外泌体介导的辐射旁效应对心肌成纤维细胞的干预及黄芪甲苷的防护作用

为探讨放射性外泌体介导的辐射旁效应对心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)的影响并观察黄芪甲苷(astragaloside IV,AST)的防护效应,该研究以2 Gy X线辐照大鼠CFs,48 h后超速离心提取放射性外泌体(X-exo),进行外泌体形态、浓度和表面标志蛋白鉴定。将CFs分为对照组(Control)、照射组(X-CFs)、CFs与放射性外泌体共培养组(X-exo+CFs)和黄芪甲苷干预组(X-exo+AST-CFs),采用流式细胞术检测各组细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测纤维化相关分子TGF-β1、Col-I的表达情况。结果显示,X-CFs组和X-exo+CFs组在干预后24 h、48 h处于G₀/G₁期的细胞比例均低于Control组(P<0.01),S期和G₂/M期的细胞比例均高于Control组(P<0.01);X-CFs和X-exo+CFs组细胞迁移率在12 h、24 h、48 h时均显著高于Control组(P<0.05)...     

钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞分化过程中的表达及其钙激活氯通道电生理特性变化*

目的: 研究钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞(CFs)向成肌纤维细胞(MFs)分化过程中的表达规律及其电生理特性,探索ANO1在心肌纤维化进程中的作用。方法: 以刚分离贴壁的大鼠原代CFs及其分化的MFs为研究对象,利用全细胞膜片钳检测钙激活氯通道电流变化,采用免疫荧光标记技术和Western blot检测ANO1、α-SMA和vimentin在CFs和MFs细胞中的表达特征。结果: 刚贴壁培养的CFs钙激活氯通道电流密度远高于MFs;ANO1主要表达于CFs和MFs的细胞核周围及细胞核上,少量表达于细胞膜;ANO1在刚贴壁的CFs中表达较弱,而在有分裂增殖趋向的MFs细胞中表达较为明显。结论: ANO1的表达与MFs的分化过程密切相关,提示其可能参与调节心肌纤维化进程。     

抑制谷氨酰胺代谢减轻血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化

本文旨在探讨心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts, CFs)谷氨酰胺(glutamine, Gln)代谢在高血压所致心肌纤维化中的作用及机制。用微渗透泵给予C57BL/6J小鼠血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ, 1.6 mg/kg per d)诱导心肌纤维化,用免疫组织化学法和Western blot检测心肌组织谷氨酰胺酶1 (glutaminase 1, GLS1)的表达。小鼠腹腔注射GLS1抑制剂BPTES (12.5 mg/kg)以抑制Gln代谢,用Masson染色法观察心肌纤维化程度,用RT-qPCR和Western blot检测心肌组织Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达变化。Sprague-Dawley (SD)大鼠乳鼠CFs在有/无Ang Ⅱ (0.4μmol/L)刺激下接受Gln 4 mmol/L或BPTES (5μmol/L)处理。用划痕实验和CCK-8法分别检测CFs迁移和增殖,用RT-q PCR和Western blot检测CFs中GLS1、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达变化。在Ang Ⅱ和BPTES处理的条件下,给予CFs 2 mmol/L ...     

微小RNA介导心肌纤维化信号通路的研究进展

心肌纤维化以细胞外基质沉积为主要特征,是许多心血管疾病发展到一定阶段的共同病理变化.心肌纤维化过程中的一些微小RNA(microRNAs,miRNAs)表达异常,并通过对多种信号通路的调控,参与心肌成纤维细胞的活化和增殖过程,从而介导心肌纤维化的发生和发展.本文将综述这些miRNAs在心肌纤维化中的作用和机制,为心肌纤...     

