成纤维细胞生长因子的研究

成纤维细胞生长因子的研究崔亚东（阜阳师范学院生物系,安徽阜阳２３６０３２）关键词成纤维细胞生长因子早在１９４０年,人们发现脑和垂体提取液中含有一种能促进成纤维细胞生长的活性物质。直到１９７４年,该物质才被分离纯化,命名为成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）。...     

瘢痕疙瘩成纤维细胞

瘢痕疙瘩是创伤延迟愈合期间由于过量结缔组织的沉积形成的超出最初损伤范围的增殖性瘢痕组织。目前虽然不能确定其确切的发病机制 ,也没有普遍有效的治疗药物 ,但大量的研究证明 ,瘢痕疙瘩成纤维细胞参与了该病的发生。1 .生长瘢痕疙瘩成纤维细胞同正常皮肤成纤维细胞在形态上没有表现出明显的差异。体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞仍然是整倍体 ,仍然有接触抑制 ,这表明成纤维细胞并没有转化 (Ｄｉｅｇｅｌｍａｎｎ等 ,1 979)。在含有正常浓度 ( 1 0 % )血清的培养基中 ,瘢痕成纤维细胞生长同正常皮肤成纤维细胞的生长没有明显的差别[1] ,最…     

肥大细胞与肺成纤维细胞共育方法

近年来,肥大细胞(mast cell,MC)对成纤维细胞生长的影响受到人们的关注。MC与成纤维细胞共育方法为研究其影响的重要手段。我们取腹腔MC与同源动物肺成纤维细胞(lung fibroblast,LFB)共育,观察MC对LFB生长的影响,方法基本稳定,国内尚未见报道。现介绍如下。     

大鼠卵巢颗粒细胞aFGF及bFGF基因表达的研究

成纤维细胞生长因子(FGFs)是一类多功能因子,具有广泛的生物学作用,它对卵泡发育的许多方面如颗粒细胞的生长及分化、纤维蛋白溶酶原活化剂的释放、血管生成等都有影响。FGFs按等电点的不同分为酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),两者有55％的同源性并作用于同一受体。从已有资料分析,aFGF和bFGF在进     

γ—干扰素和地塞米松对肝素促成纤维细胞增殖的抑制作用

目的和方法 :用MTT比色 ,AgNORs (核仁组成区相关嗜银蛋白 )银染结合图像分析以及抗Ⅲ型胶原单抗免疫组化技术观察了γ 干扰素 (γ IFN)和地塞米松 (Dexa)对成纤维细胞生长的抑制作用。结果和结论 :①培养第 3d ,2 5 0× 10 3u/L的γ IFN和 10 0mg/L的Dexa对正常成纤维细胞生长的抑制率分别为 4 3 %和 3 3 % ;而培养第 5d ,相同浓度的γ IFN对 0 .0 5和 0 .10mg/L肝素刺激的成纤维细胞生长的抑制率分别为 3 4%和 4 0 % ;②照后 3d或5d ,两种抑制剂对肝素刺激的正常和照射成纤维细胞增殖均显示明显抑制作用 ;③ 2 5 0× 10 3u/L的γ IFN和 15 0mg/L的Dexa对成纤维细胞AgNORs合成显示出较强的抑制作用 ,在肝素组其AgNORs颗粒数分别为对照值的60 %和 71% ,而AgNORs 3个定量参数的均值分别为对照值的 61%和 65 % ;④培养第 3d ,上述两种浓度的抑制剂对肝素组Ⅲ型胶原阳性的成纤维细胞抑制率分别为 62 %和 66%。     

低氧促进大鼠心脏成纤维细胞DNA合成及Ⅰ、Ⅲ胶原mRNA表达

目的:研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞DNA合成及Ⅰ、Ⅲ型胶原前a肽链表达的影响.方法:分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞的DNA合成速率,采用原位杂交技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达.结果:成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞在低氧第6h、12 h时3H-TdR掺入量较常氧组显著增加,分别增加34%(P＜0.05)和36%(P＜0.01);低氧第4 h、8 h、12 h Ⅰ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞;低氧第2 h,Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞.结论:低氧能够直接促进体外培养的成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞DNA合成和Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链表达,提示低氧对心脏成纤维细胞生长和胶原表达的直接调节可能是低氧性心肌纤维化的重要机制.     

