利拉鲁肽下调游离脂肪酸作用下βTC3 细胞PERK 的表达

目的:探讨游离脂肪酸(FFA)作用下胰岛βTC3细胞双链RNA依赖性蛋白样内质网激酶(PERK)的表达以及利拉鲁肽(Lira)对其表达的干预作用。方法:以βTC3细胞为研究对象,分为对照组和FFA组(0.125,0.25,0.5及1 mmol/L)孵育24 h,Westernblot方法检测PERK的表达。然后,分为对照组,FFA组,和FFA+Lira组(0.5 mg/L和1 mg/L),Lira预孵育6 h后,1 mmol/L FFA继续孵育24 h,Western blot检测PERK的表达。结果:①不同浓度FFA孵育24 h后,与对照组相比,1 mmol/L FFA组PERK表达增加(P<0.05)。②与1 mmol/L FFA组相比,0.5mg/L Lira+1 mmol/L FFA和1 mg/L Lira+1 mmol/L FFA组PERK表达减少(P<0.05),两组之间有统计学差异(P<0.05)。结论:FFA作用能够上调βTC3细胞PERK的表达,而Lira在一定程度上逆转FFA水平异常导致的βTC3细胞PERK表达上调,减轻内质网应激反应。     

人肾小球血管内皮细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的:采用不同浓度的棕榈酸与葡萄糖在体外诱导建立人肾小球内皮细胞(Human glomerular endothelial cells,HRGEC)胰岛素抵抗模型。方法:以人肾小球内皮细胞为研究对象,不同浓度棕榈酸(100,200,300,400,500μmol/L)与不同浓度的葡萄糖(20,30,40,50,60 mmol/L)分别作用细胞24小时和48小时,应用MTT法和葡萄糖氧化酶法检测棕榈酸和葡萄糖对HRGEC存活率与葡萄糖消耗量的影响,蛋白免疫印迹法检测P-IRS、IRS、AKT和p-AKT (Ser473)的影响。结果:1、当棕榈酸500μmol/L干预细胞24小时,与正常组比较,细胞活性显著下降(P0.01),棕榈酸浓度大于或等于300μmol/L干预细胞48小时,细胞存活率显著降低(P0.01)。与空白组比较,300μmol/L、400μmol/L、500μmol/L棕榈酸干预细胞24小时能够明显的降低细胞的葡萄糖消耗(P0.05);200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L、500μmol/L干预细胞48小时能够明显的降低细胞的葡萄糖消耗(P0.01)。2、不同浓度葡萄糖刺激人肾小球内皮细胞(HGREC)24小时和48小时,与空白组比较,各组细胞的存活率与对照组比较均无显著变化(P0.05)。与空白组比较,40mmol/L、50 mmol/L、60 mmol/L葡萄糖干预细胞24小时能够降低人肾小球内皮细胞的葡萄糖消耗(P0.05)。与空白组比较,30mmol/L、40mmol/L、50 mmol/L、60 mmol/L葡萄糖干预细胞48小时能够明显降低人肾小球内皮细胞的葡萄糖消耗量(P0.01)。3、不同浓度的葡萄糖刺激人肾小球内皮细胞(HGREC)24小时后,结果显示,50 mmol/L、60 mmol/L葡萄糖刺激细胞24小时能降低P-IRS/IRS和p-AKT/AKT (Ser473)的水平(P0.01),而其他组无明显显著变化(P0.05)。结论:高糖诱导方法能够建立HRGEC细胞胰岛素抵抗模型,具有建模周期短、容易重复、可控性强的优点,可用于糖尿病胰岛素抵抗机制的研究和中药成分的筛选研究。     

谷胱甘肽与富氢冻存液在鸡血细胞冻存中的保护作用

目的通过观察细胞冷冻复苏后的存活率及凋亡情况,探讨细胞冻存液中添加谷胱甘肽(GSH)和氢气(H_2)对细胞的保护作用。方法在冻存液中添加GSH和/或通入H_2后冻存鸡血细胞,1个月后复苏,采用台盼蓝拒染和MTT法分别检测细胞存活率与细胞活性,流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果 GSH、H_2或H_2+GSH处理使细胞活力明显提高,而早期凋亡率明显降低。结论谷胱甘肽与富氢冻存液对鸡血细胞冻存具有保护作用。     