高通量测序技术分析急性髓系白血病血浆外泌体微RNA表达谱差异

急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病,目前的诊断方法不利于疾病的早期发现,且诊断结果重复性较差。已有大量研究显示,细胞外microRNA（miRNA或miR）富集在外泌体（exosome）中,且受其表面膜的保护而具有很好的稳定性,是理想的分子标志物。目前,多种实体肿瘤均已检测到肿瘤特异性外泌体miRNA(exosomal miRNA)。然而,在AML患者中未见此外泌体miRNA报道。本研究探讨急性髓系白血病血浆外泌体miRNA表达谱差异及新miRNA序列。采用solexa高通量测序技术对7例AML患者（AML组）及7例健康对照者（对照组）血浆外泌体miRNAs进行测序,利用Mireap预测软件进行新miRNAs分析,通过edger差异分析软件筛选组间差异miRNA,获得211个已知的差异表达miRNAs以及2个新miRNAs,选择4个差异表达的miRNAs：miR-155-5p、miR-335-5p、miR-451a及xxx-m0038 5p（新miRNA）,在两组（各23例）的血浆外泌体样本中,进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证,验证结果与测序结果一致。对差异表达的外泌体miRNA进行靶基因预测及其GO（Gene Ontology）和信号通路富集分析,发现靶基因聚集的生物学功能多数参与生物进展过程的调控。靶基因主要富集在FoxO、MAPK、Hippo信号通路以及HTLV-I感染等。结果显示,AML患者与健康对照者的血浆外泌体miRNA存在着差异性表达。差异性表达的miRNA特异性很高,对进一步阐明AML白血病发生与发展的分子机制、研发新的无创诊断方法、新的诊断标记物和有效治疗AML的方法具有十分重要和深远的意义。     

LncRNA Terc在心肌纤维化过程中的功能研究

摘要 目的：探讨lncRNA端粒酶RNA组分（Terc）在心肌纤维化（MF） 过程中的作用。方法：使用不同浓度的TGF-β1诱导心肌成纤维细胞（CFs）转分化,通过免疫荧光染色、western blot检测α-SMA、Vimentin、Collagen I、Collagen III蛋白的表达水平,qRT-PCR检测lncRNA Terc表达水平。过表达和敲减Terc后,通过western blot、CCK-8和流式细胞术观察模型细胞的胞外基质产生、细胞增殖、凋亡和Smads信号传导情况。皮下注射异丙肾上腺素（ISO）构建小鼠心肌纤维化模型,并使用Terc敲低慢病毒干预,其后多普勒超声仪检测小鼠的心脏射血分数（EF）和左室短轴缩短率（FS）,称量小鼠心脏湿重,HE、Masson染色检测小鼠心脏的病理改变,IHC检测α-SMA、Vimentin蛋白的表达水平,qRT-PCR检测lncRNA Terc表达水平。结果：TGF-β1处理增加CFs的α-SMA、Vimentin、Collagen I、Collagen III的蛋白表达以及Terc水平;过表达Terc促进α-SMA、Vimentin、Collagen I、Collagen III的蛋白表达以及Smad2/3的磷酸化水平,同时还可促进CFs的增殖、抑制CFs的凋亡;敲减Terc则起相反的作用;动物模型中,ISO可抑制EF和FS,增加心脏湿重,加重心肌的病理损伤,而敲减Terc可有效缓解上述过程。结论：LncRNA Terc可通过促进Smads信号传导,加速心肌成纤维细胞转分化和心肌纤维化进展。     

大熊猫脐带间充质干细胞外泌体的分离鉴定及miRNAs富集分析

大熊猫脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)通过旁分泌所释放的外泌体在大熊猫保健与疾病治疗方面具有一定的应用前景。本研究旨在建立大熊猫UC-MSCs外泌体分离方法,开展生物学特征分析和分子鉴定,并研究UC-MSCs外泌体中miRNAs的种类与功能。采用超速离心法从大熊猫UCMSCs培养上清中成功分离外泌体,通过透射电子显微镜进行形态学观察,纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径大小,蛋白免疫印迹法检测特异性分子标记表达。采用Small RNA测序技术对UC-MSCs外泌体中的miRNAs进行鉴定,并对其靶基因进行了预测与功能分析。结果显示,大熊猫UC-MSCs外泌体呈圆形杯托状结构,直径为(79.15±4.81) nm,外泌体标志蛋白CD81与TSG101呈阳性表达而CALNEXIN呈阴性表达。大熊猫UC-MSCs外泌体中的miRNA主要为miR-148-3p (30.28%)与miR-21-5p (21.72%)。本研究首次从大熊猫UC-MSCs培养上清中分离出外泌体,并对其所含的miRNAs进行富集分析及功能预测,为大熊...     

