杜仲叶片和叶柄愈伤组织的诱导和植株再生

本实验以5~6年生杜仲叶片及叶柄为外植体,研究了杜仲愈伤组织诱导及植株再生的方法。结果表明:接种于补加NAA(2.0~4.0 mg/L)或BA(1.0 mg/L)+NAA(2.0~4.0mg/L)的MS培养基上的叶片和叶柄,经21~28d培养后,脱分化形成绿色或浅绿色致密愈伤组织,频率达到70%以上。绿色致密愈伤组织在补加BA(2.25~2.75 mg/L)+NAA(0.15 mg/L)的MS培养基上经过1~2次继代之后,即出现茎芽分化,频率在15%以上,只是其中许多都是畸形苗,正常苗频率较低。此问题尚在研究之中。选择生长健壮的再生植株,切除其基部愈伤组织,然后将切口浸泡在250mg/L无菌ABT生根粉溶液中3~5sec,再插入1/4强度无激素MS培养基中, 2~3周后,在苗基部长出1~3条白色粗壮的不定根,生根频率在60%以上。     

何首乌愈伤组织的诱导

研究了外植体、光暗条件、植物激素等因子对何首乌愈伤组织诱导的影响 ,以及 6 -BA和何首乌组织提取液对愈伤组织增殖的影响。结果表明 :茎段的愈伤组织诱导优于带侧芽茎段和叶片 ;光照有利于愈伤组织的诱导 ;4因子 4水平的正交实验表明 ,对何首乌茎段愈伤组织诱导的影响 2 ,4 -D >6 -BA >IBA >IAA ,最佳激素搭配是 :MS +2 ,4 -D 2mg L +6 -BA 1mg L +IBA1mg L或MS +2 ,4 -D 2mg L +6 -BA 2mg L +IAA 1mg L ;MS培养基中附加 6 -BA或组织提取液均促进愈伤组织的增殖。     

大果良种沙棘愈伤组织诱导及植株再生的研究

大果良种沙棘的幼嫩茎尖,茎段外植体接种在MS,1／2MS附加不同浓度配比的IAA,IBA,BA,NAA培养基上可诱导茎尖及腋芽生长,将诱导产生的无性系芽接种在MS或1／2MS附加BA0．3－0．5mg/L,NAA0．05mg/L的培养基上可形成丛生芽,同时在小叶片和嫩茎上诱导产生愈伤组织,继续培养愈伤组织表面形成大量的绿色突起,进一步分化成不定芽,在相同培养基上,不定芽上可直接产生不定芽,从而形成多达数百个的不定芽族,不定芽长至3cm时切下转至1／2MS附加IAA或IBA 0．2mg/L的培养基上可生根而形成完整 的再生植株。     

曼陀罗茎段愈伤组织诱导和再生植株的研究

本试验以曼陀罗茎段为外植体,在附加不同植物激素组合的培养基中对愈伤组织的诱导和植株再生进行研究。结果表明:采用修改的MS培养基(除去甘氨酸,维生素B1含量增加至0.5mg/L,pH5.5)附加2mg/L2,4-D可由曼陀罗茎段诱导大量胚性愈伤组织;愈伤组织继代选用0.5mg/L2,4-D为宜;不定芽的诱导采用MS培养基(20g蔗糖,8g琼脂,0.1g水解干酪素) 6-BA(0.5mg/L);幼苗进一步转接至1/2MS IBA(0.2mg/L)生根培养基中,可完成曼陀罗茎段愈伤组织诱导和再生植株的组织培养过程。     

冬凌草组织培养及其愈伤组织诱导研究

实验采用L9（34）正交试验方法优化冬凌草组织培养快繁培养基,筛选冬凌草增殖、生根和愈伤组织诱导的最佳培养基配方。结果表明：不定芽诱导的最适培养基为MS＋0.2 mg/L IBA＋0.1 mg/L6-BA＋0.2 mg/L NAA;生根培养基为1/2 MS＋1 mg/L IBA＋1 g/L活性炭;以冬凌草茎段为外植体诱导愈伤最佳培养基为MS＋1.5 mg/L6-BA＋2 mg/L2,4-D。     