三种植物源杀虫活性成分对东方粘虫中肠细胞的毒力测定

采用MTT([3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基]四氮唑溴盐)比色法、中性红摄取法和台盼蓝拒染法,分别测定植物源杀虫活性成分苦皮藤素Ⅴ、白鲜碱和梣皮酮对中肠细胞的毒力。结果表明:急性分离的东方粘虫中肠细胞能在Grace’s昆虫细胞培养基中维持生长;3种供试药剂对中肠细胞均有明显的细胞毒性。MTT比色法、中性红摄取法和台盼蓝拒染法测得苦皮藤素Ⅴ对中肠细胞的LC50依次为9.0,7.79和10.94μg/mL;白鲜碱为27.85,31.77和36.42μg/mL;梣皮酮为186.66,164.00和192.34μg/mL。     

槲皮素下调hTERT表达对肝癌HepG2细胞生长影响研究

目的观察槲皮素对肝癌HepG2细胞生长及对hTERT基因表达的影响。方法以台盼蓝拒染法计数肝癌细胞的生长抑制率,透射电镜从形态变化上了解凋亡的发生,流式细胞术检测细胞周期变化,western-blot、RT-PCR检测hTERT基因表达改变,PCR-TRAP法检测端粒酶活性。结果台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用明显,且呈浓度和时间依赖性,槲皮素处理48h后的Ic50为25.5μm。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化,流式细胞仪检测表明经10～20μm/L的槲皮素处理,肝癌HepG2细胞周期阻滞于G0/G1期,且HepG2细胞hTERT蛋白和mRNA表达降低,端粒酶活性受抑制。结论槲皮素能抑制肝癌细胞的生长,呈时间、剂量依赖性,能诱导HepG2细胞发生凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

Exendin-4对甲基乙二醛诱导PC12细胞氧化应激的影响

目的：探讨肠促胰岛素类似物（Ex-4）对甲基乙二醛（MG）诱导PC12细胞氧化应激的影响及其机制。方法：传代培养PC12细胞,不同浓度MG（0、0.25、0.50、0.75、1.0、2.0 mmol/l）处理PC12细胞12~48 h,或用不同浓度Ex-4（25、50、100、200 nmol/L）预处理24 h后加用MG（0.75 mmol/L）干预24 h后,MTT比色法检测细胞存活率;荧光探针法检测活性氧（ROS）含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD）活力。Ex-4（100nmol/L）预处理PC12细胞24h加用MG（0.75 mmol/L）干预1 h后,Western blot检测蛋白P-IκB-α、IκB-α表达情况。结果：随着MG浓度的增加和作用时间的延长,PC12细胞存活率逐渐降低;加用不同浓度Ex-4预处理后,PC12细胞存活率较单独MG处理组逐渐升高。100 nmol/L的Ex-4预处理PC12细胞后,ROS表达量较MG单独处理组下降65.30%（P<0.01）; NAC预处理组（阳性对照）ROS表达量下降107.40%（P<0.01）;Ex-4预处理组SOD活力增加5.30 U/mg prot（P<0.01）;NAC预处理组SOD活力增加8.53 U/mg prot（P<0.01）。Ex-4预处理组P-IκB-α/IκB-α表达比例下降25.50%（P<0.01）; NAC预处理组P-IκB-α/IκB-α表达比例下降35.14%（P<0.01）。结论：Ex-4浓度依赖性地增加MG诱导的PC12细胞的存活率。Ex-4能够减轻MG诱导的PC12细胞的氧化应激,其机制可能涉及抑制蛋白IκB-α的活化。     

