长江鲟幼鱼的听觉阈值研究

试验采用室内噪声控制的方式模拟野外自然噪声环境,以长江鲟(Acipenser dabryanus Dumeril)幼鱼为实验对象,使用TDT听觉测试系统,在100—500 Hz的刺激频率下,通过听性脑干反应(Auditory Evoked Potential, AEP法)测定其听力阈值。结果显示,长江鲟的最敏感频率为300 Hz,声压为(133±0.5) dB,听力曲线呈“V”型,听觉阈值随着频率的不同而发生变化。总体看,长江鲟听觉阈值较高,听力较弱,不能听到500 Hz以上的声音,其中,长江鲟的听觉阈值与湖鲟和匙吻鲟等鲟鱼类基本相似,但比长江中常见的淡水鱼类的听觉阈值高、听频范围窄。研究结果将为长江鲟的野外放归和种群重建提供重要基础资料,为评价涉渔工程建设运行对长江鱼类的影响提供基础数据支撑。     

长江鲟子三代繁育技术研究

经过长达20余年的人工保种,长江鲟Acipenser dabryanus子三代苗种在2018年首次成功获得。运用B超鉴定性腺发育期技术,从6～8龄子二代长江鲟亲鱼群体中挑选出成熟雌雄亲鱼各6尾,雄鱼平均体质量(17.02±4.97) kg,雌鱼平均体质量(20.57±3.23) kg,在水温19.0～20.0℃下,实施人工催产,成功催产雄鱼5尾,雌鱼2尾,获卵约9万粒,平均卵径(2.65±0.19) mm,受精率87.53%,孵化率76.14%,共孵出子三代长江鲟仔鱼约6万尾,获开口期仔鱼约3万尾;子三代长江鲟初孵仔鱼体长(0.91±0.06) cm,体质量(0.021±0.003) g。仔鱼体质量呈指数增长,增长方程式为W=0.108 1e~(0.333 2)~t(R~2=0.931 8,n=105,P0.01);体长呈直线增长,增长方程式为L=1.087 8t-1.746 2(R~2=0.986 1,n=105,P0.05);体质量与体长之间相关关系为W=0.040 6L~(2.308 9)(R~2=0.991 1,n=105,P0.01)。长江鲟子三代苗种生长性能与子一代和子二代的差异无统计学意义。长江鲟子三代繁育成功是长江鲟迁地保护的重大突破,预示着长江鲟可持续人工群体建设和人工保种成功,将为今后长江鲟自然种群复壮及未来的养护利用奠定基础。     

蛋白激酶C_ζ对小鼠受精卵发育早期基因组转录活化的影响

为研究蛋白激酶Cζ (proteinkinaseCζ ,PKCζ)在小鼠受精卵细胞早期发育过程中对胚胎基因组活化影响 ,采用免疫印迹和细胞免疫荧光的方法 ,观察PKCζ的抑制剂对小鼠受精卵 1 细胞期G1和G2 不同时期小鼠受精卵基因组活化的影响 .小鼠 1 细胞期受精卵蛋白激酶C (PKC)的活性不断增加 ,并在G2 期达到最高 .PKC的抑制剂calphostinC可以明显抑制PKC的活性达 4 7% .同时calphostinC对受精卵 1 细胞期基因组的早期活化具有显著的抑制作用 (P <0 0 1) .在小鼠 1 细胞期受精卵的G2 期 ,具有活性的磷酸化PKCζ的含量明显多于G1期和卵母细胞MⅡ期 ,分别比它们高2 7%和 110 % .PKCζ的特异性抑制剂可以抑制受精卵 1 细胞期基因的转录和活化 (P <0 0 5 ) .实验结果表明 ,PKCζ参与了小鼠受精卵基因组早期转录的调控     