间充质细胞外泌体促进小鼠胰岛内皮细胞血管生成的研究

目的探讨间充质细胞（MSC）外泌体对低氧条件下胰岛内皮细胞（MS-1）血管生成的影响。 方法MSC无血清低氧条件培养48?h,超滤离心法富集条件培养基中的外泌体,采用电镜和Western Blot的方法进行鉴定;通过血管形成试验比较分析不同条件下：常氧培养组（NOR组,21﹪O₂、5﹪CO₂）、低浓度氧培养组（HYP组,2﹪O₂、5﹪CO₂）、外泌体+低浓度氧共培养组（HYP+EXO组,2﹪O₂、5﹪CO₂）,MS-1细胞的血管形成能力;image J软件分析血管形成长度;PCR、Q-PCR检测血管内皮生长因子（VEGF） RNA水平的表达,Western Blot检测VEGF、HIF1α蛋白水平表达以及mTOR信号通路激活情况。采用单因素方差分析和SNK-q检验统计学分析。 结果超滤离心法富集的MSC条件培养基中的外泌体,大小为30 ~ 100 nm,表达CD9,CD63,CD81等外泌体表面标志物;血管形成试验结果显示,低氧促进MS-1血管生成,HYP+EXO组形成明显的血管网状结构;HYP+EXO组血管形成相对长度（2386.0±137.7）像素与NOR组（393.3±174.2）像素和HYP组（1467.0±230.0）像素相比增强,差异有统计学意义（t = 12.30,P?= 0.0065;t = 15.74,P = 0.0040）;PCR结果显示,HYP+EXO组VEGF相对表达量（20.26±9.972）较常氧对照组（1.000）和低氧组（6.521±3.501）均增强,差异有统计学意义（t = 5.462,P = 0.0009;t = 4.238,P = 0.0038）;同时,Western Blot结果显示VEGF蛋白水平表达升高,HIF1-α表达上调,mTOR发生磷酸化。 结论MSC外泌体可促进低氧条件下的小鼠胰岛内皮细胞血管生成。MSC外泌体可能通过上调HIF1-α,调节VEGF表达,激活mTOR信号通路,促进胰岛内皮细胞血管生成。     

肝细胞癌患者血清外泌体microRNA表达鉴定

目的:探讨肝癌细胞外泌体中差异表达的microRNAs(miRNAs)在肝细胞癌(HCC)诊断中的应用价值。方法:通过高通量测序筛选肝癌细胞外泌体中差异表达的miRNAs。实时定量PCR验证差异表达分子;检测差异表达的miRNAs在健康人(Health)、慢性乙型肝炎患者(CHB)、肝硬化患者(LC)及乙型肝炎病毒阳性的肝细胞癌患者(HCC)血清外泌体中的表达。结果:高通量测序筛选到肝癌细胞外泌体中差异表达的miRNA共88种,其中58种表达上调,30种表达下调。选择其中8种差异表达的miRNAs进行q RT-PCR验证,结果显示,此8种miRNAs在细胞上清外泌体、细胞内、癌与癌旁组织中的表达趋势与测序结果一致。miR-221-3p和miR-224-5p在HCC组外泌体中的表达水平显著高于Health组、CHB组和LC组(P0.01),miR-124-3p和let-7a-5p在HCC组外泌体中的表达水平显著低于其他各组(P0.05)。四个组中,miR-21-5p、miR-191-5p、miR-34a-5p和miR-122-5p的表达水平不存在显著性差异(P0.05)。结论:血清外泌体中的miR-221-3p、miR-224-5p、miR-124-3p和let-7a-5p可能成为肝细胞癌的候选标志物。     

法舒地尔对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚的干预作用及其机制

目的：研究法舒地尔对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚的影响及其机制。方法：除正常对照组外,其它SD大鼠均皮下注射异丙肾上腺素（Iso,5 mg/kg）建立心肌肥厚模型。大鼠随机分为4组：正常对照组、Iso模型组、法舒地尔低剂量组（Fas,5 mg/kg,i.p）和法舒地尔高剂量组（Fas,20 mg/kg,i.p）,连续给药8周。给药结束后,血流动力学检测大鼠心率（HR）、左心室收缩压（LVSP）、左心室末舒张压（LVEDP）和左室压力变化最大速率（±dp/dt_max）;分别测定大鼠体重（BW）,心脏重量（HW）,并计算HW/BW;大鼠心肌HE、Masson染色观察组织病理学改变;免疫组化法观察大鼠心肌组织ERK1、ERK2蛋白表达,RT-PCR观察ERK1、ERK2 mRNA的表达。结果：Iso模型组HR和LVEDP明显升高,LVSP和±dp/dt_max明显下降;HW/BW增大;心肌细胞体积变大,排列紊乱,胶原纤维增生;左心室组织ERK1、ERK2蛋白与mRNA表达上调。法舒地尔不同剂量干预后,心脏收缩和舒张能力得到改善,心指数明显下降,心肌细胞体积变小,纤维化减少,ERK1/2 mRNA表达下调,心肌组织损害均得到不同程度改善。结论：ERK1/2信号通路活化参与了异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚,法舒地尔对异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚具有明显改善作用,这可能与法舒地尔阻断ERK1、ERK2通路活化有关。     

