水绵接合生殖的诱导培养

水绵接合生殖的诱导培养闫志佩（山东省枣庄师专生物系,２７７１６０）水绵（Ｓｐｉｒｏｇｙｒａｃｏｍｍｕｎｉｓ（Ｈａｓ）Ｋüｔｚｉｎｇ）是绿藻门（Ｃｈｉｏｒｏｐｈｙｔａ）的重要代表植物,广泛分布于淡水池塘、河沟、水田等静水水体中。在春、秋季生长繁盛时常大...     

植物学实验教学的探索(续)

藻类植物时间 3月中旬第一课时课题绿藻——衣藻实验内容从绿色池水中寻找衣藻和其他绿色单细胞藻类。目的要求认识衣藻的形态结构和生活习性。第二课时课题绿藻——水绵实验内容 1.制作水绵装片进行观察;2.制作水绵接合生殖的装片进行观察。目的要求在观察过程中要求学生比较水绵与衣藻的异同;从相同点提出绿藻的特征,从不同点说明水绵是多细胞丝状体。第三课时课题其它藻类植物     

衣藻、水绵的采集和观察

要观察衣藻和水绵的结构特征,以及水绵接合生殖的过程,首先必须采集标本。淡水藻类繁多。采集时,要根据不同藻类植物、不同环境条件和生态特点,准确地采集所需要的标本。衣藻喜生于有机质较少的静水里,如果是在有机质较丰富的水体中采集标本,大多是眼虫而不是衣藻。水绵则常生活在酸性、缺钙的水中,如酸性的红壤土地带的积水、沼泽及水库下游积水处。     

中学生物实验的一些改进措施

1　质壁分离实验1.1　取材　紫洋葱。用紫洋葱肉质鳞叶表面叶尖处紫色较深的部分为材料 ,因质壁之间反差较大 ,区别明显易于观察。1.2　去水　实验前 2～ 4 h将洋葱鳞叶剥离成单片 ,晾于阴凉、干燥和通风处。此时表皮细胞逐渐失水 ,膨压趋近于零 ,经高渗溶液稍加作用 ,质壁迅速分离 ,观察效果显著提高。2　水绵结合生殖观察盛夏 ,水绵进行旺盛的营养生长 ,很难觅到结合生殖体。此时可将采到的水绵用清水洗净 ,在低于 2 0℃的暗室中用不含无机养料的蒸馏水或雨水培养 ,不出 3d,结合生殖现象比比皆是。无低温暗室的条件时 ,可用冰箱把蒸馏水降…     

高中生物学植物实验五则

高中生物学中,第三章提到:衣藻的同配生殖,水绵的结合生殖,根霉的孢子生殖,苔藓植物与蕨类植物生活史等方面的内容,这部分材料中如衣藻的同配生殖、水绵的结合生殖、苔藓植物的原丝体,蕨类植物的原叶体在野外很难采集到,因此,组织学生观察有些难处,笔者在自巳的教学实践中,摸索出一些简易方法,提出来供参考。     

嗜热四膜虫接合生殖周期皮层骨架蛋白组分的比较

嗜热四膜虫（Tetrahymena thermophila）BF株BF1、BF5系细胞为材料,根据显微观察将其接合生殖周期分为四个特定的阶段,采用生化抽提和SDS－PAGE及扫描、数据统计,分析了营养期与接合生殖前期、中期、末期同类蛋白质组成。发现80KD、87KD和88KD仅在营养期和接合前期;90.5KD、85.5KD和66KD则存在于接合生殖的各时期。这些蛋白的缺失与出现,可能与小核的减数分裂、合子的形成及分裂、接合区的形成有着某种联系。     

