单头灰飞虱体内水稻条纹叶枯病毒的快速检测

利用RT-PCR检测感病植株和单头带毒灰飞虱, 均扩增出水稻条纹叶枯病毒特有的一个长540 bp的片段, 且人工饲毒虫的病毒含量高于自然感病稻田虫。以病毒S蛋白的多克隆抗血清, 采用Western印迹技术从单虫体内检测到病毒抗原的2个专一性条带, 大小分别为20.7和19.7 kDa。DIBA (dot immunobinding ass ay)检测法快速、简便, 但专一性和灵敏度不及RT-PCR与Western印迹检测。对不同检测方法所得昆虫带毒率差异的原因进行了探讨。     

单头蚜虫黄瓜花叶病毒的检测(英文)

本文报道了用点免疫印迹法(DIBA)检测单头桃蚜(Myzus persicae)和棉蚜(Aphis gossypii)所带黄 瓜花叶病毒(CMV)的试验结果,作者摸索出的DIBA法操作程序用于检测提纯的CMV最低下限浓度为0.16ng/ml,即每2μl样品含0.32pg抗原.这样的灵敏度是可以检测出单头蚜虫所带CMV的。这种操作程序是将蚜虫口针截取下来,浸入适当的缓冲液(2—5μl)内。这不仅保证了CMV病毒粒子充分地从蚜虫口针上释放出来.形成较高的浓度,而且极大限度地减少了非病毒物质对检测的干扰,因此就克服了从单头介体昆虫上检测所带植物病毒时常遇到的病毒浓度太低和非病毒抗源干扰两大困难。试验还表明。用这种DIBA法检出的蚜虫带毒率同生物测定试验检出的蚜虫传毒率有很好的一致性。显然,在蚜传非持久性病毒检测技术上的这一突破,对于植物病毒病流行学研究具有重要意义。     

四种血清学方法检测烟草TMV、CMV的比较

本文应用ELISA－异种动物抗体双夹心法（DSM－ELISA）、ELISA－A蛋白酶联法（SPA－ELISA0、ELISA－斑点免疫法（Dot-ELISA)和葡萄球菌凝集法（SA－test)等四种血清学方法检测TMV、CMV感染的烟草病叶,结果以Dot-ELISA法灵敏度最高,其检测病叶粗汁液的稀释度为1：1280－2560,其次是DSM－ELISA和SPA－ELISA,均为1：640,SA－test灵敏度较低,为1：80。SPA－ELISA的非特异性反应比DSM－ELISA低,用健康汁液附抗血清,可以明显降低Dot-ELISA和SA-test的非特异性反应。     

沙门菌噬菌体BPS11T2的生物信息学分析及食品杀菌效果评价

为筛选和获取具有应用价值的噬菌体、掌握其遗传背景,本研究对前期分离的一株噬菌体BPS_(11)T_2进行基因组生物信息学分析,以及测试其用于清除鸡皮表面沙门菌的效果。结果表明,噬菌体BPS_(11)T_2的基因组大小为43 797 bp,含有65个基因,第29位基因产物被推定为具有抗菌应用价值的内溶素;其被鉴定为符合应用标准的噬菌体(不含溶源性和其他有害产物相关基因);其使用,能有效清除鸡皮表面的沙门菌。本研究为继续发展噬菌体和内溶素基础的沙门菌防控方法提供了有价值的研究材料和数据。     

高效特异的抗日本血吸虫循环抗原免疫血清制备的研究

制备高效特异的抗血吸虫循环抗原的免疫血清,是提高检测循环抗原方法灵敏度的重要环节。Bawden(1974)曾用淀粉凝胶电泳分离循环抗原,用甲基化牛血清白蛋白作为载体致敏动物,但所得的抗血清特异性较差。平田瑞成(1976)用酚抽提循环抗原制备抗血清,但免疫源性较差。Deelder(1976)     

单头灰飞虱体内水稻条纹叶枯病毒的快速检测

利用RT-PCR检测感病植株和单头带毒灰飞虱,均扩增出水稻条纹叶枯病毒特有的一个长540 bp的片段,且人工饲毒虫的病毒含量高于自然感病稻田虫。以病毒S蛋白的多克隆抗血清,采用Western印迹技术从单虫体内检测到病毒抗原的2个专一性条带,大小分别为20.7和19.7 kDa。DIBA（dot immunobinding assay）检测法快速、简便,但专一性和灵敏度不及RT-PCR与Western印迹检测。对不同检测方法所得昆虫带毒率差异的原因进行了探讨。     