高糖环境下beclin2介导的自噬增强绒毛膜滋养层细胞凋亡

目的探讨高糖对人绒毛膜滋养层细胞早期凋亡及自噬水平的影响。方法取足月妊娠的正常及妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者的胎盘组织,透射电镜观察滋养层细胞超微结构的改变。体外用不同浓度的含糖培养基培养滋养层细胞系HTR8/Svneo细胞24h,分为低糖组(1.57mmol/L或LG2 2.25mmol/L),正常对照组(5.57mmol/L)和高糖组(10.57mmol/L、15.57mmol/L或40.57mmol/L);流式细胞术检测细胞早期凋亡率;q-PCR检测细胞内beclin1、beclin2和ATG7等自噬相关基因的m RNA表达水平;Western blot检测Ⅱ型自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3-II)和p62蛋白表达水平。结果透射电镜下可见GDM组滋养层细胞中存在自噬小体且空泡数目明显多于正常足月妊娠组,其游离面微绒毛出现明显倒覆及坍塌现象;在体外培养的滋养层细胞中,流式细胞术检测显示1.57mmol/L低糖组及40.57mmol/L高糖组较正常对照组HTR8/SVneo细胞的早期凋亡率均明显增加;q-PCR分析发现40.57mmol/L高糖组beclin2及ATG7 m RNA表达水平较正常对照组升高,beclin1 m RNA表达无差异;Western blot检测表明,与正常对照组比较,40.57mmol/L高糖组LC3-II蛋白表达水平升高,p62蛋白表达水平降低。结论高糖可通过beclin2介导的自噬信号途径增强滋养层细胞自噬水平进而导致细胞凋亡,并可能与不良的妊娠结局相关。     

十八碳二烯酸对神经胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的:探索十八碳二烯酸(ODA)抑制神经胶质瘤细胞增殖与促凋亡作用及其机制。方法:取培养的人神经胶质瘤细胞(细胞密度2×10⁶ cells/L)分为溶剂对照组(给予DMSO,含量为30μl/L)、5-FU组(含量10 mg/L)和十八碳二烯酸组(设0.3、0.6、1.2 mg/L三个剂量组)。用台盼蓝、噻唑蓝(MTT)检测ODA对神经胶质瘤细胞的毒性作用,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测神经胶质瘤细胞P53、PI3K、P21、PKB/Akt、caspase-9蛋白表达水平。结果:(1)光学显微镜细胞计数显示：ODA低、中、高剂量组和5-FU组细胞增殖抑制率比溶剂对照组显著升高(P<0.01),与5-FU组相比差异无统计学意义(P>0.05)。(2)MTT检测结果显示：与溶剂对照组相比,ODA低、中、高剂量组和5-FU组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01);与5-FU组相比,仅ODA高剂量组细胞增殖抑制率显著增加(P<0.01)。(3)流式细胞仪检测结果显示：与溶剂对照组相比,ODA低、中、高剂量组和5-FU组G₀/...     

人参皂苷Rb1调节脑微血管NOS/NO改善脑细胞膜通透性

目的:探究人参皂苷Rb1在脂多糖(LPS)诱导的人脑微血管细胞模型中对脑细胞膜通透性的影响。方法:采用噻唑蓝比色法(MTT)及乳酸脱氢酶(LDH)释放检测不同浓度人参皂苷Rb1对LPS刺激人脑微血管内皮细胞系(HBMEC)存活率的影响;采用EVOM法检测HBMEC细胞通透性;采用Griess法、ELISA法及DAF-FM DA荧光探针分别检测NO、ONOO~-含量及eNOS、iNOS活性;Western blot法检测p-eNOS(ser1177)、iNOS蛋白的表达水平。结果:与正常对照组比较,LPS(5μg/m L)可明显降低HBMEC细胞存活率(P0.01);与LPS组比较,随着人参皂苷Rb1浓度的增加细胞存活率明显升高,且中、高剂量组(40、80μmol/L)具有显著性差异(P0.05、P0.01);LPS导致HBMEC单层细胞电阻值明显降低(P0.01),人参皂苷Rb1高剂量组(80μmol/L)可显著抑制LPS所致的细胞膜通透性升高(P0.05);LPS可明显降低HBMEC细胞NO含量(P0.01)升高ONOO~-含量(P0.05),人参皂苷Rb1中、高剂量组(40、80μmol/L)较LPS组具有显著升高NO含量,降低ONOO~-含量的作用(P0.05);与正常对照组比较,LPS组可明显降低HBMEC细胞磷酸化eNOS (ser1177)蛋白的表达水平,而显著升高iNOS蛋白表达水平(P0.01)。人参皂苷Rb1高剂量组(80μmol/L)较LPS组可显著升高p-eNOS(ser1177)蛋白的表达水平,降低iNOS蛋白的表达水平(P0.05)。结论:人参皂苷Rb1可有效降低iNOS活性,升高eNOS活性继而减少NO水平及ONOO~-含量,显著降低LPS导致的脑细胞膜通透性升高。     