长江鲟org基因的克隆和表达分析

为了研究卵子发生相关基因org基因在长江鲟(Acipenser dabryanus)卵子发生过程的作用, 克隆得到长江鲟org基因(命名为Adorg)的全长cDNA序列, 该序列为1031 bp, 编码233个氨基酸。氨基酸序列比对分析发现, 长江鲟AdOrg与斑马鱼(Danio rerio)ZOrg蛋白序列的一致性最高, 为49.5 %。荧光定量PCR研究发现, 长江鲟Adorg mRNA特异地表达于性腺, 其在卵巢大量表达, 在精巢微量表达, 而在其他组织(肝、肠、脾、肾、心、肌肉、鳃、垂体和下丘脑)均未检测到其表达; 胚胎发育过程的动态表达分析表明, Adorg为母源表达, 在原肠胚之前均具有较高的表达水平, 随后其表达量急剧下降; 进一步研究其在卵子发生的表达模式, 发现Adorg基因在未分化性腺中的表达量极低, 随着卵母细胞的生长发育, 其mRNA表达水平急剧上升, 且维持在非常高的水平, 在Ⅱ期卵巢中的表达量最高。性腺切片RNA原位杂交实验结果表明, Adorg特异地在生殖细胞表达; 在卵巢中, Adorg在卵原细胞的信号较弱, 但在初级卵母细胞中, 其信号急剧增强且分布在卵母细胞的胞质, 且随着初级卵母细胞的生长发育, 其信号也逐渐增强; 在精巢中, 发现Adorg mRNA在A型和B型精原细胞中表达, 而在初级和次级精母细胞中未发现阳性信号。上述结果表明, Adorg基因可能在长江鲟性别分化和卵子发生过程中都起重要作用, 有待通过基因敲降或敲除技术来进一步阐明其功能。     

PKC对小鼠受精卵发育的调控作用

为研究 TPA及 PKC的反义寡核苷酸对 1 -细胞期鼠受精卵发育的影响 ,采用免疫细胞化学法标记 PKC(α及 β亚型 ) ,并用激光扫描共聚焦显微镜测定卵内 PKC荧光强度 ;同时利用显微注射法注射 PKC的反义寡核苷酸 ,观察其对受精卵分裂的影响 . 1 0 0 μg/ L TPA对 1 -细胞期受精卵的发育具有完全抑制作用 .TPA处理 1 2 h后 ,对照组受精卵停留在 1 -细胞期 ,而未经 TPA处理的1 -细胞期卵可以分裂到 2 -细胞期 .共焦激光显示实验组与对照组相比 ,PKC(α、β亚型 )荧光强度均有下降 (P<0 .0 1 ) .显微注射 PKC antisenseα及 antisenseβ的受精卵 ,分别只有 1 4 .2 %和 3.33%的卵可以发育到 2 -细胞期 .与对照组 (注射 M2培养液 )差异显著 (P<0 .0 1 ) .结果表明 ,(1 ) TPA长期处理 1 -细胞期受精卵 ,抑制 1 -细胞期卵分裂到 2 -细胞期 ;(2 ) PKC的反义寡核苷酸 (α及β亚型 )可以抑制小鼠 1 -细胞期卵的发育     

被刺戳与未被刺戳未受精蛙卵离心的差别

1.黑斑蛙和蟾蜍的受精卵与未受精卵在用×1500g 左右离心后,在形态上也像豹蛙的一样有区别。受精卵都形成绉褶脂类物质层而大部分的未受精卵则形成光滑的类脂物质层。2.用清洁玻璃针刺戳黑斑蛙末受精卵加×1500g 离心,所得的离心卵也像受精卵一样形成四层,并且具有绉褶的脂类物质层。3.我们根据已有的资料将蛙精子在受精时的作用分为三种,第一是使卵还原为双倍体,第二是刺激作用(Stimulus)和第三是调节作用(Regulation)。受精卵在离心后形成绉褶脂类物质层的现象是精子的刺激作用所造成的。用玻璃针刺戳也可引起这种现象。     

