在猪体内高水平表达人血红蛋白

美国DNX Biotherapeutics Inc.已经报道了利用新设计的表达载体在转基因猪中高水平表达人血红蛋白。 尽管已有几个实验室报道过转基因猪,但基因转移的频率仍然很低。产生一头转基因动物的成本相当高,据DNX估计每头转基因猪将花费5万多美元。因此,用最强的基因表达来建立转基因动物已成为一个经济上的紧迫任务。     

取自转基因猪的血液代用品

美国科学家已生产了一种转基因猪,可望用之减缓对输血用人血的短缺。这种猪可表达人血红蛋白基因,研究者的想法是从猪血中提取人血红蛋白,纯化后以无细胞溶液的形式作为血红细胞代用品的部分使用。用来产生转基因猪的基因构建物含有人β-珠蛋白位置控制区(LCR),两个α1基因和一个β(?)基因。     

转基因猪生产血红蛋白开发

美国新泽西州的DNX公司已成功地采用遗传工程手段育出三头转基因猪,并用这些猪生产出相当量的人血红蛋白。     

转基因动物在输血医学中的应用

转基因动物技术是在动物整体水平研究和表达目的基因的生物技术,其基本特点是：分子及细胞水平操作,组织及整体水平表达,是常规分子生物学理论和技术的拓展和延伸,也是现代生物高技术研究和开发的热点之一。本简述了转基因动物在输血医学领域的应用及其发展前景,包括利用转基因动物生物反应器制备人血浆蛋白和人血红蛋白、建立血传播病毒的感染模型和血液相关遗传模型以及转基因动物与输血医学的基础研究等。     

血红蛋白的化学修饰与血液代用品

血液代用品系指具有携氧扩容功效的溶液,包括：氟碳化合物、脂质体包封血红蛋白（hemoglobin,Hb)、微囊化血红蛋白和无细胞基质血红蛋白（化学修饰Ｈb、基因重组Ｈb、化学合成Ｈb和转基因动物人Ｈb）。通过化学修饰稳定血红蛋白结构以避免其肾毒性,并延长循环半寿期是利用无基质血红蛋白制备血液代用品的主要研究内容,通常采用交联、聚合、偶联等方法完成。     

广州地区三种小型猪血液生理生化指标的比较

目的比较广州地区西藏小型猪、五指山小型猪和巴马小型猪血液生理生化指标的差异。方法全自动血液细胞和生化分析仪测定24个血液生理生化指标。结果 24个指标中,血红蛋白、白细胞、单核细胞、血细胞比容、葡萄糖指标的测定差异显著;淋巴细胞、中性粒细胞、平均红细胞容积、平均红细胞血红蛋白、血清总蛋白、血清清蛋白、血尿素氮、血肌酐指标的测定差异极显著。其中血红蛋白、血细胞比容、平均红细胞容积、平均红细胞血红蛋白、血清总蛋白、血清清蛋白、血尿素氮、血肌酐指标以西藏小型猪最高,白细胞、淋巴细胞指标以五指山小型猪最高,而中性粒细胞、单核细胞、葡萄糖指标以巴马小型猪最高。结论三种小型猪血液生理生化指标的比较,为建立小型猪生物学特性数据库提供了理论依据。     

文摘

00 0 0 2 3聚乙二醇大分子化猪血红蛋白对其携氧特性的影响 [中 ]/洪民… //生物工程学报 .- 2 0 0 0 ,16 (1).- 2 2～ 2 6用ＰＥＧ共轭结合猪血红蛋白 (ｐＨｂ)以增大总分子量是延长它的血液循环系统中存留时间的有效方法。作为一种线性的亲水大分子 ,ＰＥＧ对ｐＨｂ的共轭会对它的携氧特性产生显著影响。研究了 ｐＨｂ处于不同空间构象 (脱氧的Ｔ构象或氧合的Ｒ构象 )、ＰＥＧ修饰程度的高低、修饰用ＰＥＧ的分子量的大小、有无别构效应调节剂等不同条件下ＰＥＧ修饰对 ｐＨｂ携氧能力的影响。进而又用了ＰＥＧ修饰已经用双 (3,5-二溴水杨…     

