深黄被孢霉发酵生产γ—亚麻酸的研究

以深黄色被孢霉ＡＳ３．３４１０（ＭｏｒｔｉｅｒｅａｌｌａｉｓｄｂｅｌｌｉｎａＡｓ３．３４１０）的变异株Ｍ６为出发菌株,γ－亚麻酸含量２１０ｍｇ／Ｌ。经紫外线和微波处理得到变异株Ｍ６－２２,摇瓶发酵γ－亚麻酸含量１１８１ｍｇ／Ｌ,２００升发酵罐发酵γ－亚麻酸含量达到１３５０ｍｇ／Ｌ,对２００升罐发酵的后提取工艺进行了研究,以乙醇和正己烷分步抽提效果最好,脲素包合法的实验结果表明,在７０～７５℃,３ｈ     

红色链孢霉Rnase N1高产菌株的选育

本文介绍了红色链孢霉(Ncurospora crassa) Rnase N₁．高产菌株的选育和Rnase N₁．的鉴定。 1. 以红色链孢霉3.1602(鸟氨酸缺陷型)为原始菌株,经1／5000三乙撑四胺30℃振荡处理2小时,继以柏钻照射4分钟(13．2千伦琴／分钟),照射剂量为52．8千伦琴。分离得到红色链孢霉OA047菌株(鸟氨酸一腺嘌呤双重营养缺陷型)。以红色链孢霉3．1604(野生型)为原始菌株,经100微克分子MNNG 28℃振荡处理2小时,分离得到红色链孢霉WA011(腺嘌呤营养缺陷型)。这两个菌株在改良的File’s培养基上,比原始菌株产酶能力分别提高约20倍。     

紫外线照射对玫烟色拟青霉产孢子能力的影响

目的:探讨紫外线照射对玫烟色拟青霉产孢子能力的影响.方法:利用20W紫外 灯对玫烟色拟青霉的原生质体悬浮液进行了不同照射时间、对孢子悬浮液进行了不同照射距 离和时间组合的紫外线照射处理.结果:紫外灯下30cm照射原生质体90 s及紫外灯下20cm照射孢子20min两个处理中,菌落直径最大菌株的菌丝生长速度显著高于出 发菌株,产孢量也分别是出发菌株的1.4及1.6倍.结论:适宜的紫外线照射处理可以提高玫烟色拟青霉的产孢子能力.     

三孢布拉氏霉生物合成β-胡萝卜素的研究──Ⅰ.三孢布拉氏霉负菌优良菌株SCB201的选育

采用紫外照射、亚硝基胍（NTG）和离子束综合诱变处理,获得一株三孢布拉氏霉菌负亩优良菌株SCB201。在优化了的培养条件下,它与三孢布拉氏霉菌正菌SCB200接合培养产β－胡萝卜素达到2g／1,较其亲株0．2g／1的水平提高了10倍。     

多核丝状真菌的选育及遗传稳定性

细胞中多核体的存在,对其隐性突变体的分离及优良形状的稳定遗传产生了相当大的障碍。通过采用大剂量的NTG诱变多核单细胞丝状真菌三孢布拉霉JMβ817的孢子,再经紫外线复合照射该孢子制备成的原生质体,使其高产菌株－超黄突变体的隐性基因CarS和CarD得以表达,从中分离到一株CarS隐性突变株JMβ287,β－胡萝卜的产量达到2.36g/l,比出发菌株提高了30％。并通过孢子的亚培养进行定向选育,使高产性状得以稳定遗传,为促进工业化发酵生产天然β－胡萝卜提供了必要的手段。     

三孢布拉氏霉生产合成β—胡萝卜素的研究：Ⅰ.三孢布拉氏霉负菌优？…

采用紫外照射、亚硝基胍（ＮＴＧ）和离子束综合诱变处理,获得汪株三孢布拉氏霉菌负菌优良菌株ＳＣＢ２０１。在优化了的培养条件下,它与三孢布拉氏霉菌正菌ＳＣＢ２００接合培养产β－胡萝卜素达到２ｇ／１,较其亲株０．２ｇ／１的水平提高１０倍。     

