RNA干扰在肿瘤基因治疗中的应用策略

运用RNA干扰（RNAi）技术可以通过以下策略进行肿瘤的靶向治疗：抑制癌基因、生长因子及其受体的过表达,从而抑制细胞生长;干扰细胞周期蛋白及其相关基因的表达,从而抑制细胞增殖;抵抗致癌病毒的入侵;抑制抗凋亡基因的表达;上调和恢复抑癌基因的功能;抑制肿瘤发生过程中的关键酶;抑制与肿瘤转移有关的血管生成;靶向端粒酶;靶向耐药基因。尽管目前RNAi已经较为广泛地应用于基因功能研究和肿瘤疾病的基因治疗研究中,但其在应用过程中还有许多亟待解决的问题。我们就RNAi及其在肿瘤疾病基因治疗中的应用策略和存在的问题做一综述。     

RNA干扰技术在基因治疗中的应用进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种双链RNA分子在mRNA水平上关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程,在基因治疗方面有着无可比拟的优势,已成功的应用于肿瘤、病毒感染、遗传性疾病及神经系统疾病等重大疾病的治疗.本文将主要介绍siRNA基因治疗的导入方法与途径,以及在不同疾病中,RNAi技术进行基因治疗的应用.     

RNA干扰在肿瘤基因研究中的应用进展

RNA干扰是真核生物基因转录后水平的一种表达调控机制,它通过内源性或外源性的ds RNA介导细胞内靶标m RNA发生特异性降解或翻译抑制,从分子水平影响靶标基因的表达。该技术不仅广泛用于肿瘤基因结构与功能的探索研究,也为肿瘤基因靶向特异性治疗提供了新的技术手段。本文就RNA干扰的原理和特点,合成方法,以及目前RNA干扰在肿瘤基因研究中的应用方法及情况进行综述。     

多靶向RNA干扰技术在基因治疗中的应用与前景

RNA干扰(RNA interference,RNAi)通过转录后基因沉默效应特异性抑制靶基因的表达,其沉默机制的高效性、特异性及稳定性使这项技术成为生物医学领域研究基因治疗的重要工具。阐述RNAi技术的特点和RNAi疗法的现状,特别是多靶小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)目前的发展态势及其各种结构性修饰,通过使用这些结构修饰的siRNA提高基因沉默的效率,将有助于提高疗效。但该技术在广泛应用于临床之前,仍存在一些亟待解决的问题与面临的挑战,需进一步研究。     

RNA干扰技术在功能基因研究中的应用

RNA干扰是与靶基因序列同源的双链RNA所诱导的一种特异性的转录后基因沉默现象。它是一种跨越多种种属的古老的生物途径,同时它的出现为生物学家提供了一种快速,简便的反向遗传学技术,在后基因组时代功能基因的研究中具有重要的应用前景。     

基因治疗研究现状与发展态势

基因治疗是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞以纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用,从而达到治疗疾病目的的生物医学技术。在临床应用中．基因治疗通常有体内疗法和体外疗法两种。体内疗法包括肌内注射、静脉注射、器官内灌输、皮下包埋等．其优点是将外源基因导入受体体内有关的器官组织和细胞内,简便易行,但其缺点是基因转染率较低。     

RNA干扰在抗乙肝治疗中的应用及其研究进展

据世界卫生组织(WHO)报道,全世界约有20亿人曾感染过乙型肝炎病毒(HBV),其中3.5亿人为慢性HBV感染者.我国现有1.3亿乙肝病毒携带者和3 000多万乙肝患者,其中约有20%～40%的患者经过多年慢性炎症的反复发作可发展为肝硬化和肝癌.然而,至今人们仍没有找到一种能够彻底治愈慢性乙肝的特效药物.自从RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术建立以来,人们致力于将其应用于抗病毒药物的研究与开发.研究结果表明,RNAi可有效地抑制乙肝病毒的复制,但靶向目的基因的不同RNA干扰片段所沉默的效率不同.关于将RNAi抗病毒药物应用于人体治疗的安全性和有效性还有待进一步研究,RNAi发生"脱靶"的现象是临床应用的难点之一.     