凋亡诱导因子在姜黄素诱导的大鼠肺成纤维细胞凋亡中的作用

目的:研究姜黄素对肺纤维化大鼠肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响,探讨凋亡诱导因子(AIF)在肺成纤维细胞凋亡中的作用.方法:将体外培养的肺纤维化大鼠成纤维细胞,分别于不同浓度的姜黄素(5、10、20、40μM)和caspase-3抑制剂Z-DEVD-fmk(20μM)孵育,观测细胞生长状态变化.MTT检测成纤维细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western-Blot测定凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达及核转位结果:流式细胞术检测细胞凋亡,5～40μM姜黄素处理12 h,其凋亡率呈浓度依赖,对照组相比,差异显著;而抑制caspase-3并不能完全阻止细胞凋亡.Western-Blot结果显示,姜黄素处理组出现凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达与核转位,抑制caspase-3活性后未检测出AIF表达结论:姜黄素可抑制肺成纤维细胞增殖,其诱导大鼠肺成纤维细胞凋亡,可能与线粒体释放AIF有关.     

检测人成纤维细胞增殖的XTT比色法

利用3种不同来源的成纤维细胞(大鼠肾上皮细胞,人胎肺成纤维细胞,人成纤维细胞)的活细胞线粒体脱氢酶在电子偶联剂硫酸酚嗪甲酯（phenazine methosulfate, PMS）的协同作用下,还原四氮唑复合物(XTT)形成可溶性的棕黄色甲簪（formazan）产物,测定细胞甲簪的生成量来反映细胞的生长与活性状态,并与传统的四甲基偶氮唑盐(MTT)方法作比较.结果表明,XTT方法直接测定水溶性的甲簪产物,敏感度高于MTT法,具有操作简单、快速、灵敏度高、结果准确的优点,为成纤维细胞的研究建立了新的检测方法.     

牛胎儿成纤维细胞的分离与体外培养

分别用胶原酶Ⅲ和胰蛋白酶成功地分离了牛胎儿成纤维细胞,并对其进行了体外培养,同时探讨了两种酶消化分离牛胎儿组织的时间对牛胎儿成纤维细胞原代培养的影响。用组织块直接培养也成功得到了牛胎儿成纤维细胞,并探讨了不同组织块大小对牛胎儿成纤维细胞原代培养的影响。通过绘制生长曲线,可以研究牛胎儿成纤维细胞增殖规律;通过制备牛胎儿成纤维细胞的细胞染色体发现,经过传代(12代)、冷冻保存、解冻,牛胎儿成纤维细胞染色体数目不变。     

纤维连接蛋白能通过ILK和p-smad2诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的:探讨纤维连接蛋白(Fibronectin,Fn)能否诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化及其可能机制。方法:在包被有Fn的培养皿上培养肺成纤维细胞,并在不同的时间点(6h、12h、24h、48h),在应用和不应用TGF-βR激酶抑制剂条件下,采用免疫细胞化学、western blot等技术检测相关蛋白的表达情况。结果:肺成纤维细胞在Fn上生长72h后,a-SMA的表达显著增加(p0.05),ILK在6h即出现表达,持续到12h(p0.05),p-Smad2在12h出现表达,持续到24h(p0.05),SB525334能够部分抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程中a-SMA的表达(p0.05)。结论:Fn能通过ILK和p-smad2诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化。     

人皮肤菌群分离株与成纤维细胞培养

为研究微生物群(微种群)与宿主的关系,我们在人成纤维细胞的培养物中,定量的加入从皮肤上分离的常住菌和其它菌株的纯培养物进行混合培养,设立不加菌液的对照组,发现加入疮疤丙酸杆菌(A_(14-1)、表皮葡萄球菌(F_(65))等常住菌,以及从皮肤上分离的干酪乳杆菌(ad_3株)、青春双歧杆菌(Bf_1),有促进人成纤维细胞生长,延缓其老化等作用。而加入从临床标本中分离的脆弱美杆菌(A104株)及金黄色葡萄球菌(189株),则出现培养的人成纤维细胞脱核、裂解和死亡等毒害作用。我们的实验表明:皮肤正常菌群对宿主的皮肤有生理性的滋助作用。     