高产武夷菌素wysR基因过表达菌株的筛选及菌株生物特性研究

以武夷菌素生物合成正调控基因wys R过表达菌株为初选材料,通过琼脂块法对2 060个过表达菌株单菌落进行初筛,得到35个优选菌株,再采用摇瓶发酵复筛的方法筛选出9个高产菌株,并通过菌株遗传稳定性分析,最终确定W-273菌株为最优菌株。研究武夷菌素wys R基因过表达菌株W-273的生理生化特征,发现与原始菌株CK-15相比,W-273菌株生长迅速,产孢量增加且产孢时间提前,W-273菌株生长3-4 d即可完成产孢,较菌株CK-15产孢时间提前了3-4 d;电子显微镜观察W-273菌株和CK-15菌株孢子形态不同,W-273菌株孢子呈椭圆形或杆状,CK-15菌株孢子呈圆形;通过摇瓶发酵表明W-273菌株较CK-15菌株代谢旺盛,抗生素产量提高79%-289%,且最佳发酵时间缩短4-8 h。     

苏云金杆菌SD—5菌株发酵生理学研究及生产

通过苏云金杆菌SD－5菌株对混合氨基酸的抗性及在3吨发酵罐中发酵生理学的研究,显示SD－5菌株具有优良的发酵性能。用正交试验设计方法筛选出SD－5菌株发酵培养基配方,菌数可达110－130亿／ml,芽孢率达95％以上。     

水杨酸生产菌抗噬菌体菌株的选育

从氧化荣生成水杨酸的铜绿色假单孢杆菌 Pseudomonas aerugtnosa AS 1.860菌株的不正常发酵液巾分离到了噬菌体,这些噬菌体呈秆状,命名为sA噬茵体。用它处理敏感菌株获得了一批抗噬酱体的产水杨酸菌株,其中B。菌株在摇瓶和罐的发酵中产酸都不低于原坡感菌林的水平。根据敏感菌株及sA噬菌体耐热性的差异,我们用热处理法获得了不含活细胞的噬菌体液,实践证明此法简便而有效。     

深红虫草高产卵孢菌素的培养基筛选及发酵条件优化

本研究以提高深红虫草Cordyceps cardinalis C033次级代谢产物卵孢菌素的产量为目标,对其产卵孢菌素的培养基进行筛选,并利用单因素和正交试验对深红虫草产卵孢菌素的发酵条件进行了优化。结果表明,深红虫草产卵孢菌素的最适发酵培养基为马铃薯‐蛋白胨‐葡萄糖培养基,最佳发酵参数为:发酵时间6d,培养基初始p H 7.0,接种量6%,培养温度24℃,每500m L锥形瓶装液量100m L,摇瓶转速120r/min。用最佳培养基进行发酵条件优化后获得卵孢菌素448.70μg/m L,产量是优化前的10.14倍。该研究结果为菌株C033在农业害虫防治上的应用奠定了基础。     

黑曲霉HS—16纤维素糖化菌的选育及在酒精发酵中的应用研究

本试验以有一定纤维素酶活力的黑曲霉Ａ．ｎｉｇｅｒＨＳ－００为出发菌株,经紫外光、激光、亚硝基胍复合诱变,选育出糖化稻草纤维素性能优良的Ａ．ｎｉｇｅｒＨＳ－１６菌株,其分解稻草纤维素产生还原糖的能力是出发菌株的５倍,还原糖生成率可达２８％。利用其稻草纤维素糖化液进行酒精发酵,酒化率为８４．８％。本试验还系统研究了影响稻草纤维素糖化的因素,确定了糖化用固体稻草培养基的最佳配方,分析了不同营养对酒精发酵     

