胆囊收缩素及受体基因多态性与精神分裂症的相关性研究

目的：探讨胆囊收缩素（cholecystokinin,CCK）基因、胆囊收缩素A受体（cholecystokininAreceptor。CCKAR）基因和胆囊收缩素B受体（cholecystokinin A recepmr,CCKBR）基因多态性与精神分裂症之间的相关性。方法：采用聚合酶链式反应．限制性片段长度多态性方法,对420例精神分裂症患者（病例组）和455例健康个体（对照组）三个基因的6个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNPs）位点（rs11571842、rs13069836、rs1800908、rs1800857、rs1042047、rs4758092）的多态性进行检测。并比较两组人群中基因型和等位基因频率分布的差异。结果：对照组6个SNPs位点的基因型频率分布均符合Hardy-Weinbere平衡（P〉0．05）;CCKAR基因rs1800857位点基因型频率分布在精神分裂症组与正常对照组间存在显著性差异（P〈0．000）,病例组T等位基因频率显著高于对照组（P〈0．01）。结论：CCKAR基因多态性与精神分裂症相关,携带T等位基因的个体可能更容易患精神分裂症。     

miR-148a通过靶向调节己糖激酶2基因抑制乳腺癌细胞糖酵解和细胞增殖能力

为了探讨miR-148a及己糖激酶2（hexokinase 2,HK2）基因对人乳腺癌细胞糖酵解代谢途径的影响和可能机制,利用实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR）检测多种乳腺癌细胞系中miR-148a的表达量,从中筛选miR-148a表达量相对较低的乳腺癌细胞系作为研究对象。再通过观察miR-148a表达量的变化对乳腺癌细胞葡萄糖摄取量、乳酸生成量和细胞增殖指标的影响,以探究miR-148a对乳腺癌细胞糖代谢能力的影响。随后,通过TargetScan在线数据库预测miR-148a和HK2基因的靶向关系,再通过双荧光素酶报告实验、Western免疫印迹以及基因回复实验进行验证,以进一步明确miR-148a和HK2在乳腺癌细胞的糖酵解代谢途径中的作用机制。通过qRT-PCR发现miR-148a在多种乳腺癌细胞系表达降低,尤其是在乳腺癌细胞系MDA-MB231中表达量显著降低（P<0.000 1）。过表达miR-148a使MDA-MB231细胞的葡萄糖摄取量、乳酸生成量、细胞增殖指标均显著下降（P<0.01）;而抑制miR-148a表达使MDA-MB231细胞葡萄糖摄取量、乳酸生成量、细胞增殖指标均显著上升（P<0.01）。通过TargetScan在线数据库预测得出,miR-148a与HK2基因3′非编码区（3′-untranslated region,3′-UTR）具有部分结合位点;而双荧光素酶报告实验发现miR-148a与野生型HK2基因的3′-UTR荧光素酶报告载体结合,不与突变型HK2基因的3′-UTR结合。Western免疫印迹检测结果表明,过表达miR-148a使MDA-MB231细胞中HK2蛋白表达量显著下降（P＜0.000 1）,而抑制miR-148a表达则促进HK2蛋白表达量显著上升（P<0.05）。基因回复实验显示,过表达HK2基因使MDA-MB231乳腺癌细胞的葡萄糖摄取量、乳酸生成量、细胞增殖指标显著上升（P＜0.01）;将过表达miR-148a载体与过表达HK2载体共转染MDA-MB231细胞,miR-148a逆转了HK2所致的葡萄糖摄取量增加和乳酸生成量上升,并抑制细胞增殖。因此,研究提示,miR-148a可通过靶向抑制HK2基因表达而抑制乳腺癌细胞MDA-MB231糖酵解代谢和细胞增殖。     

