控制蟾蜍舌肌运动神经元的视顶盖神经元的分布和形态

本实验把辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）注射到蟾蜍舌下神经核背内侧核（ｄｏｒｓｏｍｅｄｉａｌｎ．ＸＩＩ,ＤＭＮ）和视顶盖（ＯＴ）,利用逆行和顺行标记技术,研究了控制舌肌运动神经元活动的视顶盖神经元的分布和形态。结果表明,视顶盖神经元直接控制舌肌运动神经元,它们主要分布在视顶盖的腹外侧部。这些神经元在形态上可分为三大类：梨形神经元、锥形神经元和神经节神经元,与Ｇｏｌｇｉ浸染法描述的两栖类视顶盖细胞类型相似。这表明视顶盖虽有功能分区,但很难在细胞形态与其生理性质之间建立联系。     

基于荧光染料Cy5.5标记的引物延伸法鉴定细菌RNA剪切加工位点

【背景】传统引物延伸法常与放射性标记结合使用,但由于放射性元素半衰期短、危害人体健康及严格的操作要求等限制了其在一般实验室的广泛使用。因此,开发新型非放射性引物延伸法成为当前研究的热点。【目的】建立非放射性的引物延伸法,并利用该方法实现对细菌RNA剪切加工位点的鉴定。【方法】将包含RNA剪切位点的序列克隆至双荧光报告系统,然后利用荧光染料Cy5.5标记的特异性靶向mcherry寡核苷酸引物进行延伸,并辅以Northern blotting、RT-qPCR等技术,确定RNA剪切加工的精确位点。【结果】鉴定了来自解纤维梭菌cip-cel mRNA中的2个剪切加工位点均位于颈环结构下游的单链区域,且在剪切位点附近未发现保守序列。【结论】基于Cy5.5标记的引物延伸法能够精确鉴定RNA剪切加工位点,且与传统的放射性引物延伸法相比,该方法具有更高的安全性和更快的检测速度,能够满足一般实验室的实验要求。     

人源性神经营养素-6对大鼠面运动神经元逆行溃变的保护作用

目的:探讨人源性神经营养素-6对受损伤神经元的保护作用,为全面了解人源性NT-6的神经生物学特性以及为临床上退行性神经病变的治疗提供实验依据.方法:将健康成年SD大鼠随机分为两组,即不做任何处理的正常对照组和切断一侧面神经后引起面运动神经元逆行溃变的实验组;实验组又根据面肌内注射物的不同分为空白对照组、人源性NT-6实验组和生理盐水对照组.动物饲养两周后,取脑干切片,行尼氏染色和胆碱乙酰基转移酶免疫组化染色,观察人源性NT-6对逆行溃变的面运动神经元的保护作用.结果:与空白对照组和生理盐水对照组相比,NT-6实验组面神经核尼氏染色的强度值和面神经核内ChAT阳性神经元数目显著增加.结论:人源性NT-6对由于轴突损伤引起逆行溃变的神经元具有保护作用.     

一种微管-荧光融合蛋白嵌合标记斑马鱼运动神经元系统的建立

运动神经元是一类支配运动行为的重要神经元。传统的荧光蛋白标记的转基因斑马鱼品系(用于活体成像分析运动神经元形态发生)存在胞体密集、突触交错、不好区分单个神经元等不足。为了优化活体成像分析运动神经元,本研究旨在建立一种微管-荧光融合蛋白嵌合标记斑马鱼运动神经元系统。首先通过Gateway克隆技术将运动神经元表达基因mnx1启动子序列与绿色荧光蛋白-α-Tubulin融合蛋白序列构建到含有Tol2转座位点的表达载体中,然后将该质粒和Tol2 mRNA同时注射到4～8细胞期斑马鱼受精卵中,在72 hpf (hours post fertilization)进行共聚焦显微成像分析。结果显示,该系统中绿色荧光融合蛋白在3种类型运动神经元中表达,从而实现单个运动神经元嵌合标记。本研究进一步探索注射剂量与嵌合标记神经元数量以及分布频率的关系,并确定了重组蛋白的合适剂量(15 ng)。此外,本研究在该模型上验证了insm1a和kif15表达下调导致的运动神经元异常发育。这些结果表明我们成功建立了一种微管-荧光融合蛋白嵌合标记斑马鱼运动神经元系统,为探究运动神经元的发育和形态发生提供了一个直观和快速的模...     