二甲双胍联合塞来昔布对胰腺癌细胞增殖及Caspase-3活性的影响

目的:探讨二甲双胍和塞来昔布单独或联合应用对胰腺癌细胞增殖和Caspase-3活性的影响。方法:体外培养人胰腺癌BxPC-3和As PC-1细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度二甲双胍和塞来细胞对胰腺癌细胞存活率的影响。联合实验分4组:对照组、二甲双胍组(MET,15 mmol/L)、塞来昔布组(CEL,100μmmol/L),二甲双胍和塞来昔布联合组(MET 15 mmol/L+CEL100μmmol/L),孵育48 h,用MTT检测细胞存活率,用Caspase-3比色测定试剂盒测定Caspase-3活性。结果:二甲双胍和塞来昔布单药均可以时间和剂量依赖性方式降低胰腺癌Bx PC-3和As PC-1细胞的生存率。两种细胞系的各加药组细胞存活率与对照组比较差异均存在统计学意义(P0.01),联合实验组的细胞存活率明显低于单独用药组(P0.01)。二甲双胍和塞来昔布单药处理的胰腺癌Bx PC-3和As PC-1细胞Caspase-3活性均显著高于对照组(P0.01),二甲双胍和塞来昔布联合实验组Caspase-3活性均明显高于单药处理组和对照组(P0.01),但二甲双胍组和塞来昔布组之间的Caspase-3活性比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:二甲双胍和塞来昔布联合作用可协同抑制胰腺癌细胞的增殖,并通过激活Caspase-3活性促进胰腺癌细胞的凋亡,其联合应用可能成为胰腺癌药物治疗的有效策略。     

miR-29a靶向调控PDGFB促进非小细胞肺癌细胞凋亡

为了探究miR-29a对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制,本研究通过荧光定量PCR检测肺癌组织、癌旁组织、肺癌细胞以及人正常肺支气管上皮细胞BEAS-2B中miR-29a的表达,在肺癌A549转染miR-29a mimics后,使用荧光定量PCR和CCK-8法分别检测miR-29a的表达以及各组细胞的活力,使用流式细胞术检测A549细胞凋亡;通过荧光定量PCR检测肺癌组织、癌旁组织PDGFB m RNA的表达,采用Western blot检测PDGFB蛋白的表达;使用双荧光素酶报告基因检测miR-29a可能的靶基因;在肺癌A549细胞转染miR-29a mimics后继续转染PDGFB过表达质粒,通过qPCR和Western blotting分别检测PDGFB mRNA和蛋白的表达。结果表明,与癌旁组织相比,miR-29a在肺癌组织的表达显著下调(p<0.01),PDGFB在肺癌组织的表达显著增加(p<0.01);转染miR-29a mimics后,肺癌A549细胞中miR-29a表达显著增加(p<0.01);CCK-8法结果显示miR-29a mimics组A549肺癌细胞在24 h和48 h后细胞增值率较miR-NC对照组显著降低(p<0.01);流式细胞术结果显示miR-29a mimics组的细胞凋亡率较miR-NC对照组显著增加(p<0.01);与miR-NC+PDGFB 3’UTR WT组相比,miR-29a mimics+PDGFB 3’UTR WT组的荧光强度显著降低(p<0.01);荧光定量PCR和Western blotting显示miR-29a mimics+PDGFB组PDGFB m RNA和蛋白表达量与miR-29a mimics+vector组相比显著增加(p<0.01)。本研究结果表明miR-29a在肺癌组织和肺癌细胞株中低表达,及抑制PDGFB的表达并且促进肺癌细胞凋亡。     

