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以谷氨酸生产菌天津短杆菌(Brevibacteriumtientsinens)T6-13为出发菌株,经菌体或原生质体紫外线(UV)、氯化锂、香豆素等多因子诱变和高温驯化,选育出琥珀酸、生物素营养缺陷型,耐高糖、耐高谷氨酸又不利用谷氨酸,且温度适应范围大(既可在常温32-38℃发酵,又可在高温36-42℃发酵)的突变株GMH-908。以淀粉糖为碳源,生物素亚适量,摇瓶常温发酵产酸95g/L以上,高温发酵产酸74.9g/L,比出发菌株T6-13分别提高26.67%和22.99%;工业生产常温发酵月平均产酸85-88g/L,转化率52-54g%,单罐最高产酸108g/L,转化率58%;高温发酵产酸达76.5g/L,转化率49.5%。 相似文献
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30L生物反应器连续灌注培养重组CHO—C28细胞表达HBsAg的研究 总被引:2,自引:1,他引:1
应用30 L生物反应器和微载体悬浮 培养技术,通过电脑全自动控制,连续灌注培养分泌HBsAg 的重组CHO-C28细胞。试验了培养方式、连续灌流速度,反应器转速和细胞对葡萄糖消耗等工艺条件。观察培养60 天,细胞的生长形态、HBsAg 分泌动态和染色体数。研究结果表明,连续培养60 天,细胞密度可达7.0×106cells/m l,平均维持在(5.0~6.0)×106cells/m l,收液的RPHA 滴度可达1∶512,HBsAg 每天平均产量为30 m g。 相似文献
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温特曲霉转富马酸为L—苹果酸的初步研究 总被引:4,自引:0,他引:4
从大量霉菌在选育到一株具有较高富马酸酶活性的温特曲霉(Aspergillus wentii)A5-61。在摇瓶培养条件下,32℃ 96小时,产L-苹果酸达10.49g/100ml,对富马酸的转化率达90.80%。利用菌体细胞,进行酶转化试验,结果表明:1.6g湿菌体接入25ml含富马酸10.0%(用NaOH中和至pH7.0)的转化液中,35℃16-24小时,连续转化三次,分别产生L-苹果酸9.61 相似文献
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菜心下胚轴原生质体培养和植株再生 总被引:6,自引:0,他引:6
以萌发3—4 天(长约4 cm )的菜心(Brassica campestris var.parachinesis)无菌苗苍白下胚轴为材料,酶解分离原生质体。经纯化的原生质体,在含0.5 m g/LZT、0.5 m g/L2,4-D、1.0 m g/LNAA 和0.4 m ol/L葡萄糖的K8p 培养基中,进行微滴培养。在起始培养14—18小时,原生质体再生新的细胞壁。36 小时再生细胞开始第一次分裂。第三天分裂细胞频率可达35% 。培养第8—9 天,可见含8—16个细胞的小细胞团,植板率为15% —18% 。3 周后将发育成直径为2 m m 的白色小愈伤组织,转到含0.3 m g/L 2,4-D并用gelrite半固化的培养基上,增殖成4—5 m m 直径的愈伤组织。在MS+ 3.2(或1.6) m g/L BA+ 1.6(或0.8) m g/LZT+ 0.01 m g/L NAA+ 0.1 m g/LGA3 和0.2% 蔗糖的分化培养基上,获得芽的分化。切下约2 cm 长的芽苗,转移到含0.2 m g/LIAA 和2% 蔗糖的培养基上,生根形成完整植株 相似文献
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本文从含ArgRS306KR基因args306KR的pUC18重组质粒的大肠杆菌TG1转化子中经DEAE-Sephacel和Blue-Sepharose两步柱层析,得到电泳一条带的ArgRS306KR。纯酶的比活为2790单位/毫克。该酶氨酰化和ATP~PPi交换活力的最适pH分别为pH8.3和pH7.5。氨酰化活力对ATP、Arg和tRNA的Km分别为2.6mmol/L、14.0μmol/L和5.0μmol/L:Vmax为7630单位/毫克;koat为9S-1。ATP~PPi交换活力对ATP和Arg的Km分别为8.3mmol/L和99μmol/L;Vmax为16320单位/毫克;kcat为18S-1。 相似文献
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天花粉蛋白Y14F/R22L定点突变及其活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用多聚酶链式反应(PCR)技术,对天然天花粉蛋白(nTCS)基因在Tyr14和Arg22两个保守残基处同时进行定点突变,即Tyr14变成Phe,Arg22变成Leu,然后克隆到pET-8c高效表达载体上,构建成重组质粒pETY14F/R22L.经序列分析,定点突变的结果与预先设计的完全一致,突变后的天花粉蛋白命名为Y14F/R22LTCS.将pETY14F/R22L转化到E.coliBL21(DE3,pLysS)中,进行表达.经CM-SepharoseCL-6B柱纯化,SDS-PAGE鉴定,纯度可达90%.RIP活性测定显示,Y14F/R22LTCS的活性比nTCS降低了7.5倍,活性变化不显著,因此,TCS的Try14和Arg22对维持其活性部位构象并不是必需的.但由于Y14F/R22LTCS在E.coli中的表达量与nTCS相比明显下降,因此,Tyr14和Arg22可能与TCS翻译后的折叠有关. 相似文献