四膜虫S1营养生长和有性过程中cAMP的含量变化

用放射免疫法测定了四膜虫在群体生长各阶段和在有性过程中cAMP的含量变化。在群体生长的延迟期(Lag phase)之末,即将进入对数期时,cAMP含量出现一个峰值。随着对数期的进展,cAMP含量陆续下降,在对数期之末,cAMP含量降至最低值。群体进入静止期后,细胞内cAMP含量略有回升。 在饥饿诱导接台的过程中,细胞内cAMP含量在开始饥饿的很短时间内即迅速降至一个最低点,并且在整个接合过程中一直保持较低的水平。接合抑制剂伴刀豆球蛋白A(CoaA)和精胺(spermine)等在抑制接合的同时,也阻止饥饿细胞cAMP含量的迅速下降,使之不能达到在正制情况下接合出现时所达到的低水平。 在饥俄细胞的培养液中检出了较高量的cAMP。这可能有助于说明何以饥饿细胞的cAMP含量能够在很短时间内迅速下降。至于排出的cAMP对四膜虫的接合有无促进或其他作用,有特继续研究。     

嗜热四膜虫五个hsp70基因的表达分析

鉴定得到嗜热四膜虫13个含有完整保守结构域的hsp70基因,对其中5个高度相似且无内含子的hsp70基因进行表达分析。在37、39和41℃热激条件下,实时荧光定量PCR结果表明,hsp70-2基因对热激响应最敏感。在四膜虫生长、饥饿和接合生殖这3种生理或发育状态下,Microarray结果显示,hsp70-4基因恒定且高表达;在热激条件下,hsp70-4基因的表达水平随着温度的升高而略微增加,证实hsp70-4基因为热休克相关蛋白hsc70基因;克隆的hsp70-4基因全长2208bp,开放阅读框长1959bp,编码653个氨基酸。Microarray结果提示,hsp70-3可能参与四膜虫饥饿早期(0～12h)的耐受和接合生殖后期(6～10h)的新大小核形成,老大核凋亡等事件;hsp70-5可能参与四膜虫饥饿晚期(12～15h)的耐受和接合生殖早期(0～6h)的小核减数分裂、小核交换和原核(pronuclear)融合事件。Blast2GO分析表明,与hsp70-3和hsp70-5共表达的基因分别参与不同的生物学过程,进一步反映了hsp70-3和hsp70-5这两个基因在功能上是存在差异的。     

四膜虫S1有性生殖的电镜观察 Ⅰ.小核的成熟分裂和核内微管系统

关于本株四膜虫的接合生殖,包括接合前的行为、减数分裂、核的分化以及接合后体的发育等,我们曾进行过光学显微镜的观察(陈阅增等1982)。我们发现本株四膜虫在接合前有聚集成团的现象,克隆内接合形成的接合后体能正常分裂,并产生正常的大核系     

肺炎克雷伯氏菌VBNC状态转化突变株的筛选与特性研究

采用双亲本接合法对从文山湖富营养化水体中分离得到肺炎克雷伯氏菌进行Tn5转座子插入诱变,在含四环素和卡那霉素的LB培养基上获得接合子,利用饥饿冷冻高渗透压法对接合子进行细菌VBNC状态转化突变株的筛选和特性的研究。结果表明,带有卡那霉素基因的Tn5成功地插入到了肺炎克雷伯氏菌的染色体中,在双抗性培养基上获得约2.3×104 cell/mL的接合子,转座效率为6.58×10-4。对多个接合子和对照肺炎克雷伯氏菌的诱导、筛选及比较,发现KPQT-7是最快进入VBNC状态的突变株,该突变株在胁迫诱导9d后超过30%的细胞都进入了VBNC状态,而对照的肺炎克雷伯氏菌至少要在诱导21d后才大部分进入VBNC状态。在此基础上,对VBNC转化突变株KPQT-7作进一步的遗传学分析将会为细菌VBNC状态分子机理的研究奠定坚实的基础。     

棘尾虫接合期间染色体行为的观察

本文对棘尾虫接合生殖各时期的小核发育及染色体行为进行了观察,见到接合期间每种属于小核的分裂均有染色体的形成。获得了小核减数分裂的清晰图象。在蛋白银制品上发现了核内非染色体成分的细微细微结构、初充了前人观察的不足。     

