不同海拔牦牛骨骼肌中乳酸脱氢酶三种亚基基因表达的比较

为了阐明高原低氧对牦牛（Bos mutus）骨骼肌中乳酸脱氢酶（LDH）三种亚基基因（LDHA、LDHB和LDHC）表达的影响,本实验分别选取高海拔（4 200 m）、中海拔（3 200 m）和低海拔（1 900 m）三个海拔位置养殖的临床健康成年雄性牦牛各5头,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测牦牛骨骼肌中LDH三种亚基基因的m RNA表达和蛋白表达水平。结果表明,随海拔的升高,牦牛骨骼肌中LDHA m RNA的表达逐渐下降;LDHB m RNA先降低后升高,在高海拔组牦牛中表达最高,相对表达量为2.82±0.12,与低海拔组（1.01±0.07）、中海拔组（0.73±0.06）牦牛LDHB mRNA表达量差异显著（P <0.05）;LDHC mRNA的表达量随海拔的升高呈下降趋势,且低海拔组（1.10±0.16）、中海拔组（0.86±0.16）、高海拔组（0.69±0.12）组间两两相比均差异显著（P <0.05）。LDHA和LDHC蛋白表达量随海拔的升高呈下降趋势,且LDHA蛋白表达量在低海拔组（1.00±0.00）、中海拔组（0.88±0.0...     

麦洼牦牛乳酸脱氢酶-B基因多态性的PCR-RFLP分析

为了从分子水平上检测麦洼牦牛Bos grunniens乳酸脱氢酶-1(LDH1)的H亚基编码基因Ldhb的多态性,实验提取79头麦洼牦牛基因组DNA,采用PCR-RFLP技术分析Ldhb基因多态性,并测定牦牛背最长肌中肌红蛋白含量。实验建立的牦牛Ldhb的G896A突变位点的PCR-RFLP检测方法,在79头麦洼牦牛中检测到Ldhb-AA和Ldhb-AG两种基因型,其中AG基因型频率为16.46%,并且这些样品的乳酸脱氢酶-1的电泳迁移率快于Ldhb-AA样品。本实验未检测到Ldhb-GG基因型;麦洼牦牛Ldhb基因多态性与背最长肌中的肌红蛋白含量之间未见相关性。     

牦牛MDHII基因多态性与其生长性状关联性

本研究旨在探究牦牛(Bos grunniens)MDHII基因遗传多态性,寻找其SNPs位点,为选育优良牦牛品种提供参考依据.首先就5个牦牛类群(类乌齐牦牛,麦洼牦牛,斯布牦牛,帕里牦牛和申扎牦牛)随机选取共178头耳样,然后提取DNA并构建DNA池,Mega 5.2筛查SNPs位点,直接测序法鉴定其基因型,最后用SP...     

甘南牦牛(Bos grunniens)FBXO32基因突变及其与胴体和肉质性状关联分析

为了分析甘南牦牛(Bos grunniens)肌肉萎缩盒蛋白32(F-box protein 32,FBXO32)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点,以及基因型与胴体和肉质性状间的相关性,本研究以593头甘南牦牛为研究对象,采用混池测序和竞争性等位基因特异性PCR(kompetitive allele specific PCR, KASP)技术,检测了甘南牦牛FBXO32基因突变位点及基因型,分析了基因型与甘南牦牛胴体及肉质性状的相关性。结果表明,从甘南牦牛FBXO32基因检测到7个SNP位点,分别是位于5′UTR区的SNP1(g.267A>C)、外显子1区的SNP2(g.326G>T)、外显子8区的SNP3(g.31231G>C),以及3′UTR区的SNP4(g.31352G>A)、 SNP5(g.31424C>T)、 SNP6(g.31503A>C)和SNP7(g.31504A>G)。其中,SNP1、 SNP4、 SNP5、 SNP6与肌肉嫩度显著相关(P<0.05), ...     

贺兰山牦牛冬春季的生境选择

在2009年12月－2010年1月和2010年4－5月,采用样线法结合直接观察法对贺兰山牦牛的冬春季生境选择进行了研究。结果表明,牦牛冬季对11种生境因子有选择性,偏爱山地针叶林带,海拔小于2 000 m,优势乔木为灰榆,坡度小于10,下坡位,距水源距离大于1 200 m,人为干扰距离2 000－4 000 m,隐蔽级大于70 %;春季牦牛对13种利用生境生态因子有选择性,偏爱于亚高山灌丛和草甸带,海拔大于3 000 m,乔木密度小于1株,乔木高度小于3 m,乔木距离大于3 m,灌木密度大于4 0株,灌木距离小于1 m,植被盖度大于7 0 %,上坡位,距水源的距离小于8 00 m,人为干扰距离大于4 000 m,隐蔽级大于7 0 %。冬春季牦牛在海拔、植被类型、地形特征、优势乔木、灌木种类、坡位、坡向、人为干扰距离、距水源距离上存在显著差异。主成分分析表明冬季第一主成分的贡献率21.100 %,其中绝对值较大的相关系数是乔木距离、优势乔木、乔木高度和乔木密度;春季第一主成分的贡献率是31.247 %,其中绝对值较大的相关系数是植被类型、海拔高度、地形特征和灌木密度。与其他分布地区的牦牛相比,贺兰山地区的牦牛能适应当地的地理特征和气候环境。     