RNA干扰抑制nm23-M1基因表达对骨髓瘤SP2/0细胞增殖的影响

建立RNA干扰 (RNA interference, RNAi)抑制nm23-M1基因表达的骨髓瘤SP2/0细胞株, 初步探讨nm23-M1基因对小鼠骨髓瘤细胞增殖的影响.针对 nm23-M1 mRNA序列设计3个小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)序列, 分别构建表达这3个序列及阴性对照序列的pGenesil-1重组质粒, 再转染小鼠骨髓瘤SP2/0细胞并经G418抗性筛选稳定表达细胞株.采用半定量RT-PCR及Western 印迹检测3个重组质粒对nm23-M1 mRNA及蛋白质表达的抑制效果, 然后用MTT法观察抑制nm23-M1表达对SP2/0细胞增殖的影响.结果显示, 设计的3条siRNA不同程度地特异抑制骨髓瘤SP2/0细胞nm23-M1 mRNA及蛋白质的表达, 其中siRNA-2抑制作用最强, 其对nm23-M1 mRNA和蛋白质的抑制率分别为74.4%和62.1%; 且siRNA-2抑制nm23-M1基因表达后SP2/0 细胞增殖受到明显抑制 (P < 0.05).本研究成功构建了pGenesil-1-nm23-M1 siRNA重组质粒, 筛选出稳定抑制nm23-M1基因表达的SP2/0细胞株, 提示抑制nm23-M1基因表达有抑制骨髓瘤细胞增殖的作用; 为进一步研究nm23基因的生物学功能及临床应用打下了基础.     

激光捕获显微切割技术在肿瘤研究中的进展

激光捕获显微切割技术(LCM,Laser Capture Microdissection)是目前最先进的组织纯化技术,LCM结合各种基于细胞、DNA、RNA、及蛋白质的分子生物学技术成功运用于肿瘤学研究的各个方面,通过对切割后细胞的基因组,转录组,蛋白组等分析研究后得到了大量有用的结论.本文就其在肿瘤学研究中的应用进行综述.     

B型钠尿肽与心力衰竭研究现状

B型钠尿肽作为诊断充血性心力衰竭的一种生化指标,受到临床工作者的高度关注.本文详细综述了B型钠尿肽的生物特性、体内代谢、生理功能、实验室检测和在心力衰竭诊断、鉴别诊断、治疗、预后评价的应用.以及B型钠尿肽在实验室检测和临床应用中存在的问题.     

RNA干扰技术治疗疾病

RNA干扰(RNA interference,RNAi)现象最早发现于秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans),随后发现该现象普遍存在于真菌、植物和哺乳动物等真核生物,并行使基因调控和抵御外源基因片段侵袭的作用。目前,RNAi分子机制和RNAi在基因功能方面的研究已经取得了突破性的进展。鉴于RNAi在基因沉默中的特异性、高效性和易操作,其在药物筛选和疾病治疗等方面有着广泛的应用前景。然而,RNAi技术用于治疗疾病的安全性尚待确定,分子传递途径也有待进一步的研究。     

survivin启动子驱动的shRNA在宫颈癌SiHa细胞中的特异性表达

研究survivin启动子驱动的小发夹RNA(shRNA)在宫颈癌SiHa细胞中的特异性表达.PCR扩增survivin启动子,构建以survivin启动子驱动增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达的真核表达载体pEGFP-C1/Surv,并检测survivin启动子的活性;构建针对EGFP的shRNA真核表达载体pGenesil-1-EGFP-shRNA/U6,并检测shRNA在U6启动子驱动下的干扰效果;用有活性的survivin启动子取代pGenesil-1-EGFP-shRNA/U6载体中的U6启动子,从而获得新的shRNA真核表达载体pGenesil-1-EGFP-shRNA/Surv;将pGenesil-1-EGFP-shRNA/Surv转染到宫颈癌SiHa细胞及正常人脐静脉内皮HuVEC细胞,观察EGFP在两种细胞中的表达变化.结果表明,成功扩增survivin启动子并验证该启动子具有活性;成功构建EGFP shRNA真核表达载体pGenesil-1-EGFP-shRNA/U6,并验证shRNA在U6启动子驱动下具有较好的干扰效果;成功构建pGenesil-1-EGFP-shRNA/Surv载体,分别转染SiHa及HuVEC细胞,在SiHa 细胞中观察到较少的绿色荧光蛋白表达,而在HuVEC细胞中观察到较多的绿色荧光蛋白表达.survivin启动子能驱动shRNA在宫颈癌SiHa细胞中特异性表达,而在正常HuVEC细胞中不表达.     