火龙果愈伤组织诱导与植株再生

为了建立火龙果愈伤组织诱导与植株再生体系,以火龙果茎段、幼苗和子叶为外植体进行离体培养试验。结果表明：茎段诱导愈伤组织的最优培养基为1／2MS＋2,4-D2．0mg·L^-1＋6-BAO．5mg·L^-1,诱导子叶愈伤组织的最适培养基是1／2MS＋2,4-D2．0mg·L^-1＋6-BA1．0mg·L^-1,诱导愈伤组织分化的最优培养基为1／2MS＋6-BA4．0mg·L^-1＋NAA0．5mg·L^-1,最佳生根培养基为1／2MS＋6．BA1mg·L^-1＋NAA0-3mg·L^-1。     

箭叶秋葵愈伤组织诱导及增殖培养的激素组合筛选

箭叶秋葵[ Abelmoschus sagittifolius(Kurz.) Merr.]又名红花马宁、铜皮、五指山参、小红芙蓉、岩酸,系锦葵科(Malvaceae)秋葵属(Abelmoschus Medic.)多年生亚灌木状草本;其根既可食用又可入药,具有滋养强壮之功效,可用于治疗神经衰弱、头晕、腰腿痛、胃痛及腹泻等[1].     

秦艽体细胞愈伤组织诱导及继代研究

本文报道了秦艽取叶、幼苗为外植体诱导愈伤组织试验。结果表明,取幼苗６７－Ⅴ培养基,２４－Ｄ２５ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ,诱导频率最优,可高达１００％。继代培养,以６７％培养基,ＮＡＡ０５ｍｇ／Ｌ,２４－Ｄ（１－１５）ｍｇ／Ｌ最优     

蝴蝶兰愈伤组织诱导研究

对蝴蝶兰愈伤组织诱导试验结果表明,授粉后30d的蝴蝶兰子房适宜诱导愈伤组织,在1/4MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA 0.1mg/L+蔗糖3.0%培养基上,蝴蝶兰子房切段愈伤组织的诱导率达到90.0%。     

黄皮愈伤组织诱导及其对不同激素的响应

通过对黄皮不同外植体进行离体培养 ,初步获得了愈伤组织。结果表明 :腋芽、花芽容易诱导绿色愈伤组织 ,且愈伤组织较细密。叶柄的愈伤组织诱导率很低 ,时间长 ,生长缓慢。愈伤组织的增殖继代培养的初步研究表明 :花芽愈伤组织在继代培养基上形成白色、较松散的愈伤组织 ,质地较差 ;而腋芽及叶柄产生的愈伤组织生长极缓慢 ,难以继代。     

杜仲愈伤组织中次生代谢产物积累动态研究

以杜仲愈伤组织为材料,研究了不同接种量及培养时间、不同来源的愈伤组织及其继代次数对愈伤组织生长和次生代谢产物含量的影响。结果表明,愈伤组织继代培养时接种量在0．35g左右比较合适。愈伤组织的生长曲线大致呈S形,在20d时达到最大值,而总黄酮和绿原酸的含量均在16d时达到最大值。在继代培养中,茎和叶愈伤组织的增长量、绿原酸和总黄酮含量均在第三代达到最大值;下胚轴诱导的愈伤组织的增长量、绿原酸和总黄酮含量均在第四代达到最大值;子叶愈伤组织的增长量和总黄酮含量在第五代达到最大值,绿原酸含量于第四代达到最大值。不同来源的愈伤组织中,叶愈伤组织中绿原酸含最最高,下胚轴愈伤组织中总黄酮含量最高。     

培养基及培养条件对杜仲愈伤组织生长及次生代谢产物含量的影响

以MS、LS、B5、N6、H、Nitsch、White、1／2MS为基本培养基,分别添加0．5mg／L NAA和0．5mg／L BA,分析不同类型培养基对杜仲愈伤组织生长及次生代谢产物含量的影响,并以B5培养基进行光照条件、碳源、蔗糖浓度试验。结果表明：B5培养基不仅有利于愈伤组织生长,也有利于总黄酮的形成,而1／2MS培养基有利于绿原酸的积累;12h／d光照对愈伤组织的生长及绿原酸和总黄酮的合成有明显的促进作用,黑暗不影响愈伤组织的生长,但却抑制绿原酸和总黄酮的形成;3种碳源中,愈伤组织的增长量、绿原酸和总黄酮的含量均以蔗糖为碳源时最高,葡萄糖最低;蔗糖浓度在10～50g／L范围内绿原酸的含量随着糖浓度的升高而升高,40g／L时愈伤组织的增长量和总黄酮的含量最高。     