SPA-IgG直接免疫荧光菌团法应用于志贺氏菌的检定

本文利用金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)所具有的与人和多种哺乳动物IgG的Fc段非特异结合的特性,和免疫荧光技术相结合,对SPA结合志贺氏菌抗血清的IgG,以及异硫氰酸荧     

酶标抗原火箭免疫电泳法及其在蛇毒抗原成分含量测定中的应用

为解决目前蛇毒成份检测困难以及寻找一种可用于蛇伤快速鉴别诊断的方法,本研究建立了酶标抗原火箭免疫电泳法。本法结合了酶标法灵敏度高和火箭电泳操作简单的特点,对待测的同种抗原标记辣根过氧化物酶(酶标抗原),检测时把微量的酶标记抗原掺入被测样品中,在含多价抗血清的免疫电泳板进行电泳。最后用辣根过氧化物底物3.3′-二氨基联苯胺在板上直接显色,显色后观察到的免疫沉淀线高度与被测抗原含量呈正相关(r=+0.98)。采用本方法检测眼镜蛇毒细胞毒素和限镜王蛇毒 L-氨基酶氧化酶,细胞毒素的最低检测浓度为110ng/ml,氨基酸氧化酶为60ng/ml。比单向火箭免疫电泳法灵敏度高30倍。用同一原理的酶标记抗原融合电泳法监测L-氨基酸氧化酶的层析分离时,比酶活性法检测灵敏度高20倍。全部检测只需30分钟。初步观察商品眼镜蛇毒抗血清可对蛇毒15种成分产生免疫沉淀线,眼镜蛇的细胞毒与同科异科蛇毒的细胞毒素无交叉免疫反应。因此,采用本法可以确定不同蛇种蛇毒中所含的特异性抗原,获得蛇伤鉴别诊断的依据。     

噬菌体-指示菌模型检测固型板材抗病毒性能的方法研究

在抗病毒材料检测方法中.大多利用具有高致病性的病毒直接进行实验室操作,这会给研究人员带来一定的不安全性.为了建立一种安全、快速、灵敏的检测固型板材抗病毒性能的方法,利用噬菌体-指示菌模型.分别对风干法、玻片覆盖法和薄膜覆盖法检测固型板材抗病毒性能进行研究.利用大肠埃希菌噬菌体M13和大肠埃希菌作为噬菌体-指示菌模型,以固型板材抗菌不锈钢板作为试验材料.抗菌不锈钢板与噬菌体作用18 h后.测定噬菌体存活数量.实验结果表明,风干法、玻片覆盖法和薄膜覆盖法检测的噬菌体杀死率分别为66.0%、30.4%和19.3%.风干法的检测效果明显优于其他2种方法.利用噬菌体-指示菌模型,采用风干法检测固型板材抗病毒性能具有可行性和实用性.     

氨苄青霉素抗性基因从质粒ER396转座到φ80噬菌体基因组的研究

前已报道抗药质粒ER396(Tc~r、Ap~r、Cm~r、Sm~r、Su~r)带有可转座的Ap抗性基因。我们用φ80噬菌体感染带有ER396质粒的大肠杆菌,分离出一株能高频转导Ap抗性的噬菌体φ80 Ap。从:(1)φ80 Ap噬菌体的Ap抗性转导子对φ80噬菌体超感染具有免疫能力;(2)φ80 Ap噬菌体在接种有Ap敏感的大肠杆菌软琼脂平板上形成的噬斑中85％以上的噬斑,其中心的溶原菌都获得了对卸的抗性;（3） φ80噬菌体抗血清能同时中和φ80 Ap噬菌休的幻抗性转导能力与噬斑形成能力等结果,我们推测φ80 AP噬菌体是由于可转座的AP抗性基因从ER396质粒转座到φ80噬菌体的基因组中而形成的。     