原代培养过程中壳聚糖衍生物对CTCF/YB-1/C-myc和p53蛋白表达的影响

成功建立了人增生性瘢痕细胞和正常皮肤成纤维细胞的原代培养, 并利用热休克蛋白(HSP47)和成纤维细胞特异蛋白(FSP)标记物进行了鉴定。研究发现, 经过壳聚糖衍生物处理, 人增生性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞在培养中均出现了不同类型的蛋白表达。多功能转录因子蛋白(CTCF)在壳聚糖衍生物处理的增生性瘢痕成纤维细胞中出现表达上调; 在聚糖衍生物处理的正常皮肤成纤维细胞中数量无变化。YB-1结合蛋白在经壳聚糖处理的正常皮肤成纤维细胞与人增生性瘢痕细胞中的表达几乎无异, 但在未经壳聚糖处理的细胞中表达不同。C-MYC和P53蛋白在壳聚糖衍生物处理的增生性瘢痕纤维细胞中表达上调, 但在正常皮肤成纤维细胞中, 无论是否经过壳聚糖衍生物处理, 这两种蛋白都没有表达。上述4种蛋白在人增生性瘢痕细胞和正常皮肤成纤维细胞中表现出不同的表达方式, 这种新型壳聚糖衍生物可能在控制人增生性瘢痕细胞和正常皮肤成纤维细胞生长和增殖过程中起着重要作用。这些蛋白因子的表达机制目前还不是完全清楚, 有待于进一步研究。     

西伯利亚狍成纤维细胞建系及其生物学特性分析北大核心CSCD

本研究以内蒙古大青山获得野生雄性和雌性西伯利亚狍(Capreolus pygargus)为实验材料,利用组织块贴壁培养法进行气管、肺和耳3种组织成纤维细胞原代建系,研究不同组织来源的细胞贴壁率、冷冻前及复苏后存活率、生长曲线,进一步绘制狍成纤维细胞核型图并分析其G带特征。实验结果显示,气管、肺和耳3种组织成纤维细胞增殖经历潜伏期、对数生长期、平台期三个阶段,细胞形态为梭形、三角形或不规则形,是典型成纤维细胞形态;成纤维细胞呈漩涡状生长,其中气管、耳成纤维细胞生长增殖能力最强、肺成纤维细胞增殖能力较弱,气管和耳组织来源成纤维细胞呈典型“S”型细胞生长特征。染色体核型及G带分析结果显示,雄性狍成纤维细胞染色体条数为2n=70,其中,有34对常染色体,形态类型为12条近端着丝粒染色体(st),22条亚中着丝粒染色体(sm),1对性染色体,X染色体为中着丝粒染色体(m),Y染色体为近端着丝粒染色体(st),5条超数染色体(B);雌性狍成纤维细胞染色体条数为2n=70,其中,有34对常染色体,其形态类型为29条亚中着丝粒染色体(sm),5条近端着丝粒染色体(st),1对为性染色体,X染色体为亚中着丝粒染色体(sm),8条超数染色体(B)。本研究成功建立了雄性和雌性西伯利亚狍气管、肺和耳3种组织来源的成纤维细胞系,在体外培养时生长状态良好且维持了细胞的遗传信息稳定性,绘制了西伯利亚狍雄性和雌性染色体核型及G带图谱,为将来更深入开展相关研究提供材料与基本技术支撑。     

酸性成纤维细胞生长因子的生物学特性及临床应用展望

酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)是成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGFs)家族成员之一。因aFGF特殊的结构赋予其在创伤修复、糖脂代谢、血管再生、骨骼修复和神经生长等方面的生物活性及卓越的临床应用价值。从aFGF结构特征、生物功能、临床应用进展及其新型递送系统4个方面对aFGF研究进行深入总结。     