医药其它

931310资白工程:作为血液代用品的改良血红蛋白〔英〕/Jessen,T.H.…1 Angew.Chem.Int.Ed。Engl一2902,31(7)。一545~549[译自DBA,1992,11(21),92一11833〕 在大肠杆菌、酿酒酵母及转基因的小鼠和猪中完成了全功能人血红蛋白的表达。这些重组的血红蛋白在未修饰的情况下不能作为血液代用品,因为在缺乏2,8一二确酸甘油酸时该蛋白具太高的氧亲和性,并分裂为二聚体。上述向题已通过蛋白工程解决了。通过甘氨酸残基将2个a链中的1个的C一末端与另一个相连接,这个C一末端的3一维结构与其它a蛋白链的N一末端相近。该融合子不能使血红蛋白的亲…     

人工血液的开发

科学家们重新设计了使血液变红的色素,用于制造人工血液,以减少因输血而感染HIV的风险。利用蛋白质工程,科学家们重新设计出血红蛋白,并移植到大肠杆菌中,以产生血液代用品。预计全球人工血液的市场为万亿英磅。在最近出版的《自然》杂志中,在Cambridge Laboratory工作的Colorado子公司Somatogen的Dr Kiyoshi Nagai描述了如何用蛋白质工程设计血红蛋白的结构,以解决用血红蛋白作血液代用品的二个问题。虽然利用遗传工程方法能够很容易地用细菌制备血红蛋白,但血红蛋白与氧结合的太紧密,不能     

转基因动物的市场

美国技术管理小组的一份市场调查报告预言,转基因动物的应用将由1990年的小鼠单一品系发展到2000年的广泛应用范围.预计转基因技术将对猪和牛的种畜产生重要的影响,它们能够产生人治疗用蛋白,该技术也将确定可供研究的动物范围. 该报告认为,到2000年转基因动物的销售额将超过12亿美元,其中主要包括转基因猪.牛的育种机构也将发展转基因技术,并且由此能对农业产生重要的影响,如品种的改良及成本的降低.因猪仔的体积较大,预期转基因猪的市场将比牛的市场发展更为迅速.对那些非常有价值的转基因动物的鉴定可以促进生长,增加高乳奶、瘦肉、低胆固醇蛋的生产,提高     

猪CD151转基因PK-15细胞系构建及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒的易感性

[目的]建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)易感的猪CD151转基因PK-15细胞系,研究CD151分子在PRRSV感染猪源细胞中的作用.[方法]用RT-PCR从猪肺泡巨噬细胞中扩增CD151全长cDNA,测序正确后克隆人真核表达载体pcDNA3;用重组载体pcDNA-CD151转染PK-15细胞,经G418抗性筛选获得转基因细胞系PK15-CD151,用RT-PCR和免疫荧光试验检测CD151表达;用VR-2332株PRRSV分别感染PK-15细胞、PK15-CD151细胞、MARC-145细胞和3D4-CD163细胞,定期观察细胞病变,用RT-PCR和免疫荧光试验检测病毒RNA基因组和病毒抗原,用半数组织细胞感染剂量测定病毒滴度.[结果]从猪巨噬细胞中克隆得序列正确的猪CD151 cDNA;从重组载体转染的PK-15细胞培养中筛选得G418抗性细胞克隆,并能正确表达猪CD151分子;在PRRSV感染后,PK15-CD151细胞虽然不表现明显的细胞病变,但能检测到病毒RNA基因组和病毒抗原,并能产生较高滴度的感染性病毒;该细胞系已在体外传30代以上,第10、20、30代细胞的PRRSV滴度无明显变化.[结论]猪CD151基因转染能使非易感PK-15细胞获得对PRRSV的易感性,提示猪CD151参与PRRSV感染猪源细胞.     