棘尾虫有性生殖的发动和诱导自配的研究

本文观察了棘尾虫的接合反应。按照接合早期接合状态的变化,将接合反应分成10个时期,并将不同时期的接合对人工拆开,令其继续发育,然后计算每一时期中由营养虫转变为有性过程的虫体的百分比。结果表明,有性过程的发动是在Ⅳ期。一旦发动即不能逆转。将Ⅳ期被拆开的虫体横切成相等的前后切块,发现一些前切块由营养状态转变为有性状态,发生了自配,而所有后切块保持营养状态,发生了再生。这一现象意味着有性过程的发动不是整个细胞的一种突然改变,看来是一种从前向后的信息传递过程。用上述人工方法诱导出棘尾虫的自配,核器发生的观察表明,自配体中的桉行动和自配后体中核胚基的发育,所有这些核的事件都与接合生殖的相似,只不过没有两个配偶之间迁移原核交换罢了。对伴随着自配发生皮层重组也做了观察,自配的形态发生也与接合中的一样。     

草履虫接合的培养

草履虫的接合現象,在动物学的教学中是观察单細胞动物进行接合生殖重要的实驗材料。同时,草履虫的接合过程又常被采用为細胞学与細胞化学的研究材料。因此,这种材料簡便的培养方法是很需要的。本人在培养草履虫的接合实驗中获得点滴經驗,作以介紹。我們通常采用自来水,在缺乏营养的条件下进行培养,但往往得不到理想的結果。在本人实驗的經驗中认为,其主要原因是草履虫的密度不够大,如果密度在每毫升能够达到1000个以上,在一般室温(20℃—30℃),避开直射光线(不     

原生动物的生殖

原生动物(Protozoa)属于真核生物(Eu-karyota)的单细胞动物,身体微小,但功能俱全,能执行多细胞动物包括生殖作用的各种生理功能。它们分布很广泛,海洋、淡水、潮湿的土壤、动植物的体内都有,这种广泛的分布和它们的生殖方式多样性有密切联系。近年来不少人利用原生动物取材容易、培养方便、繁殖快等优点作为实验材料,进行多方面的研究,如前人曾在贝尾棘虫(Stylonychiamytilus)的无性生殖中进行细胞质的切割实验,研究了细胞的核质关系,又如对其接合生殖的研究中,发现贝尾棘虫在接合生殖期间核对形     

棘尾虫无小核镜像骈体的获得及其生殖行为的实验观察

用在分裂期进行显微手术的方法和在陈旧培养中诱导的方法,从贻贝棘尾虫天然无小核系S_(10)中获得了无小核镜像骈体。对骈体的各种生殖行为进行了观察,并用孚尔根和改进的黑色素染色技术揭示了它们的细胞学细节。发现在本文描述的无小核骈体和过去报告的有小核骈体之间,在二分裂和生理再生上没有显著区别。无小核骈体和正常单体S_7之间的接合命运则是多样化的。在630个这样的接合对中,有257对发生了真正的接合并形成接合后体;有153对接合不久包囊化;在其余的220对中,一个接合体吸收了另一个,变成营养型的单体和有小核的骈体。前者占总吸收者的96.8％,后者只占3.2％。对接合和吸收两种情况的细胞学事件进行了详细观察。无小核骈体中的两组细胞质和双套大核能吸引其配偶中的小核,形成自己新的双套大核胚基及小核胚基,在本文的讨论中受到充分注意。     

上海四膜虫接合生殖期间皮层细胞骨架蛋白的研究

本文采用生化抽提,结合电泳及显微技术,对上海四膜虫（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａｓｈａｎｇｈａｉｅｎｓｉｓ）Ｓ１皮层细胞骨架（ｃｏｒｔｉｃａｌｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）的蛋白组份,及其在接合生殖期间的变化进行了一系列的研究,初次探索了Ｓ１株上海四膜虫在接合生殖中皮细胞骨架的蛋白组份及含量,并分析了它们与间期,接合分开时期同类蛋白相互间的差异,发现在接合生殖时期７６－８８ｋＤ蛋白有突出的表现,而９０ｋＤ和     