miR-148a在5-aza诱导间充质干细胞心肌样分化中的调控作用及机制

目的：探讨miR-148a在5-aza诱导人骨髓间充质（hMSCs）成心肌样分化中的表达及miR-148a对hMSCs体外成心肌样分化的生物学作用。方法：免疫荧光检测5-aza诱导hMSCs分化后心肌细胞特异性标志物α-MHC表达水平;qRT-PCR和Western blot分别检测miR-148a和DNMT1在hMSCs成肌样分化中的表达水平。利用Lipofectamine TM 2000将miR-148a mimics和miR-148a inhibitor分别瞬时转染hMSCs,Western blot检测心肌细胞特异性标志物α-MHC的蛋白表达水平。利用生物信息学技术预测miR-148a的靶基因结合位点利用双荧光素酶报告基因系统鉴定其对靶基因3'UTR的结合序列。通过DNMT1 shRNA和miR-148a inhibitors共转到hMSCs中,研究miR-148a在hMSCs成心肌样分化中的调控作用。结果：hMSCs经5-aza诱导分化后,心肌细胞特性标志物α-MHC蛋白水平明显上调。miR-148a在hBMSCs成肌样分化中显著性增加（P<0.01）,DNMT1表达水平显著降低。过表达miR-148a能提高hBMSC中心肌细胞特异性标志物α-MHC表达水平,而抑制miR-148a则能降低其水平（P<0.01）。DNMT1沉默可以阻断miR-148a对hMSCs的诱导成肌样分化作用。结论：miR-148a在hMCCs成肌样分化中表达上调,通过靶定和调控DNMT1基因的表达,并对hMSCs心肌向分化具有正向调控作用。     

胆囊收缩素及其受体在胆囊结石形成过程中的作用

胆囊收缩素（cholecystokinin,CCK）＆~I起胆囊收缩的最主要的激素,ccK通过作用于胆囊收缩素受体（cholecystokininreceptcr,CCK．R）影响胆囊动力。越来越多的研究表明,胆囊动力减弱是胆囊结石形成的重要因素之一。该文对胆囊收缩素及其受体对胆囊动力的影响以及它们在胆囊结石形成过程中所起的作用进行了综述。     

鸡miR-148a的组织表达及其发育调控功能预测分析

为了解鸡miR-148a组织表达谱和潜在发育调控功能,采用茎-环定量RT-PCR检测了固始鸡5个发育阶段、15种组织中miR-148a的表达,利用Pictar和TargetScan算法预测了miR-148a的靶基因,并对预测靶基因分别进行了Gene Ontology分析和通路分析. 结果显示,miR-148a的表达具有明显的时序特征,胚胎期各组织中的表达水平明显低于出壳后;miR-148a在出壳后的大脑、小脑、延脑、腺胃、小肠、肝、胰和胸肌等器官组织中的表达水平随着发育进程被显著上调;miR-148a预测靶基因在胚胎器官形态发生、血细胞生成、消化道形态发生、心血管发育、感觉器官发育、肠发育、骨骼系统发育、后脑发育、呼吸系统发育、免疫系统发育、淋巴器官等发育过程显著富集. 总之,鸡miR-148a为广泛性表达miRNA,可能参与鸡诸多器官组织发育过程的调控.     

miRNA-181a在胃癌细胞增殖和迁移中的作用

miRNA与恶性肿瘤患者的诊断和预后密切相关,为了考察miRNA-181a在胃癌细胞增殖和迁移中的作用,本研究检测了miRNA-181a在胃癌组织中的表达,并通过对人胃癌细胞系MGC-803转染miR-181a模拟物或抑制剂来考察miR-181a对细胞迁移和增殖的影响。RT-PCR显示,miRNA-181a在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(p<0.05)。伤口愈合实验和Transwell实验显示,转染miR-181a抑制剂或TGF-β受体2(TGFβR2)过表达的pcDNA3.1质粒均可抑制MGC-803细胞的迁移。EdU实验和CCK-8实验显示,转染miR-181a抑制剂或TGFβR2过表达的pcDNA3.1质粒均可抑制MGC-803细胞的增殖。此外,miR-181a抑制剂处理可使TGFβR2蛋白表达明显升高。然而,miR-181a模拟物或抑制剂处理后TGFβR2mRNA水平没有显著变化。总之,本研究表明高表达的miR-181a通过在转录后抑制TGFβR2蛋白表达来促进胃癌细胞的迁移和增殖。miR-181a有望成为胃癌的潜在治疗靶点。     

