞进行比较,观察不同浓度METF干预对细胞的形态、增殖率（MTT法分别于24、48、72?h检测）、及细胞表面标志和细胞周期的影响,采用One-Way ANOVA,及LSD-t检验进行统计学分析。 结果（1）METF为0.1?mmol/L、1?mmol/L,细胞形态无显著改变,当药物浓度为5?~?20?mmol/?L时,随着药物浓度增加、培养时间延长,细胞形态改变越显著。（2）METF为0.1?mmol/L（24?h：101.28±0.98,24?h：104.06±1.76,24?h：101.51±0.67）促进hUC-MSC增殖,药物浓度为1?~ 10?mmol/L在培养初期可增加间充质干细胞的增殖率,随着培养时间的延长,细胞的增殖逐渐被抑制。METF为20?mmol/L（24?h：86.64±0.66,48?h：58.38±2.52,72?h：17.75±1.35）抑制细胞增殖,抑制作用随着时间延长而增强（P?< 0.05）。（3）当METF浓度为5,10,20?mmol/L时,随着药物浓度的增加,CD105的表达逐渐减弱（F?= 17.539,P?< 0.05）。METF未对CD44、CD90产生影响。（4）METF为0.1?mmol/L时降低G0/G1期的比例（64.16±1.20,P?< 0.05）,促进间充质干细胞的增殖,随着药物浓度的增加,细胞增殖逐渐被抑制。 结论METF浓度在0.1mmol/?L促进hUC-MSC增殖,而在浓度5 ~ 20?mmol/L时抑制人脐带间充质干细胞的增殖及表面标志CD105的表达,不同浓度的METF均未对CD44、CD90的表达产生影响。     

UMSCs对U87MG细胞增殖的影响

目的：通过对研究脐带间充质干细胞（Umbilical cord mesenchymalstellcells,UCMSCs）与人恶性胶质母细胞瘤细胞U87MG细胞（U87 Malignant glioma cells）体外共培养,模拟肿瘤生长的内环境,以及其对U87MG细胞增值作用的影响及肿瘤细胞与间充质干细胞的共培养方法。方法：提取人脐带间充质干细胞进行体外培养、扩增,用MTT法测定uMSCS上清液对U87MG的影响,用瑞士染色法检测U87MG形态学变化。结果：MTT比色法结果显示UMSCS对U87MG有抑制作用。96小时培养后1：8、1：4、1：2及未稀释的UMSCs上清液对u87MG的抑制率分别为17％,24％,37．2％及46．4％,u87MG细胞形态亦随着培养时间的延长由多角形变为梭形,突起消失,细胞间骨架结构断裂。结论：通过对共培养前后U87MG与UMSCs共培养后形态学变化、生长曲线变化及对生长周期的影响作用的观察分析,得出UMSCs及其上清液对U87MG有抑制作用,而且呈时间及浓度依赖性。     

Wnt/beta-catenin 信号通路活化的人滑膜细胞对软骨细胞的影响

目的：研究Wnt/beta-catenin 信号通路活化的人滑膜细胞对软骨细胞的作用,探讨骨关节炎（OA）发生及进展的可能途径和分子 机制。方法：beta-catenin 过表达慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,荧光显微镜观察病毒转染情况,Western blot方法检测滑膜细胞核 内beta-catenin 蛋白表达。Transwell 小室共培养人滑膜细胞与正常人软骨细胞,倒置显微镜观察滑膜细胞对软骨细胞生长形态变化 的影响。酶联免疫吸附（ELISA）法检测不同时间点共培养体系中软骨细胞培养上清液中MMP-7 的变化,找出MMP-7 变化最明 显的时间点。同时在最佳时间点ELISA 方法检测软骨细胞培养上清液CTX-II、COMP的水平。结果：慢病毒转染滑膜细胞后,荧 光显微镜下可见多数滑膜细胞表达荧光,Western blot检测发现滑膜细胞胞浆及胞核中茁-catenin 表达明显上调（P<0.01）。通路活 化的人滑膜细胞与软骨细胞共培养后,光镜下观察软骨细胞生长形态变化不明显,但随共培养时间的延长软骨细胞生长受到抑 制,胞体边缘发白,贴壁强度降低。ELISA 结果显示通路活化的人滑膜细胞与软骨细胞共培养后软骨细胞上清液中MMP-7表达 明显升高,与正常组相比有显著差异（P<0.01）,软骨细胞上清液MMP-7 的变化有一定的时间依赖性,在共培养2 h、6 h、12 h时逐 渐升高,24 h 时略有降低,且在共培养6 h 时变化最为明显。而共培养6 h时通路激活组软骨细胞培养上清液中COMP、CTX-II水 平与正常对照组相比均明显升高（P<0.01）。结论：茁-catenin 过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞可成功激活Wnt/茁-catenin 信号通 路,Wnt/茁-catenin 信号通路活化的滑膜细胞可影响正常软骨细胞的生长,并引起滑膜- 软骨体系内环境异常,促使软骨基质的降 解,这可能是滑膜炎促进OA 发生、发展的机制之一。     