重组人成骨生长肽的表达、纯化和活性的研究

将人工合成的人成骨生长肽基因 (hOGPgene) ,与质粒pTYB2 重组 ,转化大肠杆菌E .coliBL2 1 (DE3) .经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,融合蛋白在E .coli中得到表达 .菌体经超声破碎 ,一步亲和层析纯化得到重组人成骨生长肽 (recombinanthumanosteogenicgrowthpeptide ,rhOGP) .体外实验证明 :rhOGP对成纤维细胞 (NIH3T3)的增殖有促进作用 .体内实验证明 :rhOGP加速兔移植骨成活 ,使血清中碱性磷酸酶活性增高 ,骨钙素增高 .重组人成骨生长肽促进成骨 ,有可能成为治疗骨移植及骨折愈合的有效药物     

血管外膜成纤维细胞诱导BMSCs向平滑肌细胞定向分化

观察大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)与血管外膜成纤维细胞(ad-ventitial fibroblasts,AF)直接接触培养后,BMSCs向血管成分细胞分化的情况.将BMSCs(DAPI标记)与外膜成纤维细胞按一定的比例混合培养7 d,BMSCs单独培养作对照,显微镜下观察细胞形态变化;用免疫荧光染色检测BMSCs的血管平滑肌细胞表型标志物肌动蛋白(SMα-actin)表达的情况;RT-PCR检测SMα-actin mRNA表达的情况.BMSCs与血管外膜成纤维细胞共培养后可见细胞核蓝染的BMSCs与SMα-actin表达阳性(红色)的双标细胞出现,且随培养时间的延长,BMSCs的SMα-actin表达阳性率增高.结果可见:与血管外膜成纤维细胞直接接触有诱导BMSCs向血管平滑肌细胞分化的趋势.     

成年SD大鼠心肌原代成纤维细胞分离及培养的优化方案

目的:摸索及优选成年SD大鼠心肌原代成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定的实验方法。方法:将成年SD大鼠心脏剪成小组织块,采用以下四种方案(A:0.08%胰酶+0.1%胶原酶II消化15 min,B:0.2%胶原酶II消化15 min,C:0.2%胶原酶II消化60min,D:0.2%胶原酶II消化90 min)提取成年大鼠心脏原代成纤维细胞,再通过差速贴壁分离方法培养原代成纤维细胞。采用倒置显微镜观察成纤维细胞的基本形态特征,并进行Vimentiin免疫荧光染色对培养的原代细胞进行荧光鉴定;采用台盼兰染色对培养的原代成纤维细胞存活率进行鉴定;采用细胞计数对培养的成纤维细胞生长趋势进行鉴定。结果:四种方法均能培养成纤维细胞,但单酶消化60 min可一次性提取较多细胞,并且细胞状态佳,3 d即可传代。72 h成纤维细胞Vimentin免疫荧光染色阳性率高达97%。台盼兰染色可见其细胞死亡率明显降低,并且细胞计数可见细胞生长状态极佳。结论:单酶消化60 min是提取成年SD大鼠心肌原代成纤维细胞的高效、快速、稳定的实验方法,为心脏疾病的基础及临床研究提供了较为理想的细胞学实验模型。     

日美共同研究FGF等血管新生因子

日本武田药品公司与美国哈佛大学医学院的福克曼(J.Folkman)教授协作,着手进行血管新生(形成)因子及其抑制物质的研究。该公司已独自克隆成功血管新生因子之一的碱性成纤维细胞生长因子(FGF),并通过基因操作产生FGF也获得成功。     

绵羊胎儿成纤维细胞体外培养及转基因研究

目的用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染体外培养绵羊胎儿成纤维细胞,探讨绿色荧光蛋白对绵羊胎儿成纤维细胞生物学特性的影响.方法体外分离培养绵羊胎儿成纤维细胞,经脂质体介导EGFP基因转染第一代成纤维细胞,G418筛选10～12*!d,挑选转基因单克隆细胞,传代培养,进行细胞形态观察、生长曲线以及染色体核型分析,并进行了培养细胞性别鉴定.结果整合有EGFP基因的绵羊胎儿成纤维细胞生物学行为与未转染外源基因的细胞无明显差别,根据荧光强度可直接反应外源基因的表达量.结论 EGFP基因作为体内报告基因可用于转基因细胞的研究,并将整合有EGFP基因的转基因细胞为克隆动物提供核供体奠定了基础.