血清miR-148a、miR-122-5p水平与骨质疏松症患者髋部骨折的关系及其预测价值分析

摘要 目的：研究血清微小核糖核酸-148a（miR-148a)、miR-122-5p水平与骨质疏松症患者髋部骨折的关系及其预测价值。方法：选取吉林大学第一医院从2019年1月～2021年1月收治的102例骨质疏松症患者作为研究对象。将其按照是否并发髋部骨折分为骨折组45例以及无骨折组57例,另选取健康体检志愿者40例作为对照组。比较三组血清miR-148a、miR-122-5p水平。采用单因素和多因素Logistic回归模型分析骨质疏松症患者髋部骨折的影响因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-148a、miR-122-5p水平预测骨质疏松症患者髋部骨折的效能。结果：骨折组血清miR-148a表达水平为（1.25±0.29）,相较于无骨折组的（1.04±0.24）以及对照组的（0.66±0.13）更高,且无骨折组miR-148a表达水平相较对照组更高;骨折组血清miR-122-5p表达水平为（0.60±0.06）,相较于无骨折组的（0.74±0.12）以及对照组的（1.01±0.17）更低,且无骨折组miR-122-5p表达水平相较对照组更低（均P＜0.05）。骨折组血清PINP、β-CTX水平及年龄、女性人数占比均高于无骨折组,骨密度评分低于无骨折组（均P＜0.05）。经多因素Logistic回归分析可得：年龄偏大、女性、骨密度评分降低、血清PINP、β-CTX、miR-148a水平升高均是骨质疏松症患者发生髋部骨折的危险因素,血清miR-122-5p水平升高是其保护因素（均P＜0.05）。经ROC曲线分析发现,血清miR-148a、miR-122-5p联合预测骨质疏松症患者发生髋部骨折的效能优于上述两项指标单独预测。结论：血清miR-148a水平升高以及血清miR-122-5p水平降低均可能增加骨质疏松症患者发生髋部骨折的风险,两指标联合检测具有辅助预测骨质疏松症患者发生髋部骨折风险的潜在价值。     

慢性心力衰竭患者外周血miR-148a表达水平与炎症因子、心功能和心室重构的关系

摘要 目的：探讨慢性心力衰竭（CHF）患者血清miR-148a表达水平与炎症因子、心功能和心室重构的关系。方法：选择2017年1月~2019年1月在我院就诊的CHF患者136例,按照美国纽约心脏病学会（NYHA）心功能分级将患者分为Ⅱ级57例、Ⅲ级43例和Ⅳ级36例。实时荧光定量PCR检测血清miR-148a的表达,血清中白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量用酶联免疫吸附试验检测,使用超声心动图检测心功能和心室重构指标,主要包括左室舒张末期内径（LVEDD）、舒张末室间隔厚度（IVSD）、舒张末左室后壁厚度（PWD）、左室质量指数（LVMI）、左室射血分数（LVEF）和左室重构指数（LVRI）,采用Pearson积矩相关系数分析血清miR-148a表达水平与血清炎症因子、超声心动图指标之间的相关性。结果：CHF患者血清miR-148a表达量随心功能分级升高而降低（P均<0.05）。炎症因子（IL-1、IL-6和TNF-α）水平和LVEDD、PWD、IVSD、LVMI随心功能分级升高而升高, LVRI和LVEF随心功能分级升高而降低（P<0.05）。血清miR-148a表达量与炎症因子、IVSD、PWD和LVMI呈负相关（P<0.05）;与LVEF和LVRI呈正相关（P<0.05）。结论：血清miR-148a表达量与CHF患者血清炎症因子水平、心功能及心室重构关系密切,提示检测血清miR-148a有助于反映CHF患者病情的严重程度。     