双歧杆菌对肠上皮细胞生长和白介素-8分泌功能的影响

目的探讨双歧杆菌对人肠上皮细胞株HT29生长及其IL-8分泌水平的影响。方法HT29细胞在96孔板上生长24h后分为正常细胞对照组、高剂量双歧杆菌共培养组（细菌终浓度为1×10^10CFU／m1）、低剂量双歧杆菌共培养组（细菌终浓度为1×10^6CFU／ml）、轮状病毒感染对照组,分别加入不同剂量双歧杆菌和感染轮状病毒共培养,继续培养24h,光镜下观察细胞生长状态,MTT比色法检测细胞活性情况,ELISA检测细胞培养上清中IL-8表达水平。结果光镜下观察到双歧杆菌与HT29细胞共培养后细胞形态无明显改变,共培养24h后MTT检测双歧杆菌对HT29细胞增殖和调亡无明显影响,但轮状病毒感染对照组细胞病变脱落,活细胞数量明显减少。共培养6h,其余3组细胞培养上清中IL-8分泌较正常细胞对照组增加（P〈0．05）,高剂量双歧杆菌组增加较低剂量双歧杆菌组差异有显著性（P〈0．05）,但两个剂量组均明显低于轮状病毒感染阳性对照组的IL-8分泌增加水平（P〈0．05）;感染后24h,细胞培养上清中IL-8分泌水平高于正常细胞对照组（P〈0．05）,但高、低剂量双歧杆菌组之间差异无显著性（P〉0．05）,两个剂量组IL-8分泌增加水平均明显低于轮状病毒感染阳性对照组（P〈0．01）。结论两歧双歧杆菌共培养不影响HT29细胞的生长,双歧杆菌能够促进HT29细胞分泌细胞因子IL-8,但明显低于致病微生物刺激引起的细胞因子分泌水平改变,这种促进作用无时间-剂量依赖关系,提示双歧杆菌与肠道内致病微生物对肠道免疫功能的影响不同,双歧杆菌促进肠上皮细胞分泌IL-8可能与其参与的肠道黏膜免疫系统发育成熟相关。     

小鼠骨髓源树突状细胞体外诱导培养及初步鉴定

用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）和重组小鼠白细胞介素4（rmIL-4）体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞,进行形态学变化观察,分析细胞表面分子,刺激T细胞增殖,探讨小鼠骨髓源树突状细胞（BMDC）体外诱导培养并进行初步鉴定。体外培养9d后BMDC可达80%以上,光镜下可见典型的树突状细胞形态。清楚表达成熟期主要表面标志物,可显著刺激同种异体混合淋巴细胞增殖。获得了较高纯度的BMDC,避免了使用传统磁珠分离方法所带来的成本高,操作复杂,产出率低的弊端,为研究BMDC功能以及运用开展下游实验提供材料。     

兔BMSCs复合纤维蛋白胶在体外分化为角膜基质细胞的研究

目的：探讨体外诱导兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化为角膜基质细胞的可行性,并观察纤维蛋白胶（FG）作为细胞支架材料的效果。方法：密度梯度法获得BMSCs,体外诱导实验将细胞分为三组：对照组用普通培养皿、BMSCs培养条件并不加角膜基质细胞共培养的条件下培养;非FG共培养组使用普通培养皿并与角膜基质细胞共培养诱导BMSCs分化;FG共培养组使用铺有FG的培养皿并与角膜基质细胞共培养诱导BMSCs分化。培养1w及2w后用WestenBlot法检测三组细胞Keratocan的表达,在相差显微镜下进行形态学观察。结果：原代培养的BMSCs表现出成体干细胞潜能,CD29染色阳性,符合骨髓基质干细胞的特征。诱导培养2周后对照组BMSCs融合成单层、呈条索状生长;非FG共培养组部分细胞体积变小、多突起,局部呈梭形生长;FG共培养组细胞生长状态良好,部分细胞呈梭形或纺锤形,与FG生物相容性好。Westen检测结果：BMSCs细胞在纤维蛋白胶或普通培养皿上特定培养条件下均能诱导表达角膜基质细胞的特异性蛋白Keratocan。结论：骨髓间充质干细胞在条件培养基下可分化为角膜基质细胞,有望作为治疗角膜疾病及角膜组织工程的备选材料,纤维蛋白胶组织相容性好,可为组织工程提供移植细胞片。     