英国开发用于异体移植的rDNA猪

Imutran Ltd.(Cambrtdge,U.K)所作的用作人体器官供体的转基因猪的开发性研究,可使猪的脏器移植进入如治疗癌症和自身免疫性疾病等不同领域。 与DNX Corp.(Princeton,NJ)及其它在此领域工作的生物技术公司相同,Imutran相信,猪器官植入人体是否成功的关键是制止超急性排斥,或者说阻止宿主免疫系统对供体器官的迅速攻击,因为攻击的结果将导致器官在短时间(几分钟)内大量坏死。一旦消除了这种危险,Imutran确信用常规免疫抑制药物可以避免免疫系统对新器官的后续攻击。 人的免疫可分为3部分:细胞免疫和体液免疫,其中包括抗体和T细胞,第三种为补体免疫,以在起     

豆血红蛋白基因lba的克隆及其转化衣藻叶绿体

降低细胞内的氧气含量是提高莱茵衣藻产氢效率的重要手段之一。本研究首次尝试将豆血红蛋白基因lba转入衣藻叶绿体中表达,利用豆血红蛋白具有与氧可逆结合的特性,期望降低转基因衣藻细胞内的氧气含量,达到提高衣藻产氢效率的目的。实验结果证明,lba成功转入到衣藻叶绿体中,且对其生长没有产生显著影响,这为下一步调控Lba在衣藻叶绿体中表达活性和提高衣藻产氢效率奠定了实验基础。     

人载脂蛋白A1基因转基因小鼠的建立

目的建立系统性表达人载脂蛋白A1(APOA1)基因的转基因小鼠。方法 将人APOA1基因插入系统性表达启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立人APOA1转基因C57BL/6J小鼠。并利用特异引物PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot检测基因表达水平,血生化分析检测不同月龄转基因小鼠与同龄野生型小鼠的血脂指标。结果建立了2个不同表达水平的人APOA1基因的转基因小鼠品系;转入的人APOA1基因在血液、肝脏、心脏、肾脏、脾脏、血管组织中均有明显表达;血生化分析结果显示不同月龄转基因小鼠的血浆高密度脂蛋白胆固醇水平高于同龄的野生型小鼠,甘油三酯水平低于同龄野生型小鼠。结论成功建立了系统性表达人APOA1基因的转基因小鼠,为研究高血脂以及高血脂相关的心血管病提供了工具。     

血红蛋白中含铁分的验证实验

1材料用具鸡（或猪）血液、10％盐酸、亚铁氰化钾（黄血盐）溶液、坩埚、酒精灯（或电炉）、试管（2支）。2实验方法和步骤到一支洁净的试管,加入鸡（或猪）血液约Zml和10％盐酸Zml,振荡试管使之混合均匀,倒入柑锅内加热至水分蒸干。待干燥冷却后,取于燥粉末适量加人另一支洁净试管,再滴加3～5滴亚铁氰化钾溶液,振荡试管进行观察。3实验结果当加人亚铁氰化钾K。［Fe（CN）。］溶液后,血液一盐酸干燥混合物生成了蓝色物质K「Fe（CN）。Fel,说明血红蛋白中含有铁分。其原理是：血液中红细胞主要成分血红蛋白是Fe'"的氧合物,若向…     

用山羊生产tPA

美国Tufts大学和Geozyme Transgenics Corporation的研究人员成功地诱导人组织血纤维蛋白溶酶原激活因子(tPA)在3只转基因山羊乳腺中发生早期表达。这是首次在家畜乳汁中产生tPA,并提供适宜今后成功地生产转基因药物的动物体。 在试验中,诱导8只转基因雌山羊(第一代转基因雄山羊交配产生的后代)在出生后第11～12个月时泌乳(比正常状态早1～7个月)。通过注射一系列雌激素和黄体酮完成上述过程。产生的乳汁含有浓度与初始转基因雌性动物相似(1～3mg/ml)的人长效组织血纤维蛋白溶酶原激活因子(LAtPA)。对第一     