miR-29a靶向调控PDGFB促进非小细胞肺癌细胞凋亡

为了探究miR-29a对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制,本研究通过荧光定量PCR检测肺癌组织、癌旁组织、肺癌细胞以及人正常肺支气管上皮细胞BEAS-2B中miR-29a的表达,在肺癌A549转染miR-29a mimics后,使用荧光定量PCR和CCK-8法分别检测miR-29a的表达以及各组细胞的活力,使用流式细胞术检测A549细胞凋亡;通过荧光定量PCR检测肺癌组织、癌旁组织PDGFB m RNA的表达,采用Western blot检测PDGFB蛋白的表达;使用双荧光素酶报告基因检测miR-29a可能的靶基因;在肺癌A549细胞转染miR-29a mimics后继续转染PDGFB过表达质粒,通过qPCR和Western blotting分别检测PDGFB mRNA和蛋白的表达。结果表明,与癌旁组织相比,miR-29a在肺癌组织的表达显著下调(p<0.01),PDGFB在肺癌组织的表达显著增加(p<0.01);转染miR-29a mimics后,肺癌A549细胞中miR-29a表达显著增加(p<0.01);CCK-8法结果显示miR-29a mimics组A549肺癌细胞在24 h和48 h后细胞增值率较miR-NC对照组显著降低(p<0.01);流式细胞术结果显示miR-29a mimics组的细胞凋亡率较miR-NC对照组显著增加(p<0.01);与miR-NC+PDGFB 3’UTR WT组相比,miR-29a mimics+PDGFB 3’UTR WT组的荧光强度显著降低(p<0.01);荧光定量PCR和Western blotting显示miR-29a mimics+PDGFB组PDGFB m RNA和蛋白表达量与miR-29a mimics+vector组相比显著增加(p<0.01)。本研究结果表明miR-29a在肺癌组织和肺癌细胞株中低表达,及抑制PDGFB的表达并且促进肺癌细胞凋亡。     

Mir-26a 调控子宫肌瘤中孕激素受体a（PRa）、雌激素受体α（ER-alpha） 的表达

目的：雌激素和孕激素在子宫肌瘤发病中起重要作用。但miRNA 在子宫肌瘤发病中的作用还知之甚少,我们前期已证实 mir-26a 在子宫肌瘤中低表达,本实验进一步探讨mir-26a 在体外对子宫肌瘤中孕激素受体a（PRa）、雌激素受体琢（ER琢）表达 的调控。方法：利用TargetScan 软件预测mir-26a 的潜在靶基因,找出靶基因3''UTR 区片段,插入PmirGLO 绿色荧光蛋白编码 区下游,构建报告基因载体,同时原代培养子宫肌瘤平滑肌细胞。将报告基因载体与mir-26a 共转染入原代培养的子宫肌瘤平 滑肌细胞,引入双荧光素酶报告基因系统对mir-26a 的靶基因进行验证。转染mir-26a mimics 于子宫肌瘤平滑肌细胞,western blotting检测子宫肌瘤平滑肌细胞中mir-26a 靶蛋白表达水平。结果：用TargetScan 软件和双荧光素酶报告基因系统证实ER琢、 PRa 为mir-26a 的靶基因。蛋白水平进一步验证,mir-26a mimics 的转染量不同,ER琢、PRa 的蛋白表达水平下调不同。结论： Mir-26a 通过结合靶基因的3''-UTR 区调控靶基因的mRNA水平。Mir-26a 抑制雌激素受体琢（ER琢）、孕激素受体a（PRa）在子宫 肌瘤中的表达。Mir-26a 可能通过调控雌激素受体琢（ER琢）、孕激素受体a（PRa）影响子宫肌瘤的发展。本实验通过确定mir-26a 对子宫肌瘤的作用机制,有望进一步提高子宫肌瘤的治疗技术,减少手术治疗的创伤。     