电刺激引发骨骼肌细胞钙振荡对nAChRγ启动子活性的影响

利用不同电刺激条件模拟神经电活动 ,研究C2C12细胞 (小鼠骨骼肌成肌细胞系 )内Ca2 + 激活的不同形式及其对nAChR基因表达活性的影响 .电刺激分化 1d的C2C12细胞 ,用共聚焦显微镜记录不同电刺激参数引起的细胞内Ca2 + 信号变化 ,共观察到 3种不同形式的Ca2 + 信号 ,称之为整体Ca2 + 振荡、局部Ca2 + 振荡和局部Ca2 + 振荡诱发的整体Ca2 + 振荡 .在此基础上 ,又构建nAChRγ亚基启动子萤光素酶报告基因质粒并转染C2C12细胞 ,进一步检测不同形式Ca2 + 引起细胞萤光素酶活性的变化 ,测定细胞内PKC活性的改变 .不同Ca2 + 振荡引起细胞内PKC活性升高幅度不同 ;电刺激C2C12细胞可导致nAChRγ基因表达活性降低 ,3种Ca2 + 振荡对nAChRγ基因启动子活性的影响无显著差异 .结果表明 ,电刺激可引起肌细胞产生不同形式Ca2 + 信号 ,但不同形式Ca2 + 信号对nAChRγ启动子活性的抑制无明显差异 ,提示Ca2 + 依赖的PKC途径可能不是nAChR基因表达下调的唯一途径     

骶神经电刺激对脊髓损伤大鼠肠黏膜机械屏障的保护作用

目的：观察骶神经电刺激对脊髓损伤大鼠肠黏膜机械屏障的保护作用。方法：56只Wistar大鼠分7组（n=8）：正常组、急性完全性脊髓损伤（SCI）组和骶神经电刺激组（按24、48、72h各8只）。进行内毒素测定;肠系膜淋巴结、肝脏、脾脏菌培养;肠道形态学观察;紧密连接蛋白zo-1的蛋白表达测定。结果：对照组肠黏膜不同程度损伤;肠道上皮细胞及细胞间连接破坏;内毒素血症和细菌移位明显。实验组肠黏膜得到改善,内毒素水平下降且细菌移位减少。ZO-1蛋白表达无统计学差异。对照组ZO-1的分布出现不同程度的散乱、排列不规则,实验组分布得到改善。结论：骶神经电刺激可促肠蠕动、排肠内容物、减少肠道菌群数量,保护肠黏膜上皮细胞及紧密连接的机械屏障,减少细菌移位和内毒素血症。     

树突状细胞电穿孔法转染条件的优化

目的将带有EGFP的质粒电转入树突状细胞,探讨不同电转条件对树突状细胞的电转率和存活率影响。方法分离人外周血单核细胞加入刺激因子将其诱导为成熟DC,设置不同电转参数将质粒转入树突状细胞,荧光显微镜检测转染效率及细胞存活率。结果电转48小时后,镜下观察在电转条件为300V,20ms时,细胞存活率及表达率最高,结论选择适当的电转参数及细胞浓度,可明显提高转染效率同时降低细胞死亡率。     

PXD101对口腔鳞癌HN-6细胞增殖及凋亡的初步研究

目的:本实验探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂PXD101对口腔鳞癌HN-6细胞的增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:PXD101对口腔鳞癌HN-6细胞进行干预,倒置相差显微镜观察细胞形态学改变;MTT法检测PXD101对HN-6细胞的增殖影响;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪定量检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期。结果:PXD101可明显抑制HN-6细胞的生长(P0.05),呈时间剂量依赖性。倒置相差显微镜下观察对照组细胞贴壁,形态呈多边形,生长活跃;实验组细胞脱壁,变小,细胞核皱缩。绘制细胞生长曲线示,随着PXD101的浓度和作用时间的增加,HN-6细胞生长明显受到抑制,各实验组细胞生长抑制率与对照组比较,P0.05差别有统计学意义。1μmol/LPXD101作用24 h,48 h细胞总凋亡率分别为20.9%、38.6%,与对照组相比有统计学意义(P0.05);HN-6细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比,P0.05差别有统计学意义。结论:PXD101体外实验能显著抑制人口腔舌癌HN-6的细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