导入三叶草根瘤菌寄主范围基因对豌豆根瘤菌侵染白三叶草的影响

将带有三叶草根瘤菌寄主范围基因的豌豆根瘤菌（转移接合子182和290）接种白三叶草,观察比较它们对白三叶草早期侵染特征和结瘤情况。转移接合子182虽然诱导白三叶草很毛细胞弯曲,但未观察到侵染,也无侵染线形成;而转移接合子290能诱导白三叶草根毛形成紧密的弯曲,溶解根毛细胞壁和侵染白三叶草。结瘤试验表明,白三叶草接种转移接合子290所诱导的结瘤情况与接种三叶草根瘤菌野生型菌株ANU843的情况很相似。转移接合子182只能诱导个别无效瘤,290和ANU843一样都能在白三叶草上结瘤。由此说明转移接合子如果只携带三叶草根瘤菌的部分寄主范围基因(FEL）仍不能在白三叶草上诱导侵染和正常结瘤,而必需携带全部寄主范围基因（FELMN）才能在白三叶草上正常结瘤。     

导入三叶草根瘤菌寄主范围基因对豌豆根瘤菌侵染白三叶草的影响

将带有三叶草根瘤菌寄主范围基因的豌豆根瘤菌(转移接合子182和290)接种白三叶草,观察比较它们对白三叶草早期侵染特征和结瘤情况。转移接合子182虽然诱导白三叶草根毛细胞弯曲,但未观察到侵染,也无侵染线形成;而转移接合子290能诱导白三叶草根毛形成紧密的弯曲,溶解根毛细胞壁和侵染白三叶草。结瘤试验表明,白三叶草接种转移接合子290所诱导的结瘤情况与接种三叶草根瘤菌野生型菌株ANU 843的情况很相似。转移接合子182只能诱导个别无效瘤,290和ANU843一样都能在白三叶草上结瘤。由此说明转移接合子如果只携带三叶草根瘤菌的部分寄主范围基因(FEL)仍不能在白三叶草上诱导侵染和正常结瘤,而必需携带全部寄主范围基因(FELMN)才能在白三叶草上正常结瘤。     

空肠弯曲菌活而不可培养状态的产毒素能力及毒素基因表达的检测

目的 通过诱导空肠弯曲菌进入活的不可培养(VBNC)状态建立细胞学模型,用VeroE6细胞和HeLa细胞检测空肠弯曲菌产细胞膨胀性肠毒素(cytotoxic distendingtoxin,CDT)能力的改变,并在RNA水平上进一步验证毒素的表达。方法 采用4℃冷藏及-70℃冷冻的方法诱导空肠弯曲菌进入VBNC状态,利用细胞总数计算、活细胞染色计数及可培养细胞计数间接确证VBNC状态细菌的存在,细胞对于VBNC状态下的细菌仍然敏感,并用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)证实空肠弯曲菌毒素基因的表达。结果 3种不同状态的细胞计数结果表明存活细胞进入了VBNC状态,细菌经4℃冷藏及-70℃冷冻后数量减少约1个数量级,在冷冻前,细菌对细胞毒性较强,72h时70%以上细胞凋亡,冷冻后的VBNC状态细菌对VeroE6和HeLa细胞的生长仍有影响,72h时约有40%细胞进入凋亡状态。结论 低温、贫养条件下空肠弯曲菌可进入VBNC状态,用常规传统的羊血平板培养基仅能使不到10%的空肠弯曲菌复苏生长,从而可以检测,在VBNC状态时,空肠弯曲菌产毒素能力改变较大,远远低于正常状态,但仍具备产毒素的能力,也从RNA水平实验得到证实。     

水绵有性生殖实验材料的培养法

初中植学第十一章植物基本群第二节藻类教材中,提到水绵的有性生殖,如果我们在野外采集这种实验材料,是没有把握随时能够取得的,但我们能够培养出这种实验的材料来。现在介绍一下培养的方法。回忆去年我山东沂水中学,讲这节教材时,曾采了些水绵放在广口瓶里,使同学们观察它的外部形态,在显微镜下看它的细胞构造,可是很遗憾,没有看到它的有性生殖的