miR-148a promoted cell proliferation by targeting p27 in gastric cancer cells

Accumulating evidence has shown that miRNAs are aberrantly expressed in human gastric cancer and crucial to tumorigenesis. Herein, we identified the role of miR-148a in gastric cell proliferation. miR-148a knockdown inhibited cell proliferation in gastric cancer cell lines. Conversely, miR-148a overexpression promoted cell proliferation and cell cycle progression. p27, a key inhibitor of cell cycle, was verified as the target of miR-148a, indicating miR-148a might downregulate p27 expression to promote gastric cell proliferation. Moreover, we confirmed that miR-148a expression was frequently and dramatically downregulated in human advanced gastric cancer tissues, and observed a good inverse correlation between miR-148a and p27 expression in tumor samples. Thus, our results demonstrated that miR-148a downregulation might exert some sort of antagonistic function in cell proliferation, rather than promote cell proliferation in gastric cancer.     

GPER mediated estradiol reduces miR-148a to promote HLA-G expression in breast cancer

Breast cancer is the most common malignant diseases in women. miR-148a plays an important role in regulation of cancer cell proliferation and cancer invasion and down-regulation of miR-148a has been reported in both estrogen receptor (ER) positive and triple-negative (TN) breast cancer. However, the regulation mechanism of miR-148a is unclear. The role of estrogen signaling, a signaling pathway is important in development and progression of breast cancer. Therefore, we speculated that E2 may regulate miR-148a through G-protein-coupled estrogen receptor-1 (GPER). To test our hypothesis, we checked the effects of E2 on miR-148a expression in ER positive breast cancer cell MCF-7 and TN cancer cell MDA-MB-231. Then we used GPER inhibitor G15 to investigate whether GPER is involved in regulation of E2 on miR-148a. Furthermore, we analyzed whether E2 affects the expression of HLA-G, which is a miR-148a target gene through GPER. The results showed that E2 induces the level of miR-148a in MCF-7 and MDA-MB-231 cells, GPER mediates the E2-induced increase in miR-148a expression in MCF-7 and MDA-MB-231 cells and E2-GPER regulates the expression of HLA-G by miR-148a. In conclusion, our findings offer important new insights into the ability of estrogenic GPER signaling to trigger HLA-G expression through inhibiting miR-148a that supports immune evasion in breast cancer.     

Loss of exosomal miR-148b from cancer-associated fibroblasts promotes endometrial cancer cell invasion and cancer metastasis

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) play crucial roles in tumor progression, given the dependence of cancer cells on stromal support. Therefore, understanding how CAFs communicate with endometrial cancer cell in tumor environment is important for endometrial cancer therapy. Exosomes, which contain proteins and noncoding RNA, are identified as an important mediator of cell–cell communication. However, the function of exosomes in endometrial cancer metastasis remains poorly understood. In the current study we found that CAF-derived exosomes significantly promoted endometrial cancer cell invasion comparing to those from normal fibroblasts (NFs). We identified a significant decrease of miR-148b in CAFs and CAFs-derived exosomes. By exogenously transfect microRNAs, we demonstrated that miR-148b could be transferred from CAFs to endometrial cancer cell through exosomes. In vitro and in vivo studies further revealed that miR-148b functioned as a tumor suppressor by directly binding to its downstream target gene, DNMT1 to suppress endometrial cancer metastasis. In endometrial cancer DNMT1 presented a potential role in enhancing cancer cell metastasis by inducing epithelial–mesenchymal transition (EMT). Therefore, downregulated miR-148b induced EMT of endometrial cancer cell as a result of relieving the suppression of DNMT1. Taken together, these results suggest that CAFs-mediated endometrial cancer progression is partially related to the loss of miR-148b in the exosomes of CAFs and promoting the transfer of stromal cell-derived miR-148b might be a potential treatment to prevent endometrial cancer progression.