中华绒螯蟹受精卵、流产卵氨基酸及脂肪酸组成的比较研究

采用气相色谱仪和氨基酸分析仪测定中华绒螯蟹不同种群 (太湖种群和温州种群 )受精卵和温州种群流产卵脂肪酸及氨基酸的组成。结果表明 ,中华绒螯蟹太湖种群受精卵、温州种群受精卵和温州种群流产卵在必需氨基酸和半必需氨基酸的含量上无显著差异 ,而谷氨酸 (Glu)、胱氨酸 (Cys)和丝氨酸 (Ser)三种非必需氨基酸的含量差异显著。太湖种群受精卵、温州种群受精卵及温州种群流产卵的脂肪酸种类分别为 16、13和 14种。饱和脂肪酸(SFA)占脂肪酸总量的 18 96 %— 2 3 0 9% ,单烯酸 (MUFA)占 5 1 76 %— 6 2 6 5 % ,多不饱和脂肪酸 (PUFA)占14 2 7%— 2 8 96 % ,其中最主要的脂肪酸为C16∶0、C16∶1和C18∶1。除C2 0∶1外 ,其他脂肪酸含量在三者之间都有显著差异。太湖种群受精卵的C18∶2、C18∶3显著高于温州种群受精卵 ,而温州种群流产卵的DHA要显著高于太湖种群受精卵。温州种群受精卵和流产卵在C16以下的脂肪酸 ,其含量均无显著差异。此外 ,本文还讨论了脂肪酸及氨基酸含量与流产的关系及脂肪酸组成对出苗率的影响。     

受精卵注射CRISPR/Cas9系统制备基因编辑子午岭黑山羊技术体系的建立

受精卵注射CRISPR/Cas9系统是制备基因编辑动物的有效方法,其中受精卵收集效率、显微注射胚胎存活率及胚胎移植受体妊娠率是关键影响因素.以子午岭黑山羊为研究对象探讨了情期内不同时间点放置CIDR对超数排卵的影响;分析了胚胎供体和受体发情停止时间差异对胚胎移植妊娠率的影响;设计了3个打靶肌肉生长抑制素基因(MSTN)的小向导RNA(sgRNA),并优化了CRISPR/Cas9系统显微注射参数.结果表明,胚胎供体发情停止后第4天放置阴道栓可有效提高黄体数(15.25±3.69)和受精卵数量(13.875±4.015);利用微量注射泵将Cas9mRNA(60 ng/μL)和打靶MSTN基因的sgRNAs(60 ng/μL)混合液注射到受精卵胞质内,注射参数Pi,Ti和Pc分别为300,0.5和60,注射24 h后胚胎分裂率为76.79%.胚胎移植时受体发情结束时间晚于供体发情结束时间12~16 h妊娠率最高(38.46%).本研究共得到19个存活的个体,经TA克隆测序分析,所有个体MSTN打靶位点上均发现碱基的插入或缺失.综上,本研究以子午岭黑山羊为例,建立了受精卵注射CRISPR/Cas9系统制备基因编辑山羊的技术体系,为利用CRISPR/Cas9技术进行山羊的遗传改造奠定了技术基础.     

Effect of total dissolved gas supersaturation on the survival of common carp (Cyprinus carpio) and silver carp (Hypophthalmichthys molitrix)

Flood discharge results in total dissolved gas (TDG) supersaturation downstream of a dam during the flood period. Fish suffer death from gas bubble disease (GBD) caused by TDG supersaturation. Nonetheless, current studies mainly attach importance to the survival of benthic fish affected by TDG supersaturation in the Yangtze River in China. Few studies have attempted to investigate the survival of pelagic fish influenced by TDG supersaturated water and compare the tolerance characteristics to TDG supersaturation between benthic and pelagic fish. To identify the survival of fish species that inhabit the various water layers affected by TDG supersaturation, silver carp (Hypophthalmichthys molitrix) (pelagic fish) and common carp (Cyprinus carpio) (benthic fish) were chosen to conduct an acute exposure experiment of four different TDG supersaturation levels (125%, 130%, 135% and 140%). The findings illustrated that the two fish species both exhibited evident aberrant behaviours of maladjustment in TDG supersaturated water. Obvious GBD symptoms were also found in the test fish. The survival probability of silver carp and common carp decreased with increasing levels of TDG supersaturation. The median survival time (ST₅₀) values of the silver carp exposed to four levels of TDG supersaturated water (125%, 130%, 135% and 140%) were 26.84, 7.96, 5.56 and 3.62 h, respectively, whereas the ST₅₀ values of common carp were 53.50, 26.00, 16.50 and 11.70 h, respectively. When compared with common carp, silver carp had a weaker tolerance to TDG-supersaturated water and were vulnerable to GBD. It shows that levels above 125% are not safe for common carp survival. In terms of the tolerance threshold value, silver carp merits further investigation because it showed lower tolerance to TDG than did common carp.     