凝胶上测定糖蛋白的荧光标记法

凝胶上测定糖蛋白及含糖酶是研究它们的性质和纯度的一种有效的方法。文献中报告的方法,有的不够灵敏,有的则非常麻烦。我们约在20年以前合成了一种荧光酰肼:dansyl glycyl hydrazide(DNS-Gly-NHNH_2),用以     

成体对虾的荧光标记研究

采用平均体长为9cm的日本对虾(Penaeus japonicus)为试验动物,用蓝色、红色和绿色荧光染料(Visible Implant Elastomer,VIE)荧光标记对虾.结果表明,用VIE标记后的3个试验组的日本对虾与对照组的日本对虾在生长发育等方面没有差异,试验组和对照组在对应的周存活率基本一致,各组对虾蜕皮正常.尽管荧光标记的残留率随着日龄的增加有所下降,但荧光标记的保持率为100%.3种颜色中的红色荧光标记效果最好,蓝色最差.     

免标记荧光适体传感器的研究进展

核酸适体在治疗、诊断和生物传感等领域都引起了强烈的关注和广泛的应用。与传统的识别元素-- 抗体相比较,适体展现 出很多的优点：尺寸小,化学性质稳定,容易制备和修饰。更重要的是适体在生物传感的设计上更为灵活,因此,产生了很多高选 择性、高灵敏度的新型适体传感器。目前,很多的检测手段都被应用到适体传感器中,其中荧光的检测手段占有重要的地位。虽然 荧光适体传感器已经取得了重大的进展,但是荧光标记给传感器的设计带来很多的不便,因此,免标记的荧光适体传感器备受关 注。在本文中,我们将对免标记的荧光适体传感器的研究进展进行综述,为分析工作者发展更加灵敏、更加简单、更加应用广泛的 免标记荧光适体传感器提供依据。     

幼体中国对虾荧光标记虾的制作

采用经过暂养,平均体长为2 cm以上的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)进行试验,用黄色、红色和绿色荧光染料(visible implant elastomer,VIE)制作荧光标记对虾.结果表明,对照组中国对虾与用VIE标记后7个试验组中国对虾在生长发育等方面没有差异,并且各组对虾蜕皮正常.尽管荧光标记的残留率随着虾体的生长有所下降以及分布的不均匀,但荧光标记的保持率为95%.3种颜色的荧光染料中,红色荧光标记的效果最好.     

小刺猴头菌多糖的荧光标记及其稳定性

通过体外和小鼠体内试验,验证荧光标记的小刺猴头菌多糖的稳定性和生物体内代谢途径。结果表明:标记后的小刺猴头菌多糖体外稳定性在24 h内良好,小鼠体内代谢途径主要通过消化系统代谢,并在8 h内基本代谢完毕,这一结果为荧光标记真菌多糖的药理活性提供了依据。     

实时荧光定量PCR 技术的原理及其应用研究进展

自从1983年Mullis发明聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)以来,PCR技术很快成为科研、临床诊断的热点技术。但是传统PCR技术在应用中一是不能准确定量,二是容易交叉污染,产生假阳性。直到近年来荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术     

胶孢炭疽菌细胞骨架荧光标记菌株的构建

胶孢炭疽菌寄主广泛,能够引起众多植物产生炭疽病害.细胞骨架的结构及重排、极性分布都对菌丝生长、形态发生及致病性有着非常重要的作用,但是目前关于其菌丝生长及致病过程中细胞内骨架分布及动态变化情况还知之甚少.为了构建胶孢炭疽菌微丝及微管骨架的荧光标记菌株,采用随机重组及同源重组原理,成功构建了Lifeact-EGFP、MB...     

Alexa Fluor荧光标记在细胞学和分子生物学研究中的应用

Alexa Fluor染料为罗丹明或香豆素的衍生物,是一种含有活性基团的有机荧光染料,具有激发光谱窄、发射光谱宽、量子产率高、光稳定性好,以及受温度、p H影响小等优点。近年来,Alexa Fluor染料作为荧光探针在细胞学和分子生物学研究领域取得了广泛应用,但对Alexa Fluor染料进行系统阐述的文章很少。因此,在综述Alexa Fluor染料的基本特征和优缺点的基础上,阐述其在细胞学和分子生物学研究中的应用,并对其应用和发展方向进行展望。     

猫胸髓中单胺能神经末梢和呼吸运动神经元的突触联系

本文报道了猫胸髓中单胺能神经末梢与呼、吸运动神经元的联系。用逆行荧光染料或HRP 处理肋间神经的呼支或吸支,标记胸髓呼、吸运动神经元。4只猫用逆行荧光染料 PI和单胺荧光组化结合,看到胸髓中下行的5-HT 能和 NA 能神经末梢与呼、吸运动神经元胞体、树突紧密地接触。2只猫用 HRP 和电镜结合,观察到被 HRP 标记的呼、吸运动神经元(主要是树突)上有大量突触分布。在这些突触的突触前终扣内,除大量透亮囊泡外,还有一些颗粒囊泡。这些结果表明:猫胸髓中下行的单胺能末梢与呼、吸运动神经元存在突触联系。它暗示,猫肋间呼、吸运动神经元的活动,可能接受单胺能神经递质的调节。     