噬菌体肽库筛选抗人B7-H4中和抗体的模拟抗原表位及其免疫原性鉴定

目的:用噬菌体呈现随机12肽库筛选能与抗人B7-H4(h B7-H4)中和抗体特异性结合的模拟抗原表位肽,并用其免疫小鼠检测其免疫原性。方法:以抗h B7-H4中和抗体为靶分子,用体外生物淘洗法从噬菌体呈现随机12肽库中筛选与之结合的噬菌体克隆,用竞争性细胞ELISA鉴定阳性噬菌体克隆;化学合成候选多肽,并与钥孔血蓝蛋白或破伤风毒素偶联鉴定多肽的特异性;进一步用融合蛋白免疫小鼠检测其免疫原性和抗血清的补体依赖的细胞杀伤活性(CDC)。结果:经过3轮体外筛选后随机挑取50个阳性噬菌体克隆,其中20个克隆与抗h B7-H4抗体有较强的结合能力,DNA测序得到6组结构相似的肽序列;竞争性ELISA结果显示1号肽噬菌体能与细胞表面的h B7-H4竞争性地结合抗h B7-H4单抗;点杂交结果显示1号肽能特异性结合抗h B7-H4单抗;小鼠免疫实验结果显示1号肽融合蛋白能诱导高滴度的抗h B7-H4抗血清,并且抗血清具有补体依赖的细胞杀伤活性。结论:筛选得到能与抗h B7-H4中和抗体特异性结合的12肽模拟抗原表位序列并且具有免疫原性,为进一步开发h B7-H4相关的多肽疫苗提供了实验依据。     

镰刀菌细胞壁蛋白抗原模拟表位的筛选和鉴定

镰刀菌不仅能侵染小麦、大麦、玉米等粮食作物,造成作物产量严重降低,谷物中存留的镰刀菌毒素还能引发人、畜中毒,严重威胁人、畜健康。本研究以镰刀菌细胞壁蛋白特异单链抗体CWP2为靶标,淘选噬菌体随机12肽库,筛选获得两种与抗体CWP2特异结合的短肽,多肽1(YLNPPCDLYACA)和多肽2(YQSVFFTDPHEF)。竞争性酶联免疫吸附实验证实,多肽1更好的模拟了镰刀菌细胞壁蛋白的抗原表位。这是首次对镰刀菌细胞壁蛋白模拟肽的报道,为探寻CWP2所结合抗原表位的编码基因,进一步阐明CWP2介导的抗镰刀菌分子机理提供了信息和材料。同时,获得的模拟肽可直接用于家畜疫苗以及作为粮食安全检测标准品。     

脆弱类杆菌的免疫原性研究及其应用

脆弱类杆菌ATCC 25285和CDC14462分别经甲醛、超声破碎和热酚等处理,制得全菌抗原(WCA)、外膜抗原(OMA)和脂多糖抗原(LPS),其免疫血清的凝集效价以WCA抗血清最高,OMA抗血清次之,LPS抗血清最低。三种抗血清以间接免疫荧光抗体技术(IFA)检定35株脆弱类杆菌,仍以WCA抗血清检出率最高。WCA免疫原性强,免疫产生抗体效价高,能检出更多的同种菌株,且制备简便,值得选用。     

小肠结肠炎耶氏菌Vi抗原的研究

从小肠结肠炎耶氏菌发现ⅵ抗原,这是首次报道。用ⅵ抗原的抗血清测定菌株的毒力,与vw抗原和毒力因子血清测定的结果完全一致,即仅毒力株有ⅵ抗原,无毒株则无。故可肯定ⅵ抗原是小肠结肠炎耶氏菌的一种毒力抗原。利用ⅵ抗血清测定菌株的毒力,是非常简便的。     

一种用分子杂交技术检测谷氨酸生产菌溶原性的方法

谷氨酸生产菌用于发酵生产谷氨酸和其他氨基酸,由于外源噬菌体污染或者由溶原菌内诱导出的噬菌体污染,往往给工业发酵带来严重的危害,于是测定谷氨酸生产菌是否为溶原菌便成了当务之急。本文以溶原菌E.coli K_(12)为研究模型,首先用~(32)P标记的λDNA作探针,建立了检测溶原菌株的分子诊断方法,继而通过寄主菌株从生产环境样品中分离筛选到7_6和7_(?)两大类共20多株噬菌体。由该两类噬菌体制得的~(32)P-7_(?)和7_(?)探针,可分别与以生产谷氨酸的棒杆菌B_9、7338和T_(?)三个菌株为寄主,从环境样品中分离的18个和6个噬菌体分离物杂交。而采用缺口翻译系统制备的7_(?)和7_(?)混合探针,或混合使用7_(?)和(?)探针,使得检测方法更为简便易行。通过Southern Blot技术和菌落杂交对菌DNA的分析,结果表明三个寄主菌株均不是所分离的噬菌体的溶原菌。最后,本文还就烈性噬菌体和温和噬菌体之间的同源性与分子诊断的可行性作了初步探讨。     