保加利亚乳杆菌ATCC11842 L-乳酸脱氢酶同工酶基因的克隆与表达分析

通过对保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)L-乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase, L-LDH)同工酶基因的异源表达、酶活测定和摇瓶发酵研究L-LDH在乳酸合成中的作用。将保加利亚乳杆菌ATCC11842中L-乳酸脱氢酶基因ldb0120和ldb0094分别克隆至载体pET28a(+)中,构建重组表达载体pET28aldb0120和pET28aldb0094,并转化到大肠埃希菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中进行表达。进一步对重组蛋白进行Ni-NTA柱亲和层析和酶学活性测定,结果显示,LDB0120和LDB0094的比活力分别为0和25 U/mg,表明LDB0094是具有低活性的L-乳酸脱氢酶,而LDB0120不具有活性。对两株重组菌分别进行好氧和微好氧发酵,重组菌E.coli BL21/pET28aldb0094在好氧和微好氧条件可以合成L-乳酸,浓度分别为41.9和227.9 mg/L,而菌株E.coli BL21/pET28aldb0120在两种培养条件下均基本不合...     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因的克隆表达及表达产物免疫原性的鉴定

目的：克隆表达恶性疟原虫（Hasmodium falciparum,p．f）海南株（FCC1／HN）乳酸脱氢酶（LDH）,并对其免疫原性进行鉴定．为制备抗LDH抗体用于胶体金法快速检测疟原虫奠定基础。方法：应用PCR技术对恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHpf）基因进行特异性扩增,将扩增产物克隆入表达载体pET-32a（＋）,重组表达载体经鉴定后诱导表达;重组LDHpf（rLDHpf）经纯化后,免疫家兔制备兔抗rLDHpf免疫血清,间接免疫荧光和Western印迹鉴定表达产物的免疫原性。结果：构建了pET-32a／LDHpf重组表达载体,测序后同源性分析显示p．f不同株间LDH氨基酸序列同源性大于98％,不同种间同源性也在90％以上;间接免疫荧光和Western印迹分析显示rLDHpf具有较好的免疫原性。结论：LDHpf基因高度保守;rLDHpf得到高效表达并具有良好的免疫原性。     

细菌乳酸脱氢酶的纯化及其性质研究

从乳酸杆菌发酵液经过两次柱层析,可以得到纯度较高的乳酸脱氢酶,酶的比活力高达６７８．９ｕ／ｍｇ,纯度提高８５．７倍。酶的热稳定性好,ｐＨ稳定范围较宽,在临床上可用于雨氨酸氨基较移酶活力的测定。     

高原人红细胞乳酸脱氢酶同工酶的研究

人在高原,其组织在较低的氧分压下为了高效率地利用氧,必将会动员体内各种适应机制。红细胞增加使机体载氧能力加强就是其中之一。过去研究报道表明,在高山低氧和急性低氧条件下,人或动物体内乳酸脱氢酶(LDH)同工酶活性均有不同程度增高,关于高原低氧适应中红细胞LDH同工酶变化的研究,国内外报道尚少。本研究主要了解高原人红细胞LDH同工酶的变化。     

新疆北鲵乳酸脱氢酶同工酶的研究

应用聚丙烯酰胺凝胶盘电泳技术,对珍稀动物新疆北鲵(RanodonsibiricusKessler)十二种组织的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行了研究。通过对同工酶谱带OD值及相对活力的分析,得出三点结论。     

不明原因男性不育人群中睾丸特异性乳酸脱氢酶基因突变的发现及其意义

为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)基因突变在男性不育发病中的作用,利用LDH-C4特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4进行活性显色,用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4活性低下的患者进行LDHC基因PCR产物的突变筛查,对DHPLC峰形异常的PCR产物进行序列测定.筛选到一组精子LDH-C4活性明显下降的患者,其中1名患者的LDHC基因PCR产物在DHPLC中呈异常洗脱峰.对这一PCR产物进行序列测定,发现患者LDHC基因第5外显子的115位碱基发生了T→A的杂合改变(GenBank登录号GU479375),该突变使LDHC基因的178位密码子由原来的TTG(编码亮氨酸)变为TAG(终止密码子),形成截短的C亚基.T克隆-测序进一步证实了该无义突变的杂合状态.这是在人类LDHC基因上发现的第一个突变,提示LDHC基因突变可能是男性不育发病的原因之一.     