杜仲细胞悬浮培养生产桃叶珊瑚甙的研究

对杜仲细胞悬浮培养及其次生代谢产物桃叶珊瑚甙的产生进行了研究,考察了各种理化因子对细胞生长及桃叶珊瑚甙产生的影响。结果表明,在悬浮培养生产桃叶珊瑚甙中,第18天桃叶珊瑚甙的含量达到最大值,培养基为MS、pH为5.8时有利于桃叶珊瑚甙的合成,此时含量高达40.56mg/L。2.0mg/L的2,4-D、NAA及浓度低于1.0mg/L的6-BA均能促使桃叶珊瑚甙的合成,但KT却抑制桃叶珊瑚甙的合成。     

杜仲叶中总黄酮物质超声提取的研究

采用醇提法、超声提取法探讨了从杜仲叶中提取总黄酮类物质的最佳工艺。试验结果表明：通过单因素试验和正交试验,超声提取效果最好。其最佳条件是：用浓度为400%、按料液比1：60的比例的乙醇浸泡24h,再用超声提取45min,其杜仲叶中总黄酮类物质的提出率可达25．43％。     

杜仲细胞悬浮培养产黄酮及其动力学研究

本文应用正交设计对杜仲细胞悬浮培养的基本培养基和植物生长物质浓度进行了筛选,并对影响杜仲细胞悬浮培养和总黄酮含量的不同因素进行了考察。结果表明,B5培养基+0.5mg/L NAA+0.6mg/L 6-BA、蔗糖30g/L、初始pH 5.0-5.5、接种量20g(FW)/L以及摇床转速110r/min为杜仲细胞悬浮培养的适宜条件。通过对杜仲悬浮细胞生长和代谢动力学的分析表明：杜仲细胞悬浮培养生长符合Logistic生长模型,最大比生长速率( m)为0.417d-1;细胞基于蔗糖的真正比生长得率(YG)与维持系数(m)分别为0.619g/g和0.0206g/(g·d-1);黄酮合成属部分生长耦联型,可用Luedeking-Piret模型进行描述。研究结果为杜仲细胞大规模悬浮培养生产天然活性成分奠定了基础。     

酶法提取杜仲叶中绿原酸工艺研究

采用纤维素酶法提取杜仲叶中的主要药效成分———苯丙素类的绿原酸(CHA),通过单因素试验、正交试验和方差分析确定了纤维素酶法提取杜仲叶中绿原酸的最佳操作条件。结果表明,加入550 U/g纤维素酶0.50%,pH 4.5,温度40℃,提取率最高可达到51.84 mg/g。     

杜仲含胶细胞形态特征的研究

利用离析、石蜡制片以及电镜扫描等方法对杜仲含胶细胞的形态特征进行研究,结果表明,大多数的含胶细胞是一种细长的、两端略膨大的,丝状的分泌单细胞、少数含胶细胞在表面形成突起,并能进一步伸长,形有盲端或分枝。     

杜仲内生菌的分离及产PDG菌株的筛选

从树龄达7a以上杜仲皮中分离得到122株内生菌,其中真菌75株,细菌47株,经摇瓶培养后分析各菌株产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的能力,结果发现有8株菌能产生PDG,最高产量可达13.387 mg/L。经初步鉴定,这8株菌分属于5属,即茎点菌属(Phloma)、腐霉属(Pythium)、卵形孢霉属(Oospora)、球黑粉霉属(Tolypospori-um)、砖红镰孢霉属(Lateritium)。     

杜仲种质资源的现状及保护对策

在野外调查的基础上,根据杜仲的分布特点,划分了7个主要分布区,并对种内存在的形态差异进行了描述。在评述杜仲种质资源现状的基础上,对种质资源的破坏以及造成遗传流失的原因进行了分析。提出了有效保护杜仲种质资源的原理和方法,并强调了迁地保护的重要性。     

栽培方式对杜仲皮次生代谢物含量的影响

采用叶林和乔林两种栽培模式对杜仲定向培育,并分别对杜仲皮次生代谢物含量进行了测定.结果表明:在不同的栽培模式下,杜仲皮中次生代谢物的含量存在差异,杜仲醇和杜仲胶的含量,乔林皮高于叶林皮;京尼平甙酸、绿原酸、桃叶珊瑚甙的含量则是叶林皮高于乔林皮;总黄酮的含量随提取溶剂的不同而有高有低.对杜仲皮进行不同的预处理和选用不同的提取溶剂,能改变提取得率,但是,叶林皮与乔林皮次生代谢物含量变化趋势基本不变,说明栽培方式对杜仲皮次生代谢物有一定影响.