达氏鲟生长激素基因cDNA克隆、表达及免疫荧光定位研究

为研究达氏鲟(Acipenser dabryanus)生长激素(Growth Hormone, GH)基因的功能, 合成了达氏鲟垂体SMART cDNA, 克隆得到GH全长cDNA序列。达氏鲟GH全长cDNA序列为1008 bp, 由52 bp的5'端非编码区(Untranslated region, UTR)、编码214个氨基酸的645 bp开放阅读框(Open reading frame, ORF)和311 bp的3'UTR构成。运用GH氨基酸序列构建进化树分析发现, 达氏鲟与两栖类、爬行类和哺乳类的一致性要高于真骨鱼类。实时荧光定量PCR结果表明, 达氏鲟GH mRNA主要在垂体和下丘脑中表达, 且垂体中GH的表达量约为下丘脑的110倍; Western-blot研究结果与qRT-PCR一致, 仅在垂体和下丘脑中检测到生长激素蛋白, 且垂体中GH的表达量远高于下丘脑。免疫荧光定位结果显示, GH主要定位于垂体中部, 下丘脑中也有少量荧光信号; 苏木精-伊红组织切片染色研究表明, GH主要是由嗜酸性的生长激素分泌细胞分泌。研究为深入研究脊椎动物生长激素基因的进化和人工养殖达氏鲟的生长调控提供了基础。       

Rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) exposed to oxygen supersaturation and handling stress: plasma cortisol and hepatic glutathione status

Three groups of one summer old rainbow trout were exposed for 22 days either to normoxia (100%) or moderate oxygen supersaturation; 120% and 140%. After the exposure, all groups were transported for three hours in hyperoxic conditions (123% O2) thus simultaneously experiencing density and handling stress. The recovery of rainbow trout to multiple stressors was measured in normoxic conditions. Moderate oxygen supersaturation did not have any negative effects on growth, feed conversion and blood hematology measured over 22 days. On the other hand, the combined effects of the stressful environment in the fish farm and oxygen supersaturation resulted in a 3-fold increase in plasma cortisol levels in those with 100% and 120% O2 supersaturation and a 2-fold increase in the 140% supersaturation group. Furthermore, the stress response after transportation was lowest in the 140% group 24 hours after recovery but highest after 70 hours. Moderate hyperoxia or transportation stress did not change glutathione concentrations in liver indicating that routine sampling does not affect hepatic glutathione status. Our results indicate that moderate O2 supersaturation (<140%) could be considered as feasible in cultivation of rainbow trout since no harmful effects were found.     

大鳞副泥鳅、泥鳅和北方泥鳅肉质比较分析

文章采用组织切片、生化组分分析以及实时荧光定量PCR等方法, 研究了大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)、泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)和北方泥鳅(Misgurnus bipartitus)肉质差异。结果显示: 大鳞副泥鳅、泥鳅和北方泥鳅的肌纤维横截面积分别为 (3589.17±2326.01)、(2809.7±1818.69) 和(2511.93±1949.03) μm2。粗蛋白和粗脂肪含量均是大鳞副泥鳅最高[分别为(17.07±0.31)%和(2.57±0.38)%], 依次为泥鳅[分别为(14.57±0.59)%和(1.37±0.12)%]和北方泥鳅[分别为(12.33±0.15%和0.57±0.06%]。必需氨基酸指数(EAAI)依次为泥鳅(74.38)、大鳞副泥鳅(65.11)和北方泥鳅(60.14); 呈味氨基酸含量依次为泥鳅(32.60±1.64)%、大鳞副泥鳅(27.75±2.13)%和北方泥鳅(24.86±1.00)%; 除亚油酸以外的总多不饱和脂肪酸含量依次为北方泥鳅(24.43±0.26)%、泥鳅(24.18±1.99)%和大鳞副泥鳅(7.86±0.24)%。大鳞副泥鳅的肌肉生长相关基因myod的表达量高, myog和mrf4的表达量低; 泥鳅和北方泥鳅的myog和mrf4的表达量高, myod的表达量低。elovl5等8个脂肪代谢相关基因的表达特征: 大鳞副泥鳅整体表达水平最高, 北方泥鳅次之, 泥鳅最低。结果表明, 大鳞副泥鳅肉质油润, 但是质地相对粗糙; 泥鳅营养价值高且鲜味程度高; 北方泥鳅肉质细嫩, 但是氨基酸营养价值不高, 鲜味程度较差。三种鳅的上述肉质差异可能与肌肉生长和脂肪代谢活动不同有关。     