产鸟苷的枯草杆菌缺失GMP还原酶活性突变株的选育

以枯草杆菌ＳＭ－１２－２为出发菌株,经物理化学诱变剂连续处理,获得一株８－氮杂鸟嘌呤（８－ＡＧ）,缺失鸟苷酸（ＧＭＰ）还原酶性的突变株Ｇ－２０５。该突变株肌苷酸（ＩＭＰ）脱氢酶活性比亲株高,在培养基中积累５．１７ｍｇ／ｍｌ鸟苷,９．８４ｍｇ／ｍｌ肌苷。     

两株高糖分利用能力的酿酒酵母呼吸突变体选育

以酿酒酵母乙醇发酵高产工业菌株MF1002为始发菌株,对其营养细胞进紫外线诱变,筛选得到两株性状稳定的呼吸缺陷型突变体MF15c和MF11a。菌体细胞对2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)显色测定呼吸强度的结果表明,两突变菌株的相对呼吸强度分别只有始发菌株的57.77%和47.25%。与现有报道的呼吸缺陷突变体不同,两株突变体的细胞生长速率只在培养初期略低于始发菌株,总体生长速率与始发菌株几乎没有差异,在YPD平板上培养也不形成小菌落。比较蔗糖发酵试验表明,两株突变体的乙醇产量较始发菌株只分别略提高6.48%-6.59%(MF15c)和1.66%-1.97%(MF11a),但发酵终止的残总糖含量却显著低于始发菌株,分别减少34.85%和19.70%,发酵效率较始发菌株分别显著提高6.69%和4.71%,表明这两株突变体为新型的呼吸缺陷型突变。鉴于提高乙醇发酵的发酵效率可显著降低生产成本,认为这两株突变菌株具有较高的潜在工业利用价值。     

A model for pathogen population structure with cross-protection depending on the extent of overlap in antigenic variant repertoires

The persistence of discrete antigenic types among pathogens with multiple immunogenic loci can be explained by the action of immune-mediated competition. It has previously been shown that pathogen populations will self-organize into non-overlapping subsets of antigenic variants if cross-protection between pathogen types sharing any variants is high. Here, we examine the critical question of whether such strain structure will emerge if the degree of immune-mediated competition is dependent on the number of variants shared between pathogen types, rather than in an all-or-nothing manner. Our analysis uncovers a progression from no strain structure through to discrete stable strain structure through intermediate partially structured states. This suggests that the number of loci or epitope regions required to detect linkage disequilibrium (as a manifestation of stable discrete strain structure) in pathogen populations correlates inversely with the strength of immune selection.     

阿维链霉菌的诱变育种

以阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)76-12为出发菌株,采用亚硝基胍、吖啶橙、紫外线和氯化锂分别对其孢子和原生质体进行诱变,经抗代谢物理性筛选,获得一系列高产突变株,其中N-1-2高产突变株的发酵单位是出发菌株的2.47倍。实验中同时获得了只产阿维菌素a组分的突变株G-32、Bla组分含量高的Ave8菌株和产蓝绿色孢子的突变株UA-G等。     

基因组改组技术及其在微生物育种中的应用研究进展

Genome shuffling(基因组改组)技术是借助递归式原生质体融合策略对微生物基因组进行遗传改良的一种新兴微生物育种方法。自2002年首次被用来培育tylosin高产菌株以来,目前已为育种工作者广泛采用。对Genome shuffling技术的原理及最近的应用研究进展进行了综述,探讨了其局限性,并展望了其发展的趋势。     