氟代柠檬酸对体外培养的神经胶质瘤细胞G422增殖的抑制效应

为研究氟代柠檬酸(Fluorocitrate)对体外培养的神经胶质瘤细胞生长的影响,采用MTT法研究不同的氟代柠檬酸浓度(0.0025mmol/L,0.005mmol/L,0.01 mmol/L,0.025mmol/L和0.1 mmol/L)和作用时间(36h,48h和60h)对神经胶质瘤细胞G422增殖的影响.结果发现:(1)氟代柠檬酸可抑制G422细胞的增殖,并且其抑制作用随氟代柠檬睃浓度的增加而增强;(2)高浓度(0.01 mmol/L,0.025 mmol/L和0.1 mmol/L)氟代柠檬酸对G422细胞的增殖抑制作用随作用时问的延长而增强:(3)低浓度(0.0025mmol/L和0.005mmol/L)氟代柠檬酸对G422细胞的增殖抑制作用不随作用时间的延长而改变.实验表明,氟代柠檬酸能够抑制神经胶质瘤细胞的增殖,其抑制能力随氟代柠檬酸浓度的增加和作用时间的延长而加强.     

人参皂苷Rb1、Rg1、Re对白血病细胞株KG1α增殖的影响

目的:探讨人参皂苷Rb1、Rg1、Re对急性髓系白血病细胞株(KG1α)增殖的影响.方法:取对数生长期KG1α细胞,分设人参皂苷Rb1、Rg1、Re组和常规培养组,以MTT比色法检测作用24h、48h、72h时对KG1α细胞增殖抑制作用,并计算Rb1的IC_(50)值,以此浓度为工作浓度,设常规培养组和处理组,台盼蓝计数法观察对KG1α细胞增殖的影响;流式细胞术测定细胞周期分布的变化.结果:MTT、台盼蓝计数显示人参皂苷单体Rb1、Rg1可抑制KG1α细胞增殖,呈浓度依赖性,以Rb1抑制效应最佳,于作用48h抑制率最高.台盼蓝计数显示人参皂苷单体Rb1-120μmol/L作用48h时抑制率达50.22%;流式细胞术结果提示,与对照组比较,Rb1-120μmol/L组G_2/M期KG1α细胞比例增加(P<0.05).结论:Rb1可抑制KG1α细胞体外增殖,其增殖抑制作用与将KG1α细胞阻滞于G_2/M期有关.     

葡萄糖氧化酶诱导肝细胞氧化应激模型的建立

目的:研究不同浓度葡萄糖氧化酶(GO)对人肝细胞L02氧化应激水平的影响,以确定建立肝细胞氧化应激模型的合适浓度。方法:用不同浓度GO干预L02肝细胞2h,MTT法检测细胞的存活率,流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS),荧光强度(FI)来表示ROS水平。分光光度法检测检测细胞MDA、GSH,速率法检测细胞培养液LDH、AST和ALT的水平。结果:①随GO浓度增加,肝细胞的存活率逐渐降低,其中75U/L、100U/L和125U/L组存活率显著低于对照组(P<0.05)。②随GO浓度增加,MDA含量逐渐增高,其中50U/L、75U/L、100U/L、125U/L组MDA水平较对照组显著增高(P<0.05)。GSH水平随GO浓度增高而逐渐减低,各干预组较对照组均显著降低(P<0.05)。GO各干预组FI均较对照组显著降低(P<0.05)。③各干预组LDH活性均显著高于对照组(P<0.05),50U/L、75U/L、100U/L、125U/L干预组AST与ALT水平均较对照组显著增高(P<0.05)。结论:GO能引起的肝细胞氧化应激损伤有剂量依赖性,100U/L是建立肝细胞氧化应激的合适浓度。     