Biochemical responses and survival of rock carp (Procypris rabaudi) to total dissolved gas supersaturated water

Ichthyological Research - Total dissolved gas (TDG) supersaturation resulting from spillway discharge during high flows can cause gas bubble disease (GBD) and mortality in fish, and increases...     

牛蒡抗虫活性及抗虫成分的初步研究

在水温(23±0.5)℃、pH 7.0～8.0、溶解氧＞5 mg· L-1的条件下,研究孵化过程中不同盐度对拟目乌贼胚胎发育和孵化率的影响.结果表明,拟目乌贼卵透明略带奶油色,近椭圆形,短径为0.596～1.758 cm,长径为1.452～3.136 cm,刚产出的卵重约2g;孵化完成时,卵膜内的重量达到4.5g.在盐度为28‰时,经过28～30 d孵化,卵的短径和长径平均分别增加了0.601、0.615 cm,孵化率为57.0％;盐度为23‰时,卵的长径和短径也相应增加,增幅分别为0.567、1.263 cm,孵化率为13.5％;盐度为33‰时,经过28～30 d孵化,卵短径平均增长0.150 cm,而长径却缩短了0.141 cm,孵化率为9.5％;在盐度为13‰、18‰、38‰和43‰条件下,胚胎停止发育,孵化率为0.结果表明,拟目乌贼属于狭盐性种类,盐度变化对拟目乌贼胚胎发育和孵化有直接影响.     

江苏大丰麋鹿国家级自然保护区麋鹿死亡分析

<正>麋鹿(Elaphurus davidianus)曾是中国特有的大型沼泽湿地型鹿科动物。由于人类活动、气候变化和历史变迁等因素,麋鹿于1900年前后在中国本土灭绝,少数圈养个体流落海外(计宏祥,1985;曹克清和陈彬,1990)。1986年我国从英国引进39头麋鹿放养在苏北沿海滩涂,建立了大丰麋鹿自然保护区,1997年晋升为江苏大丰麋鹿国家级自然保护区(以下简称：大丰麋鹿保护区)。     

泥鳅雄核发育纯合二倍体的产生

以机械方法挑去泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)×大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)(♀)属间杂交受精卵的雌核,得到泥鳅雄核发育单倍体胚胎。将这种单倍体胚胎的囊胚细胞核移植到大鳞副泥鳅去核卵中,获得了243个原肠胚胎,其染色体鉴定表明,29.6%的核移植体的染色体发生了加倍。在另一实验组中,从769个核移植卵得到了5尾2cm以上的个体。尾鳍染色体鉴定、肌肉LDH同工酶电泳和形态鉴别表明,这5尾核移植体为泥鳅雄核发育纯合二倍体。     

利用液相色谱研究烘焙条件对白肋烟中游离氨基酸的影响

利用OPA、FMOC联合在线衍生反相高效液相色谱法测定白肋烟在110℃、120℃、130℃、140℃、150℃分别烘焙12m in和16 m in后游离氨基酸的含量,研究烘焙温度和烘焙时间对白肋烟中游离氨基酸的影响。结果显示整个烘焙过程是蛋白质的降解和M ailard反应相结合的动态过程,蛋白质的降解主要发生在110℃~120℃的低温区;而M ailard反应主要发生在130℃~150℃高温区。实验结果还表明烘焙时间对白肋烟在烘焙后游离氨基酸的含量有重要影响,烘焙时间的延长使烟叶中的游离氨基酸均有较大幅度降低,其中影响最明显的是Pro、Asp和Asn。