外泌体内mircoRNAs在肝癌中的作用北大核心CSCD

外泌体是细胞间重要的信息交流介质,包含多种活性分子,如蛋白质、脂类、DNA和微RNA(microRNA,miRNA)等,外泌体可从供体细胞分泌后直接或间接作用于受体细胞,进而影响细胞之间的生命活动。更有意义的是,外泌体内的miRNAs可在血液中稳定存在,且当肿瘤发生时出现异常表达,进而参与肿瘤的发生发展,影响肿瘤患者生存及预后。近年大量研究报道显示,外泌体内miRNAs可作为肝癌诊断的新生物标志物及治疗肝癌的潜在靶标。本文就近年来外泌体内miRNAs在肝癌中的表达及其临床应用进行综述。     

外泌体内mircoRNAs在肝癌中的作用

外泌体是细胞间重要的信息交流介质,包含多种活性分子,如蛋白质、脂类、DNA和微RNA（microRNA, miRNA）等,外泌体可从供体细胞分泌后直接或间接作用于受体细胞,进而影响细胞之间的生命活动。更有意义的是,外泌体内的miRNAs可在血液中稳定存在,且当肿瘤发生时出现异常表达,进而参与肿瘤的发生发展,影响肿瘤患者生存及预后。近年大量研究报道显示,外泌体内miRNAs可作为肝癌诊断的新生物标志物及治疗肝癌的潜在靶标。本文就近年来外泌体内miRNAs在肝癌中的表达及其临床应用进行综述。     

贝母提取物对异丙肾上腺素致小鼠心肌纤维化的作用

目的：观察贝母提取物（FE）对异丙肾上腺素（Iso）致小鼠心肌纤维化的作用。方法：昆明种小鼠40只,雌雄兼用,随机分为4组（n=10）：对照组、模型组、FE 900 mg/kg、300 mg/kg剂量组,每只i.h Iso1.5 mg/kg （0.3 ml/d）造模,持续14 d;高、低给药组造模同时分别0.9 ml/d,0.4 ml/d灌胃FE,对照组s.c.等量生理盐水,连续30 d。实验结束,测定小鼠心重指数,血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量,HE和Masson染色分析心肌组织病理改变,免疫组化法检测心肌转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达。结果：与对照组相比,模型组SOD活性显著性下降,MDA含量显著升高（P<0.05）;显微镜下,心肌组织间隙变大,炎性细胞浸润,出血坏死细胞增加,TGF-β₁表达明显增加（P<0.05）;与模型组比较,FE组小鼠心重指数明显下降,SOD活性显著提高,MDA含量明显下降（P<0.05）,心肌组织病理学改变缓解,TGF-β₁表达明显下调（P<0.05）,且呈一定剂量依赖性。结论：FE治疗对抗Iso诱导心肌纤维化,其机制可能与清除氧自由基,减轻脂质过氧化损伤及抑制TGF-β1表达有关。     

醛固酮对新生大鼠心肌成纤维细胞分泌ET、NO功能的影响

目的: 探讨醛固酮对新生大鼠心肌成纤维细胞(CFs)分泌内皮素(ET)、一氧化氮(NO)的影响.方法: 采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取CFs,应用放射免疫分析法、硝酸还原酶法分别测定不同条件下培养的CFs培养液中的ET、NO水平.结果: 一定浓度范围内的醛固酮可按剂量依赖方式促进CFs分泌ET,抑制CFs分泌NO,使ET/NO比值上升;螺内酯可阻断醛固酮的上述作用(P<0.01).结论: 醛固酮可能通过影响CFs分泌ET、NO,从而改变生物活性物质网络平衡关系,发挥其促心肌纤维化作用.     