维生素C联合替莫唑胺对胶质瘤细胞的毒性作用及其机制*

目的:探讨维生素C(VC)联合替莫唑胺(TMZ)对胶质瘤细胞活力的毒性作用及其机制。方法:在体外条件下培养人胶质瘤细胞BMG-1和SHG44细胞,设对照组(不施加VC与TMZ)、TMZ组(0.2 mmol/L)、VC(0.5 mmol/L)+TMZ(0.2 mmol/L)组,TMZ(0.2 mmol/L TMZ)+U0126(10 μmol/L)组,每组实验重复3次。采用MTT实验检测细胞生存率;流式细胞术和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡情况; ROS检测试剂盒检测活性氧簇(ROS)水平, Western blot检测与凋亡、自噬及ERK通路相关蛋白的表达。结果:与对照组比较,TMZ组胶质瘤细胞的存活率显著下降(P＜0.05)。与TMZ组比较,VC+TMZ组胶质细胞瘤细胞的存活率显著下降(P＜0.01),VC+TMZ组中细胞凋亡率显著升高,且Bax、Cleaved caspase-3及Cleaved PARP蛋白表达显著增加,Bcl-2表达显著降低,而ROS水平及细胞自噬率显著降低,LC3-II/LC3-1表达显著降低,p62表达显著增加(P均＜0.05)。同时,联用可降低BMG-1和SHG44细胞中的p-ERK1/2相关蛋白的表达水平,且提高细胞凋亡率(P均＜0.05)。结论:VC联合TMZ能够增强对胶质瘤细胞的毒性,而这一作用是通过ERK信号通路来促进细胞凋亡并抑制替莫唑胺所介导的自噬作用。     

Pten基因沉默可抑制子宫内膜细胞增殖

本研究将Pten-siRNA转染至子宫内膜细胞,通过蛋白免疫印迹检测子宫内膜细胞中Pten蛋白的表达情况;通过MTT法检测Pten-siRNA转染组和空质粒转染组(对照组)细胞增殖状态;通过蛋白免疫印迹检测Pten-siRNA转染组和对照组子宫内膜细胞中PCNA、Ki67蛋白表达情况;通过流式细胞仪检测子宫内膜细胞Pten-siRNA转染组和对照组中ROS的水平,以探究Pten基因对子宫内膜癌发生发展的影响。研究表明,Pten-siRNA转染后,子宫内膜细胞中Pten蛋白明显低于对照组;Pten-siRNA转染后,子宫内膜细胞增殖率显著高于对照组(p<0.05);Pten-siRNA转染后,细胞增殖相关蛋白PCNA和Ki67明显高于对照组(p<0.05);Pten-siRNA转染后,子宫内膜细胞中ROS水平明显低于对照组(p<0.05)。本研究初步结论显示Pten-siRNA可降低子宫内膜细胞中Pten蛋白表达,抑制子宫内膜细胞的增殖并增加子宫内膜细胞中ROS水平。     

miRNA-21反义核酸对人淋巴瘤Raji细胞的生长抑制作用研究

为研究以miRNA-21为靶标的反义核酸（AMO-miR-21）对淋巴瘤Raji细胞的生长抑制作用,使用LipofectamineTM 2000将化学合成的反义核酸转染Raji细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率;实时定量PCR技术检测细胞miRNA-21水平改变;PI和Annexin V双染,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果显示转染Raji细胞48～72h,反义核酸组细胞生长受到明显抑制,反义核酸抑制细胞活性的最佳浓度是0.4μmol/L;细胞内miRNA-21的表达水平明显下调;细胞凋亡明显增加;此外,反义组细胞中抑癌基因Pdcd4的mRNA和蛋白质呈高水平表达.提示以miRNA-21为靶标的反义核酸是人淋巴瘤Raji细胞生长的有效抑制剂和凋亡诱导剂.miRNA-21可能是淋巴瘤治疗的潜在靶标,其通过下调抑癌基因Pdcd4的表达水平发挥抗肿瘤作用.     