显示纤毛虫细胞微管骨架的两种荧光标记方法

应用直接荧光标记和免疫荧光标记显微术显示了几种原生动物纤毛虫(如尾草履虫、大尾柱虫、阔口游仆虫)的细胞微管骨架,并据结果提出了用所述方法制备标本时需注意的几个方面:对游仆虫,可以忽略某些步骤;对大尾柱虫各种药品的浓度以及处理时间以较小为宜。     

低分子肝素的绿色荧光蛋白荧光标记及其活性检测

增强型绿色荧光蛋白（EGFP）是生物领域常用的标记物. 本实验首先利用高碘酸法活化低分子肝素（LMWH）,与EGFP连接得到LMWH EGFP.然后用Sephacryl S-200 HR对其进行初步分离,再用Sephadex G-10 HR进行脱盐纯化. 采用Sephacryl S 200 HR检测LMWH EGFP的纯度,为单一对称峰. 经检测,LMWH-EGFP具有良好的热稳定性和耐碱性. 通过荧光分光检测器检测LMWH-EGFP的λEx为488 nm,λEm为509 nm. 通过抗凝实验发现LMWH EGFP仍具有抗凝活性. 本实验建立了LWMH荧光标记的方法,为多糖的荧光标记提供了新的选择.     

中国对虾荧光标记虾的大规模制作与养殖试验

以平均体长为2 cm以上的10 632只中国对虾(Fenneropenaeus chinensis),用红色荧光染料(visible implant elastomer,VIE)制作荧光标记对虾,与10万只非标记的中国对虾在同一池塘养殖。结果表明,VIE标记对虾和非标记对虾经2-3个月的养殖后,在生长发育和成活率等方面没有差异。尽管荧光标记的残留率随着虾体的生长有所下降以及分布的不均匀,但荧光标记的保持率为70%以上。红色VIE标记可以用于中国对虾的海洋增殖放流研究。     

不同结构类型糖类物质的荧光标记策略

为阐明糖链结构与功能的关系,寻找高灵敏度和高分离度的微量分析方法对糖 类物质的分析至关重要.近几年来,荧光标记方法作为糖类物质的色谱定量及辅助结 构分析的最佳选择,日益受到人们的广泛关注.荧光标记法分为柱前标记和柱后标记 两种,且灵敏度高、分离度好、有多种标记试剂可供选择.本文根据不同糖类物质的 结构特点,分别对中性糖和氨基糖以及含有唾液酸、糖醛酸、硫酸基的酸性糖的荧光 标记方法及其应用进行了系统的综述,并对近年来报道的荧光标记试剂的特点和反应 机理进行了比较和总结,以期为糖类物质微量分析方法的研究提供参考.     

寡糖的荧光标记高效液相色谱分析

 利用氨化还原的方法把高量子产率的荧光标记物——α-萘胺,接到异麦芽糖寡糖的还原端。用硅胶薄层色谱、荧光光谱及快原子轰击质谱证实反应物的完全性及其结构。高效液相色谱用Micropak si5硅胶柱,以乙腈-水(含0.05％三乙胺)为梯度洗脱液可使含有二到九个糖残基的异麦芽糖寡糖的α-萘胺衍生物全部分离。本法对异麦芽糖二糖的荧光检测灵敏测度为2.35Pmol。     

荧光标记糖电泳在新琼寡糖定性和定量分析中的应用

目的:建立荧光辅助糖电泳(FACE)对系列新琼寡糖进行定性、定量分析的方法。方法:将系列新琼寡糖用7-氨基-1,3-萘胺二磺酸钾(AGA)氨化还原衍生后,在浓度梯度为18%-25%的聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离,于波长264nm直接检测寡糖衍生物,得到聚合度为4-14的新琼寡糖衍生物电泳分析图谱。结果:寡糖衍生物的相对电迁移率与其分子量的负三分之二次方成线性关系;运用图像分析软件对电泳图谱进行数字化转换,发现寡糖衍生物的灰度积分面积与样品浓度呈线形关系。结论:建立了快速、精确的新琼寡糖微量定性、定量分析的方法,为新琼寡糖的质量分析提供了技术支撑。