RNA干扰

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是一种古老的生物抗病毒机制,能介导序列特异性的mRNA降解,是基因功能研究和蛋白组学的有效工具,在药物靶基因的筛选、抗病毒、肿瘤基因治疗等领域有很好的发展前景。     

基因枪在RNA干扰中的应用研究进展

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是指双链RNA（double-strand RNA,dsRNA）特异性降解同源mRNA,从而引发基因转录后水平沉默的现象,是一种高效、高特异性抑制基因表达的途径。自1998年Fire等发现RNA干扰现象以来,其特异性降解目的基因的优势吸引了众多研究者的目光。本文在简要综述RNAi技术在基因功能研究、抗病毒治疗,肿瘤基因治疗等领域的应用后,重点归纳了基因枪技术在RNAi研究即siRNA导入细胞中的应用,并简单分析其优势与意义。     

RNA干扰用于基因治疗的研究进展

RNA干扰(RNAi)是20世纪末才被人们认识和重视的一种通过双链RNA抵御病毒入侵或抑制转座子活动的生物防御机制。随着RNA干扰分子机制研究的深入及其应用研究的发展,人们发现RNA干扰技术在基因功能研究及人类疾病的基因治疗上具有广阔的应用前景。本文在简述RNAi分子机制的基础上,综述了RNAi在抗病毒治疗及抗肿瘤治疗方面的研究和应用概况。     

RNA干扰在动物研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是指具有同源性的双链RNA分子导入细胞后,使促进与之同源的mRNA发生特异性降解的现象。随着对RNAi分子机制研究深入,它将成为研究动物基因功能、蛋白质功能、基因治疗、基因药物的强有力的工具。     

RNA干扰对Smad7基因的抑制作用

小分子干扰RNA(siRNAs)可以高效、特异地阻断体内同源基因的表达,促进同源mRNA降解,称为RNA干扰(RNAi)。本研究旨在探讨Smad7基因的siRNAs是否能抑制基因的表达。利用RNA干扰技术,设计并合成了针对Smad7基因的siRNAs,用脂质体转染法瞬时转染BEP2D和BERP35T2细胞,用Northern blot法检测RNAi效应;同时设计并合成了绿色荧光蛋白(GFP)的siRNAs,瞬时转染稳定表达绿色荧光蛋白的BERP35T2细胞,检测荧光强度有无改变。结果表明RNA干扰技术能明显抑制Smad7基因的表达,并能显减弱绿色荧光的表达强度,为进一步研究Smad7基因功能及TGF-β信号转导通路奠定了基础。     

基于RNA的抗HIV-1基因治疗方法研究进展

艾滋病自发现以来在全球范围内迅速蔓延,危害性极高,目前广泛采用的高效抗逆转录病毒疗法(HAART)虽能够显著提高HIV-1感染者生活质量,但存在着价格昂贵,耐药和副作用的问题经常会导致HAART治疗的中断。要获得长期持续的抗病毒治疗效果还有待于研发新的抗病毒药物和治疗方法。近年来随着分子生物技术、干细胞研究、纳米技术等相关技术的发展,关于抗HIV-1基因治疗方法的研究受到了广泛关注。主要针对基于RNA的抗HIV-1基因治疗方法,包括反义RNA、核酶、RNA诱饵以及RNA干扰技术在抗HIV-1基因治疗方面进行综述。研究表明,以RNA为基础的抗HIV-1基因治疗方法有望成为传统治疗方法的一种有效辅助手段。