高产γ-氨基丁酸低产桔霉素红曲霉(Monascus ruber)突变子1047筛选与发酵特性研究

以红曲米中筛选到的红色红曲霉菌株G为原始菌株,通过农杆菌介导T-DNA插入突变技术,成功构建了含有1 483株红曲霉突变子的T-DNA插入突变库。用HPLC等方法从突变库中筛选出10株γ-氨基丁酸(GABA)产量稳定高于原始菌株G的突变子,薄层层析结合HPLC技术分析了10株突变子发酵液中桔霉素的含量;其中突变子1047的GABA产量较高,为1.169g/L,是原始菌株G(GABA产量0.472g/L)的247.67%,桔霉素含量稳定低于原始菌株G。以红曲霉菌株G和突变子1047为实验材料,通过5 L发酵罐发酵并定时取样,HPLC等方法精确分析发酵液各种活性物质的含量;结果显示,突变子1047生长速度稍快于原始菌株G;GABA、莫纳可林K(Monacolin K)、红曲色素色价分别为2.201 g/L、83.892 mg/L、21.984 U/mL,是原始菌株G的279.67%、108.01%和182.35%;而桔霉素产量为1.976 mg/L,是原始菌株G的41.71%。因此,利用TDNA插入的方法对红曲霉进行育种,能产生稳定的遗传变化,在红曲霉资源的保护和利用上有一定潜力。     

Construction of a Trp- commercial baker's yeast strain by using food-safe-grade dominant drug resistance cassettes

We have designed a food-safe-grade module for gene disruptions in commercial baker's yeast strains, which contains the G418 resistance cassette, KanMX4, flanked by direct repeats from the MEL1 gene of Saccharomyces cerevisiae. This module was used to obtain a Trp(-) auxotrophic mutant of the polyploid HY strain by successive targeting to the TRP1 locus and later in vivo excision of the kan(r) marker. Southern blot analysis indicated that HY contains five copies of the TRP1 gene. However, after four disruption rounds, a strain named HYtrpM(4), unable to grow in the absence of tryptophan, was selected. Southern and Northern analysis of HYtrpM(4) cells showed that a remaining functional wild-type copy was still present, suggesting that the level of phosphoribosylanthranylate isomerase activity, resulting from a single copy of TRP1, is too low to sustain growth. Accordingly, a high reversion frequency of the Trp(-) phenotype, through gene conversion, was found in cells of the mutant strain. Nevertheless, this was not a drawback for its use as a recipient strain of heterologous genes. Indeed, YEpACT-X24 transformants were stable after 25 generations and expressed and secreted high levels of active recombinant xylanase. These data indicate that the new Trp(-) strain can be used to generate a stable recombinant yeast that fulfils all the requirements and market criteria for commercial utilisation.     

产纳豆激酶菌株Bacillus sp.ZLK08的分离及酶纯化

获得稳定产纳豆激酶菌株,为高酶活纳豆激酶产生菌的改造奠定基础.取各来源纳豆,用平板梯度稀释法分离菌株,测定菌株酶活,利用16S rDNA鉴定产酶菌株,凝胶过滤法纯化纳豆激酶并SDS-PAGE检测分析.成功获得稳定产酶芽胞杆菌Bacillus sp.ZLK08,16S rDNA分析表明其与GenBank中序列同源率达到99％,液体发酵表明酶活达到2.5 FU/mL,经纯化,SDS-PAGE表明纳豆激酶分子量为28.46 ku.分离出的Bacillus sp.ZLK08菌株能稳定产纳豆激酶且具有较高酶活.     

石油降解菌株的分离鉴定及降油特性

从甘肃华庆油田污染严重的土壤中采样,通过富集培养、多次筛选分离得到1株优势菌F1。依据生理生化特征和16S rDNA序列将菌株F1鉴定为白色类诺卡氏菌(Nocardioides albus)。GS-MC结果表明,等量原油经F1菌株降解前、后,表现出先降解高碳数正构烷烃为低碳数正构烷烃;高碳数正构烷烃中奇数碳向偶数碳正构烷烃演化规律;平均降油率为64%,F1菌株能较好地促使五环三萜类化合物立体构型中不稳定构型向稳定性构型转化。F1菌株在含油浓度0.3%、0.5%、1.0%土样中降解石油烃的半衰期分别为17.2、18.2、23.7 d,42 d后均达到78%以上。