神经生长因子对PC12细胞脂多糖损伤的保护作用及其机制

目的：细胞水平研究神经生长因子（NGF）对大鼠嗜铬细胞瘤细胞株（PC12细胞）脂多糖（LPS）损伤后的保护作用以及核转录因子（NF-κB）的活性影响,探讨药物作用机制。方法：PC12细胞常规培养后,建立LPS损伤模型,随后MTT观察不同浓度的LPS对PC12细胞损伤及NGF对LPS损伤的保护作用,同时用倒置显微镜和荧光显微镜下观察细胞状态,最后RT-PCR检测NF-κB的含量。结果：①PC12细胞LPS损伤有浓度梯度,随着LPS浓度的增加,PC12细胞的存活率不断下降;LPS损伤的同时加入不同浓度NGF,LPS损伤均有明显的改善。②显微镜观察显示PC12细胞形态学上的改变,表明NGF对LPS损伤有保护作用。③RT-PCR结果显示,LPS损伤细胞的NF-κB的相对表达量明显高于正常对照细胞,而药物治疗组的NF-κB表达量则接近于正常细胞。结论：目前,神经生长因子在脑内炎症后的细胞修复作用报道甚少,而本实验研究神经生长因子对PC12细胞LPS损伤起到保护作用,尤其是损伤后再修复作用,且其作用机制可能与NF-κB信号通路的调控有关。     

大鼠细小肺动脉平滑肌细胞原代培养和鉴定方法的研究

目的：建立一种重复性好、培养周期短及传代次数多的大鼠细小肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）培养方法。方法：在无菌条件下,分离雄性SD大鼠肺细小动脉,剥离外膜和剔除内皮细胞,经胶原酶I消化,培养PASMCs。0.4%台盼蓝染色测定细胞活力;倒置相差显微镜观察;免疫细胞化学法和免疫荧光染色法,进行平滑肌α-肌动蛋白（α-SMactin）鉴定。结果：形态学观察、免疫细胞化学法及免疫荧光染色法鉴定表明培养细胞为PASMCs;细胞存活率在96.5%以上;原代培养后4～7d即可传代,并且生长特点、细胞形态不易发生改变。结论：采用胶原酶I消化法培养PASMCs,方法简单、酶消化时间易控制、培养周期短、重复性好,培养的原代PASMCs具有数量多和生长迅速的特点。     

高糖诱导腹膜间皮细胞发生上皮问质转化中microRNA的异常变化

目的：定腹膜间皮细胞在高糖引起上皮间质转化（Epithelial—mesenchymnal transition,EMT）过程中microRNA的表达差异。方法：常规培养PMC细胞,利用高糖培养液刺激诱导腹膜间皮细胞发生EMT,倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,实时定量PCR检测EMT标志基因变化,以此确定高糖诱导EMT的发生。利用特异茎环结构的引物合成microRNA的cDNA,实时定量PCR检测重要microRNA的表达变化。结果：高糖培养液培养腹膜间皮细胞48hr后,细胞形态呈梭形改变,同时EMT标记基因E—cadherin表达明显减低（P〈0．01）,Vimentin表达显著升高（P〈0．01）,说明高糖诱导腹膜间皮细胞发生了EMT。利用microRNA特异的茎环结构引物,实时定量PCR检测结果发现高糖刺激后miR-193a的表达明显上调（P〈0．01）;miR-15a和let-7e的表达明显降低（P〈0．01）;miR-16和miR-21的表达无明显变化（P〉0．05）,同时检测发现高糖刺激后miR-193a的表达水平随刺激时间表达升高。结论：异常变化的microRNA可能对高糖诱导的腹膜间皮细胞EMT具有重要调控作用。     