东方田鼠乳酸脱氢酶同工酶的研究

目的研究乳酸脱氢同工酶在3种东方田鼠不同器官的分布.方法以大鼠和小鼠作对照,用聚丙烯酰胺凝胶电泳对3个不同地区的东方田鼠(Microtusfortis)血清、红细胞、肝脏、肾脏、肺中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行分析.结果东方田鼠血浆中只有LDH5,血清中湖南洞庭湖地区、宁夏青铜峡地区的东方田鼠也只有LDH5,而东北地区的东方田鼠则含有LDH1和LDH5,3个地区的东方田鼠肾脏和肺中都有5种LDH同工酶,肝脏中除东北地区的东方田鼠含5种LDH同工酶外,其余两种东方田鼠均以LDH5为主(LDH5占95%以上).结论东北地区东方田鼠乳酸脱氢酶同工酶谱与其他两地的东方田鼠不相同.     

树qu组织乳酸脱氢酶同工酶的研究

对云南树qu（Tupaia beiangeri）心肌、肺、颌下腺、肾脏、肾上腺、骨骼肌和大脑8种组织乳酸脱氢酶（LDH）同工酶进行琼脂糖凝胶电泳分析。结果表明，8种组织均呈现为LDH-M型和LDH-H型两种亚基组合而成的5种不同分子形式同工酶。采用分光光度比色定量法测得5种同工酶组分的相对酶活性。对其H亚基和M亚基百分率以及H/M亚基比率进行了统计分析。并就不同酶谱特征与基因表达状况进行了分析讨论。     

天祝白牦牛胚胎移植实验研究

选用健康成年天祝母白牦牛(Poephagus grunniens)(供体)10头、黑牦牛(受体)37头进行实验. 供体牛(组1)用CIDR-B+FSH＋PG进行同期发情和超数排卵; 受体牛(组2和组3)分别采用CIDR-B+PG和单次注射PG法进行同期发情. 结果表明, 平均黄体数、卵泡数、可移植胚胎数和退化胚胎数分别为4.75±2.19, 1.13±0.83, 2.50±1.31和1.38±0.92. 在3组中, 组1的同期发情率最高, 为80%, 组2和3分别为60%和45.5%. 处理后不同组别的发情开始时间不同, 组1的大部分白牦牛在处理结束后的25~75 h发情, 而组2和3的受体黑牦牛分别在73~96和49~72 h发情. 平均胚胎回收率55.6%. 共收集18枚可用胚胎, 将其中12枚移植到10头同期发情的受体牦牛, 最终妊娠率50%, 分娩率40%.     

牛蛙乳酸脱氢酶同工酶的分离纯化及其性质研究

牛蛙心脏中乳酸脱氢酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示3种同工酶区带,分别命名为LDH1、LDH2、LDH3,其中LDH1的活力占绝对优势.采用HiTrap^TM Blue HP 亲和层析和DEAE-Sephadex A离子交换层析对牛蛙骨骼肌中的LDH3进行了分离纯化.纯化的LDH3比活力为295 U/mg,Km NADH=0.028,Km丙酮酸=1.242,在SDS-PAGE上显示两条带,提示该同工酶是由两种亚基组成的,亚基的分子量分别为35.3 kD和37.6 kD.     

冬眠和非冬眠期喜马拉雅旱獭乳酸脱氢酶同工酶的初步研究

本文用聚丙烯酰胺凝胶盘电泳和紫外光谱法对冬眠期和非冬眠期喜马拉雅旱獭(Marmota himalayana)心、肾、肝脏及骨骼肌的乳酸脱氢酶同工酶带谱分布及其酶活力进行了测定。结果表明:(1)不同组织的酶谱有明显不同,且有多亚带和多态现象。(2)冬眠期各组织的总酶活力高于非冬眠期。     

嗜热菌的耐热L-乳酸脱氢酶的研究

从广东各地的热温泉(55—95℃)水样中,分离到200余株最适生长温度高于70℃的极端嗜热菌。其中一株编号为HG25,具有耐热胞内L-乳酸脱氢酶(L—Lactate dehydrogenase EC．1．1．1．27．,简称LDH),有栖热菌属(Thermus)的特征,革兰氏阴性,无芽孢,好氧,不运动,产黄色素,最适生长温度为65—75℃,最高生长温度为85℃,最低为40℃,不水解淀粉,不从葡萄糖产酸,DNA的G+c百分含量为65mol％,L-乳酸脱氢酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素生层析作了初步提纯,比活提高7倍,LDH还原丙酮酸反血的最运温度为6 0℃,最适PH为8 0,酶在70℃稳定,保温10分钟后,仍保留85％的原始酶活力。失活半寿期(t1/2)为85℃10分钟。     

树鼩组织乳酸脱氢酶同工酶的研究

对云南树鼩(Tupaia belangeri chinensis)心肌、肺、颌下腺、脾脏、肾脏、肾上腺、骨骼肌和大脑8种组织乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行琼脂糖凝胶电泳分析。结果表明,8种组织均呈现为LDH-M型和LDH-H型两种亚基组合而成的5种不同分子形式同工酶。采用分光光度比色定量法测得5种同工酶组分的相对酶活性。对其H亚基和M亚基百分率以及H/M亚基比率进行了统计分析。并就不同酶谱特征与基因表达状况进行了分析讨论。