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筛选得到一株高产β-1,4-聚糖酶的耐碱性芽孢杆菌A-30,其固体发酵(Solid state fermentationSSF)时最适培养条件:起始pH为8.0、培养温度32℃、10%(v/w)接种量,含水量为66.6%(v/w),以0.5%的NaNO_3为无机氮源,发酵96h,木聚糖酶活可达6457IU/g(Dry bacterial bran),纤维素酶活(CMCase)可以达到18.66IU/g。氮源组成、温度、pH及发酵时间等对A-30所产木聚糖酶和纤维素酶比例有较大影响。葡萄糖对A-30的阻遏效 相似文献
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大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶的变种ArgRS306KR的纯化… 总被引:1,自引:1,他引:0
本文从含ArgRS306KR基因args306KR的pUC18重组质粒的大肠杆菌TG1转化子中经DEAE-Sephacel和Blue-Sepharose两步柱层析,得到电泳一条带的ArgRS306KR。纯酶的比活为2790单位/毫克。该酶氨酰化和ATP-PPi交换活力的最适PH分别为PH8.3和PH7.5。氨酰化活力对ATP、Arg和tRNA的Km分别2.6mmol/L、14.0μmol/L和5. 相似文献
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红花细胞培养条件的优化及其胞内产物生育酚的 总被引:2,自引:0,他引:2
红花(Carthamus tinctorious)的子叶能诱志出愈伤组织,并且该愈伤组织能合成生育酚。正相高效液相色谱测定的结果表明,其主要成分是α-生育酚。在MS培养基基础上添加0.1%酪蛋白,并将生长调节剂浓度调整为2,4-D0.30mg/L,6-BA 1.80mg/L,槿使α,β-γ生育酚含量分别达4.1706,0.3120,0.1650μg/g鲜重。 相似文献
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真养产碱菌利用甜菜糖蜜发酵产聚β-羟基丁酸的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
探讨了以廉价原料甜菜糖蜜培养真养产碱菌(Alcaligeneseutrophus)H16生产聚β-羟基丁酸(PHB)的可行性。对培养基优化试验表明,菌体产量可达20g/L,PHB产量达9.8g/L,糖转化率为27.5%。用2升自控发酵罐进行验证,在良好的供氧条件和特定的pH值自控条件下发酵周期从48小时缩短到40-42小时,菌体和PHB量都有提高。菌体最高产量26g/L,PHB最高产量13g/L,糖转化率为20.4%。PHB占细胞的含量,摇瓶和罐上结果都在50%左右。 相似文献
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利用已构建的含有短芽孢杆菌(Bacillus brevis)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase, α-ALDC)基因的工程菌株,并使它们分别在大肠杆菌中高效表达,获得重组α-ALDC。在实验室,用 2L体积的麦芽汁进行啤酒生产试验,添加 2种重组α-ALDC后,使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在0.1mg/L以下。证明得到的重组a-ALDC能有效地降低啤酒中双乙酰含量。 相似文献
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采用多种方法诱变获得一株新型肌苷产生菌--产氨短杆菌GMBA-800,对其生长和发酵条件进行初步研究。肌苷产量从5g/L提高到18.41g/L,发酵周期从84h缩短为63h。菌株遗传性状稳定。 相似文献
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系统感染TMV (tobacco m osaic virus)的番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)叶胞外蛋白提取液经冰冻干燥浓缩、- 20℃丙酮沉淀、CM-Sephadex C-25离子交换层析、DEAE-Sephadex A-25离子交换层析和Sephadex G-75凝胶层析纯化,获得PAGE均一的β-1,3-葡聚糖酶.SDS-PAGE证明,它包含分子量为36 kD 和27 kD的两个同工酶.以昆布多糖为底物,酶的最适pH 在4.8—5.2之间,在pH 4—8稳定;酶的最适温度在30—40℃之间,在40℃保温1h 后酶活性不变;Km 值为9.2 m g/m L.在系统感染TMV 的番茄叶胞外蛋白提取液中,有分子量为22 kD、27 kD和36 kD的3个β-1,3-葡聚糖酶同工酶 相似文献
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二十碳五烯酸的菌种选育及发酵条件 总被引:8,自引:1,他引:7
利用含亚麻子油的斜面培养基连续传工和逐渐降低培养温度,诱导筛选的方法,从大量丝状真菌中选育到一株产二十碳五烯酸(all-cis-5、8、11、14、17-eicosapentaenoic acid)较高的被孢霉菌(Motierella sp.)SM481。研究得到最适培养基及最适培养条件。在最适培养及产二十碳五烯酸条件下,细胞干重和二十碳五烯酸产量分别为28.8g/L和0.127g/L。 相似文献
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