H2O2致体外培养动脉内皮细胞损伤及山莨菪碱保护

目的:实验以过氧化氢(H2O2)损伤体外培养动脉内皮细胞(AEC),对过氧化氢介导内皮细胞损伤、凋亡的机制进行探讨,观察山莨菪碱(Ani)是否抑制H2O2介导的AEC损伤、凋亡,并探讨Ani保护损伤、凋亡的机制.方法:体外培养AEC随机分组:对照组(正常培养AEC);H2O2损伤组(0.5 mmol/L H2O2损伤12 h);Ani组(不同浓度Ani:0.05,0.1,0.2 mg/mL处理45 min后加0.5 mmol/L H2O2损伤12 h).结果:1.低浓度H2O2(0.5 mmol/L)可以损伤AEC并诱导凋亡.H2O2损伤组台盼蓝着染率及LDH释放率均高于对照组(P<0.01);细胞总抗氧化能力(T-AOC)下降(比对照组P<0.01);琼脂糖凝胶电泳发现凋亡细胞的梯状电泳条带;细胞荧光染色见凋亡形态特征.2.Ani对H2O2诱导的内皮细胞损伤具保护作用.Ani组与H2O2损伤组比较,台盼蓝着染率及LDH释放率下降;T-AOC上升;在Ani 0.2 mg/mL组DNA琼脂糖凝胶电泳未见凋亡细胞特征性的梯状电泳条带;荧光染色未见凋亡细胞特征.结论:1.低浓度过氧化氢使AEC总抗氧化能力明显下降,耗竭细胞抗氧化能力,可致AEC的损伤、凋亡.2.山莨菪碱能减少AEC抗氧化能力的消耗,维持抗氧化能力平衡,保护0.5 mmol/L H2O2 介导的AEC损伤、凋亡.     

贴壁培养细胞台盼蓝拒染试验的方法学探讨

本工作旨在探讨贴壁培养细胞台盼蓝拒染试验的方法,为其合理应用提出建议.用正常培养及NaN3作致死处理的人视网膜色素上皮细胞株-19,进行原位贴壁细胞和培养体系上悬液中细胞的台盼蓝拒染实验,并比较其原位法与计数板法所测活细胞率.与计数板法相似,随染液浓度增高或染色时间延长,原位台盼蓝拒染实验的活细胞率检测值逐渐增加.培养...     

一氧化氮供体对过氧化氢引起的心肌细胞损伤的保护作用

关于一氧化氮(NO)对心肌细胞是否具有保护作用目前尚存在争议,为探讨NO对过氧化氢(H2O2)引起的心肌细胞损伤是否具有保护作用及其可能的机制,实验将体外培养的新生大鼠心肌细胞分为3组(1)阴性对照组(Normal组);(2)H2O2组H2O2(0.1mmol/L)与心肌细胞共育4h;(3)S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP)+H2O2组NO供体SNAP(0.5mmol/L)处理心肌细胞10min后,加入H2O2与心肌细胞共育4 h.用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,心肌细胞损伤程度以心肌细胞存活率和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性来表示,同时检测心肌细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.通过激光共聚焦显微术检测在不同处理条件下心肌细胞胞内钙的变化.结果表明,正常心肌细胞LDH活性和细胞存活率分别为631.4±75.6 U/L和93.1±6.2%,细胞凋亡率为0;H2O2处理细胞后可使细胞LDH活性显著增高(1580.5±186.7 U/L,P＜0.01),细胞存活率明显下降(58.3±7.6%,P＜0.01),流式细胞仪检测到大量心肌细胞凋亡,凋亡率为26.4±5.7%;SOD活性较正常细胞19.67±0.85 NU/ml显著下降,为14.73±1.68 NU/m(P＜0.01),MDA含量较正常细胞6.95±0.83μmol/L显著增高,为15.35±3.49μmol/L(P＜0.01).SNAP预处理细胞可显著提高心肌细胞存活率(79.7±9.3%,P＜0.01),降低LDH活性和细胞凋亡率(分别为957.8±110.9 U/L和9.1±3.3%,P＜0.01);并提高细胞抗氧化能力,表现为较H2O2处理组的SOD活性增高(21.36±3.11 NU/ml,P＜0.01),MDA含量下降(9.12±1.47 μmol/L,P＜0.01).激光共聚焦显微镜检测结果表明,H2O2可升高细胞内钙,而SNAP则可降低细胞内钙,SNAP预处理细胞后可取消H2O2升高细胞内钙的作用.上述结果提示,NO供体SNAP可对抗H2O2对心肌细胞的损伤,其机制与提高心肌细胞抗氧化损伤能力和对抗H2O2引起的细胞内钙超载有关.