利用转基因猪的心脏

在法国尼斯召开的第七届欧洲生物技术研讨会上,Imutran Ltd宣布他们已成功地对其转基因猪的心脏进行了离体测试。开发这种心脏是为了向异种移植物移植术提供一种安全的移植物,利用猪的心脏工程可以避免人的免疫防御系统对移植物的过急性排斥。 补体级联系统的引发物,一种被称作C3b的转换酶可以通过存在于每个细胞表面的调控因子阻止自身组织被攻击。将这些调控因子中的一种,被称为衰变加速因子或DAF的编码DNA微注射并脂转染2443个猪卵细胞。其中有2%成功再生,产生60头携带(在每个细胞上)人DAF的转基因猪。     

聚乙二醇大分子化猪血红蛋白对其携氧特性的影响

用PEG共轭结合猪血红蛋白(pHb)以增大总分子量是延长它在血液循环系统中存留时间的有效方法。作为一种线性的亲水大分子,PEG对pHb的共轭会对它的携氧特性产生显著影响。研究了pHb处于不同空间构象(脱氧的T构象或氧合的R构象)、PEG修饰程度的高低、修饰用PEG的分子量的大小、有无别构效应调节剂等不同条件下PEG修饰对pHb携氧能力的影响。进而又用了PEG修饰已经用双(3,5-二溴水杨酸)延胡索酸酯(DBBF)分子内交联的pHb,考察修饰对这种内交联pHb携氧功能的影响。还比较了4种不同方法活化的PEG衍生物,对pHb修饰效率、对修饰产物携氧功能的影响及修饰产物稳定性等。本文认为,DBBF分子内交联的pHb,在有别构效应调节剂的存在下,再用PEG修饰,可以获得携氧能力好、分子量适宜、四聚体稳定的修饰产物。     

转Fat-1基因猪的制备和整合检测

为了在转基因猪肌肉中高效率表达Fat-1基因,且进一步得到富含ω-3 PUFAs猪品系建立技术基础。将化学合成的人源化Fat-1基因克隆到表达载体上,构建能够在猪细胞中高效表达的质粒构件p MSTN-ω3,使用胚胎原核显微注射方法制备转h Fat-1基因猪。试验对16头供体母猪超数排卵,人工授精配种后手术法冲取320枚1~2细胞期猪胚胎。原核显微注射法向胚胎导入线性化质粒p MSTN-ω3,302枚1~2细胞期胚胎显微注射后移植10头受体母猪,5头母猪妊娠,生产26头仔猪。PCR法检测得到4头转h Fat-1基因阳性猪,Southern印迹杂交分析验证1头猪整合有h Fat-1基因,1头猪近似整合h Fat-1基因。有1头h Fat-1基因整合猪可用于转基因猪育种,表达构件p MSTN-ω3能够用于生产转Fat-1基因猪。试验成功采用显微注射法制备转h Fat-1基因猪,改进、规范了胚胎原核显微注射法制备转基因猪的试验操作程序。     

新发现的珠蛋白——细胞珠蛋白或组织珠蛋白

在动物中 ,血液蛋白质血红蛋白及其对应物肌红蛋白运输并贮存供养生命的氧 .长期以来 ,研究者认为血红蛋白与肌红蛋白这两种复杂的蛋白质有其独特的折叠方式 ,是脊椎动物中仅有的两种珠蛋白 .而其他的珠蛋白则见于非脊椎动物、植物、细菌与真菌中 .两年前 ,在人脑中发现了第三种脊椎动物珠蛋白 ,称为神经珠蛋白 .现在 ,科学家又偶然发现了第四种珠蛋白 ,其存在于所有体内组织中 .由于在血液和肌肉中 ,血红蛋白与肌红蛋白这两种珠蛋白浓度颇高 ,故对他们的研究也颇为深入 .包装有血红蛋白的血细胞的作用就象一个分子运输队 ,它们在肺中摄取氧…