用IgG指示试纸同时检测多种马铃薯病毒病

用硝基纤维素膜(NCM)为载体制备的抗体IgG指示试纸,可同时检测马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)的感染。以pH10.0的1％甘氨酸溶液为PVX、PVY和PVS的研磨缓冲液,比已报道的缓冲液效果好。在提取病毒抗原时加入4％纤维素酶,可提高病毒得率及所制备的抗血清灵敏度。     

亲和层析法用于噬菌体抗体库的筛选

本研究报道一种基于固定化金属亲和层析(IMAC)的噬菌体抗体库液相筛选方法。将纯化的带有His标签的抗原与噬菌体抗体库混合,噬菌体抗体与抗原充分结合后再加入亲和介质,使噬菌体抗体抗原复合物通过His标签与介质结合,然后通过充分洗涤去除非特异性噬菌体抗体,最后将特异性噬菌体抗体洗脱下来,感染TG1,进行下一轮筛选。整个筛选过程中抗原与抗体的结合在液相中完成,不仅消除了固相介质对抗原表位的影响,也更有利于噬菌体抗体与抗原的充分作用。将此方法应用于HEV NE2蛋白特异性人源噬菌体抗体的筛选,抗原竞争ELISA,阳性血清阻断,可溶性单链抗体表达检测及测序结果表明,最终获得2个特异性人源抗体。     

酶标葡萄球菌A蛋白组化法检测腺病毒抗原的研究

葡萄球菌 A 蛋白(SPA)具有与人和许多哺乳动物血清 IgC 的 Fc 段结合的特性。目前已成为一种适用范围很广的免疫试剂。近年来曾将它与辣根过氧化物酶(HRP)结合替代人工免疫制备的第二抗体(抗 IgC),用于 ELISA 法测定病毒抗体的研究,而用 HRP 标记 SPA(HRP—SPA)组化法检测病毒抗原的研究,国内尚无报导。本文是在徐氏用 HRP—SPA 法快速测定炭疽病人英膜抗体的实验研究的启发下,为了解 HRP—SPA 组化法在小儿腺病毒肺炎早期诊断上的意义。我们首先用腺病毒(AdV)模拟标本接种人胚肾(HK)单层细胞,然后涂片检测 AdV 抗原,与酶标抗体、荧光抗体法进行了特异性、敏感性比较,在实验中对 AdV 的复制做了动态观察。并于1981年冬1982年春应用本法对34例小儿肺炎患儿进行了临床诊断,现将初步结果报告如下:     

空肠弯曲菌的磁捕获_-荧光PCR检测方法的建立

为提高畜禽类食品中空肠弯曲菌的检出率和灵敏度 ,应用抗血清和磁性微珠首次制备弯曲菌免疫磁珠 ,利用弯曲菌免疫磁珠直接捕获检样中目的菌 ,不需要增菌培养 ;通过荧光PCR检测鞭毛蛋白A(flaA)基因和 或马尿酸酶 (hipO)基因 ,首次建立空肠弯曲菌的磁捕获_荧光聚合酶链反应 (IMC_FPCR)方法。IMC_FPCR法检测空肠弯曲菌方法简便易行 ,可在 2 4h内完成 ,特异性好 ,检测低限达到 10cfu mL ,抗干扰性强。IMC_FPCR方法可望解决非可培养状态的空肠弯曲菌检测难题 ,是一种适用于检验检疫、卫生防疫和农产品安全检验等领域的快速方法。     

肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白ELISA检测方法的研究

以肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白为免疫原,获得了兔抗肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白抗血清,通过硫酸铵分级沉淀与吸附法相结合的方法对抗血清进行纯化,并在此基础上建立了肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白间接ELISA检测方法.该检测方法的检测灵敏度为0.031 mg/L,线性检测范围为2.5～30.0 mg/L,批内误差为1.04％～3.22％,批间误差为2.61％～8.35％.