四种显微技术观测大鼠颌下腺细胞与丝素-壳聚糖体外共培养的形态学特点

目的采用倒置显微镜、扫描电镜（scanning electron microscopy,SEM）、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜（（laser scanning confocal microscopy,LSCM））技术对大鼠颌下腺细胞（rat submandibular gland cells,RSMGs）与丝素-壳聚糖（silk fibroin-chitosan,SFCs）的体外复合培养进行形态学观察。为观测、评估种子细胞在三维支架的内部生长情况提供技术支持。方法取0～8 d龄SD大鼠的颌下腺,对大鼠颌下腺细胞进行原代培养、分离纯化并传代;用抗细胞角蛋白单克隆抗体（CK8）及淀粉酶抗体的免疫细胞化学染色鉴定细胞来源。选取传至第二代的对数生长期的RSMGs作为种子细胞,选取SFCs共混膜（5×5×2）mm作为支架材料构建组织工程化涎腺样结构。将种子细胞与支架材料复合培养并分别于倒置显微镜、SEM、荧光显微镜和LSCM下观察二者复合生长情况。结果倒置显微镜可以直接观察活细胞与支架复合生长情况,方法简单易行。SEM可以较精确的展示细胞支架复合生长的表面超微结构。经过荧光染料的着色,荧光显微镜和LSCM都可以观察到支架上锚定的种子细胞。荧光显微镜可见细胞核的荧光信号均匀的分布在支架孔隙内。LSCM通过层扫描及三维重建技术对较厚的标本获取图像;并可以通过旋转图像,从不同角度观察细胞支架复合物的三维剖面或整体结构,得到更为准确的定位信息。结论四种显微技术均可应用于RSMGs与SFCs体外共培养的形态学观测。LSCM的三维重建技术结合荧光染料标记可以较好地获得RSMGs与SFCs复合生长的情况,有着较广泛的应用价值。     

组成型过量表达hTERT对Vero细胞体外培养生物学特性的影响

目的：考察组成型过量表达人端粒酶催化亚单位（hTERT）对Vero细胞在无血清培养体系中的细胞形态、生长和代谢的影响。方法：以组成型过量表达hTERT的Vero细胞系T1为研究对象,以活细胞密度和细胞活力为主要观察指标,结合细胞形态和贴附伸展动态,考察T1细胞和野生型Vero细胞在静止贴附培养、微载体固定化培养和悬浮培养体系中的细胞生长;以葡萄糖比消耗速率（qglc）、乳酸比生成速率（qlac）、乳酸转化率（Ylac/glc）和谷氨酰胺比消耗率（qgin）为反映细胞代谢的主要观察指标,考察T1细胞和野生型Vero细胞在静止贴附培养、微载体固定化培养的细胞代谢。结果：hTERT组成型过量表达在降低Vero细胞的贴附伸展能力和对血清的依赖程度的同时,提高了细胞无血清批次培养后期的细胞活力和活细胞密度,并赋予了T1非贴附依赖性生长的能力。hTERT组成型过量表达未对Vero细胞的代谢产生明显的影响。结论：hTERT组成型过量表达可降低Vero细胞的贴附生长依赖性和对血清的依赖程度,是有应用潜力的改良哺乳动物细胞体外培养性状的技术途径。     

大鼠大脑皮质神经元原代培养不同培养体系及纯化方法的比较研究

目的:比较两种大鼠大脑皮质神经元的培养及纯化方法不同组合的优劣,探讨科学可靠的神经元培养纯化方法。方法:采用DMEM/F12+血清的有血清培养体系和神经基础培养基(Neurobasal)+B27的无血清培养体系培养原代神经元。在接种3天后分别采用加入阿糖胞苷和5-氟脱氧尿嘧啶两种方法进行神经元的纯化。在1天、3天、7天采用形态学及7天时免疫荧光化学法鉴定神经元的纯度及生长状态。结果:1天、3天时,有血清培养体系和无血清体系中的神经元的形态结构和密度无明显差别,在分别加入阿糖胞苷和5-氟脱氧尿嘧啶后,7天时无血清体系中加阿糖胞苷组细胞密度明显低于其他三组细胞密度。通过免疫荧光化学法鉴定可见无血清体系中的神经元纯度明显高于有血清体系。结论:有血清体系的神经元纯度较差,阿糖胞苷和5-氟脱氧尿嘧啶不能显著抑制胶质细胞等杂细胞的生长。无血清培养体系加阿糖胞苷的神经元细胞受损较多,无血清培养体系加5-氟脱氧尿嘧啶纯化培养的大鼠大脑皮质神经元,纯度较高,细胞数量合适,是体外研究神经系统相关理论的良好模型。     

与成纤维细胞共培养的肺泡II型上皮细胞的生物学特性

建立胎鼠肺泡II型上皮细胞(AECII)与肺成纤维细胞(LF)共培养模型,观察与LF共培养下AECII的生物学特性。倒置相差显微镜观察AECII形态和基本生长情况;RT-PCR和流式细胞术分别检测肺泡表面活性蛋白-C(SP-C)、水通道蛋白5(AQP5)mRNA及蛋白质表达;流式细胞术检测细胞周期及Ki67表达。结果显示,与LF共培养时,AECII能较好地保留其细胞形态,SP-CmRNA及其蛋白质表达明显增加,而AQP5mRNA及其蛋白质表达则明显减少;LF促进AECII增殖,使G2/M、S期细胞及表达Ki67 细胞的比率明显增多。结果提示,AECII与LF共培养时,能更好地保留其细胞形态、分化及增殖特性。