microRNAs在大鼠急性心肌梗死过程的表达变化

目的研究分析microRNAs（miRNAs,miRs）在大鼠急性心肌梗死（acutemyocardialinfarction,AMI）心肌组织的梗死区与非梗死区的表达变化,为防治AMI提供基础数据。方法选择雄性sD大鼠为研究对象,建立结扎左冠状动脉造成的急性心肌梗死模型,取建模后6h的梗死区与非梗死区的心肌组织进行芯片检测．确定其中表达变化显著的miRNAs;最后进行定量逆转录聚合酶链反应（qRT—PCR）,定量分析梗死区与非梗死区心肌组织中miRNAs的表达。结果AMI大鼠心肌组织中,芯片筛选出在AMI前后发生显著波动的miRNAs,与非梗死区相比,梗死区心肌组织中有26个miRNAs表达发生了显著变化,其中19个miRNA表达下调,7个miRNA表达上调。结论在AMI后的心肌组织的梗死部位与非梗死部位miRNAs的表达是有显著差异的,这对AMI阶段心肌保护的救治具有重要意义。     

核因子κB在精氨酸血管升压素诱导大鼠心肌成纤维细胞一氧化氮合成中的作用

本文探讨了精氨酸血管升压素(AVP)刺激下体外培养的大鼠心肌成纤维细胞(CFs)内一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性、诱导型一氧化氮合酶基因表达的变化及其与核因子κB(NF-κB)的关系。用胰酶消化法分离培养Sprague Dawley仔鼠的CFs,分别采用硝酸还原酶法、分光光度法、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫荧光-共聚焦显微镜和蛋白质印迹检测AVP干预下CFs的NO含量、NOS活性、iNOS mRNA表达和NF-κB的活化。结果显示,AVP浓度依赖性(0．001—0．1μmol／L)地增加CFs的NO含量,提高NOS活性,增加iNOS mRNA表达;AVP能够活化NF—κB,使其由细胞浆转位于细胞核;NF-κB特异性抑制剂吡咯啉烷二甲基硫脲(PDTC)能够抑制AVP诱导的CFs NO含量增加、NOS活性提高和iNOS mRNA表达增加。上述结果提示,AVP干预下CFs iNOS mRNA表达增加、NOS活性增高、NO合成增多可能通过NF-κB激活途径,NF-κB激活参与心肌纤维化的发生和发展。     

厄贝沙坦对抗糖尿病大鼠心肌纤维化作用及机制

目的：观察厄贝沙坦对抗糖尿病大鼠心肌纤维化的作用,并分析细胞外调节信号激酶（ERK）通路在其中的作用。方法：健康雄性SD大鼠32只,随机分成两组：正常对照组（CON,n=10）,实验组（n=22）。实验组糖尿病造模成功20只,随机分为2组（n=10）：糖尿病组（DM）、厄贝沙坦+糖尿病组（Ir+DM）。8周后测定空腹血糖（FBG）水平,计算各组大鼠体重（BW）、心体比（H/B）和左室重量指数（LVWI）;Masson染色观察心肌形态及纤维化的发生;ELISA检测心肌组织胶原Ⅰ（colⅠ）、胶原Ⅲ（colⅢ）含量;Western blot检测心肌组织ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达。结果：与CON组相比,DM组大鼠FBG水平、H/B、LVWI显著升高,体重显著减轻,colⅠ、colⅢ含量显著增加,心肌组织p-ERK1/2蛋白表达及p-ERK1/2/ERK1/2比值增加（P<0.05,P<0.01）,ERK1/2无明显变化。Masson染色显示DM组心肌胶原纤维粗大,交织成网状,排列分布不均,沉积增多。与DM组大鼠相比,厄贝沙坦干预后大鼠体重明显增加,H/B、LVWI、心肌组织colⅠ、colⅢ含量明显降低（P<0.05,P<0.01）,p-ERK1/2蛋白表达及p-ERK1/2/ERK1/2比值降低（P<0.01）,且心肌形态改善明显。结论：糖尿病可诱导心肌纤维化的发生,厄贝沙坦可通过抑制ERK的活化减轻糖尿病诱导的心肌纤维化损伤。     

一种大容量细胞灌流液中外泌体的提取方法及鉴定*

目的: 建立一种从大容量细胞灌流液中提取外泌体的方法,并进行外泌体的鉴定。方法: 人脐静脉内皮细胞株(EA.HY926)是人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌细胞株A549杂交成的永生化细胞株,因其具有血管内皮细胞的特性,广泛用于内皮细胞相关研究。本研究采用含10%胎牛血清的M199培养基培养,利用Flexcell STR-4000平行板流室系统对EA.HY926施以振荡剪切应力。收集流体剪切应力处理后的细胞灌流液,去除细胞碎片后冻成干粉,脱盐、提取纯化外泌体。电镜观察外泌体形态、纳米粒径电位分析仪检测外泌体大小、PKH26染色检测外泌体膜性结构、BCA蛋白定量法检测外泌体的蛋白浓度、Western blot检测外泌体特异性蛋白CD9和CD81的表达,荧光定量RT-PCR检测内皮细胞相关基因的表达。结果: 该方法提取的外泌体,大小均一,结构完整,呈典型囊泡样结构;粒径集中在30~150 nm,多数粒径为97.63 nm;表达外泌体特异性蛋白CD9和CD81;PKH26染色阳性,并可被细胞摄取;EA.HY926分泌的外泌体表达内皮细胞相关的CD31、vWF等mRNA,以及miR-126、miR-21、miR-155等microRNA分子。结论: 本方法能够有效从大容量细胞灌流液中提取到结构完整的、高浓度、高质量的外泌体,为开展以流体力学干预细胞为基础的外泌体相关研究提供技术方法。     

精胺对高糖引起的大鼠心肌纤维化的影响及其机制

目的: 观察精胺对糖尿病心肌病(DCM)及高糖处理的心肌成纤维细胞(CFs)的保护作用并探讨其机制。方法: ①动物实验:24 只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(Control),糖尿病组(T1D)和精胺组(T1D+Sp),每组8只。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)复制 1 型糖尿病大鼠模型,精胺组在 STZ 注射前两周每天腹腔注射精胺(Sp,5 mg/(kg·d)),随后隔天注射,饲养至 12 周。检测各组大鼠血糖、胰岛素水平、射血分数(EF)和缩短分数(FS),并对大鼠心脏组织进行 Masson 染色和 Sirius red 染色。②细胞实验:出生1～3 d的大鼠心脏提取原代 CFs,随机分为正常组(Control),高糖组(HG)和精胺组(HG+Sp,每组 n=6)。高糖(HG,40 mmol/L)处理 CFs 复制细胞模型,精胺组在高糖处理前给予Sp(5 μmol/L)预处理30 min。CCK8检测细胞活性,ELISA法检测培养基中胶原含量,Western blot 测定细胞周期相关蛋白(PCNA、CyclinD1 及 P27)的表达。结果: 与 Control 组相比,T1D 大鼠血糖显著上升,胰岛素水平和心脏功能降低;染色结果显示心肌胶原含量增加。同时,HG 组细胞活力与培养基中胶原含量明显增加,PCNA、CyclinD1 表达上调,而 P27 表达下调。精胺能减轻上述变化,表现为改善心脏功能,调节细胞周期蛋白表达和减轻心肌纤维化水平。结论: 精胺可减轻糖尿病心肌病心肌纤维化的发生,其机制可能与调节细胞周期有关。     

miRNA在异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚中的表达及生物信息学分析*

目的:探讨miRNAs(miR199a-5P、miR206、miR133a-3P、miR499-5P)在异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌肥厚模型组中的表达变化;并运用生物信息学方法分析相关的主要信号通路及分子机制。方法:将16只SD雄性大鼠随机分为2组:对照组和ISO模型组,模型组给予ISO(1 mg/kg)诱导心肌肥厚模型,对照组给予等量生理盐水,均采用背部皮下多点注射。连续给药10 d后采用超声心动图测量舒张期室间隔厚度(IVSd)、舒张期左室后壁厚度(LVPWd)、左室舒张末期内径(LVDd)及心脏收缩功能(EF%);称量心脏重量(HW)、大鼠体重(BW),并计算心脏/体重比(HW/BW);心肌组织HE染色,Image J分析软件测量心肌细胞表面积;RT-qPCR检测大鼠心肌组织中4种miRNAs的表达情况。运用Targetscan、miRDB、miRwalk 数据库预测大鼠4种miRNAs可能的靶基因,FunRich软件分析预测靶基因相关的信号通路。结果:与正常组相比,模型组IVSd、LVPWd增厚,LV增大,EF%明显降低;HW、HW/BW增加;模型组心肌细胞体积明显增大,排列紊乱,细胞表面积增加;模型组miR199a-5P、miR206表达上调(P＜0.05);miR133a-3P、miR499-5P表达下调(P＜0.05)。应用生物信息学预测4种miRNAs的靶基因可能参与心肌肥厚相关的信号通路主要有:VEGF/VEGFR信号通路、ErbB受体信号通路等。结论:ISO诱导心肌肥厚导致miRNAs表达的改变,生物信息学预测4种miRNAs参与心肌肥厚相关的靶基因及其主要信号通路,这些研究为心肌肥厚的调控机制及其防治措施提供了新思路。