海洋细菌QD80低温碱性蛋白酶的基因克隆和性质

对海洋细菌QD80所产低温碱性蛋白酶进行了基因克隆和序列分析,对此酶的性质进行了初步研究.此酶基因开放阅读框架为1377bp,分子量为49.9kD.此序列上游-8bp处为该基因的SD序列,-10区和-35区分别有5′TAGAAT3′和5′TTGACC3′的保守序列.该酶最适pH为9.5,最适反应温度为30℃,在10℃酶活力仍能保持30%以上.该酶对氧化剂H2O2的抗氧化作用明显,浓度达到4gL时酶活仍保留85%.该蛋白酶的低温适应性和抗氧化特性将对其在低温洗涤领域的应用提供广泛的潜在应用价值.     

低温蛋白酶的研究进展与应用前景

从来源,特征,研究方法等方面简述了低温蛋白酶的研究进展及其在食品,洗涤,化妆品和废物处理等工业上的应用前景。     

毛花猕猴桃蛋白酶的提纯和性质

用硫酸铵盐析,磷酸盐除果胶和两次ＤＥＡＥ纤维素柱层析等方法,从毛花猕猴桃（ＡｃｔｉｎｉｄｉａｅｒｉａｎｔｈａＢｅｎｔｈ．）无细胞提取液中提纯蛋白酶,在聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现一条带,纯酶的活力为３２５Ｕ／ｍｇ,比活力提高８９倍,总收率约为３７％。用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量为２３ｋＤ,用等电聚焦电泳测定等电点为４８。酶的最适ｐＨ为３８,最适温度为４３℃左右。纯酶制剂对其底物牛血红蛋白的Ｋｍ值为５５６×１０－３ｍｍｏｌ。酶的紫外吸收光谱最大值为２７８ｎｍ。二巯基苏糖醇、巯基乙醇、Ｌ半胱氨酸盐酸盐等还原剂对该酶有明显的激活作用,而碘乙酸、对氯汞苯甲酸对其有抑制作用,这表明该酶属于巯基酶类。     

海洋低温蛋白酶菌株选育及发酵培养基的研究(Ⅰ)

以渤海和黄海分离出400多株在低温条件下生长良好的菌株为出发菌株,利用常规筛选方法选出2株低温蛋白酶产生菌（Pseudorrtortas alcaligenes）。经UV、DES、NTG、EMS、LiCl单独及复合诱变,选育出一株（Pa040523）蛋白酶高产突变株。通过单因素实验,确定了Pa040523菌株蛋白酶发酵培养基为：玉米淀粉糖1．8％,尿素0．6％,磷酸氢二钾0．6％,磷酸二氖钾0．3％。该突变株低温蛋白酶产量为940．8U／mg。     

产低温蛋白酶极地菌株的筛选及Pseudoalteromonas sp. QI-1产蛋白酶粗酶性质

通过酪蛋白平板法从实验室极地微生物资源库中筛选到130株在低温条件(4℃)下具有蛋白酶活性的菌株,并对部分酪蛋白水解圈较大的菌株进行了酶活测定和系统发育分析。发现酶活较高的8株菌分别属于假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)、科尔韦尔氏菌属(Colwellia)、希瓦氏菌属(Shewanella)、嗜冷杆菌属(Psychrobacter)。选择低温蛋白酶活性较高的菌株Pseudoalteromonas sp.QI-1为研究对象,以酪蛋白为反应底物对其所产低温蛋白酶粗酶酶性质进行初步研究。结果表明:QI-1低温蛋白酶酶活最适反应温度为40℃,在0℃时保持10%的相对酶活,酶活最适反应pH为10.0;其催化作用不需要金属离子的参与;热稳定性极差,在60℃放置15 min即完全失活。     

宇佐美曲霉酸性蛋白酶的研究II．537酸性蛋白酶提纯及性质

由字佐美曲霉(Aspergillus usamii)537产生的酸性蛋白酶粗酶制剂,通过硫酸铵饱和度为45--65％的分部沉淀、离子交换树脂脱色、Sephadex G 2 5脱盐、DEAE‘$ep“ad。‘A一25层析可得到比活为2037u,mg的纯酶,为原粗酶比活的12倍,在Davis凝胶电泳中得到一条带。     

海洋低温蛋白酶菌株选育及发酵培养基的研究(I)

以渤海和黄海分离出400多株在低温条件下生长良好的菌株为出发菌株,利用常规筛选方法选出2株低温蛋白酶产生菌(Pseudom onas alcaligenes)。经UV、DES、NTG、EMS、L iC l单独及复合诱变,选育出一株(Pa040523)蛋白酶高产突变株。通过单因素实验,确定了Pa040523菌株蛋白酶发酵培养基为:玉米淀粉糖1.8%,尿素0.6%,磷酸氢二钾0.6%,磷酸二氢钾0.3%。该突变株低温蛋白酶产量为940.8 U/mg。     

嗜冷性海洋微生物产蛋白酶的研究

从210株海洋细菌中筛选出30株产蛋白酶活力较高的菌株。以N₁为出发菌,用UV诱变处理,获得突变株。其中的N_1-3。菌株最适生长温度为20℃;在21℃下培养44小时,产酶最高。酶反应最适温度为50℃,最适pH8.0。30℃以下酶活稳定。     

低温碱性蛋白酶菌株的筛选及产酶条件的研究

从 2 0株枯草芽孢杆菌筛选出了 1株产低温碱性蛋白酶菌株 ;并通过单因子实验、正交实验确定该菌株的最佳培养基为 :葡萄糖 8%,豆粕粉 6 %,Tween80 0 .0 3%,KH2 PO4 0 .0 6 %;确定了酶作用的最适条件为 30℃。     

牦牛肠道粪肠球菌的分离和鉴定

试验为获得1株与牦牛肠道共生的粪肠球菌,通过对健康牦牛粪样中的肠球菌进行分离培养、革兰染色、生化试验、16S rRNA基因测序比对等生物学鉴定,初步证实该分离菌株为粪肠球菌。此试验为进一步分析牦牛肠道菌群结构,探索牦牛耐饥、耐渴、耐粗饲、对高山草原极强适应性与其肠道菌群的关系,进一步研究与牦牛共生的粪肠球菌的生物学特性、生理特性、对宿主危害性等提供一些实验依据。     

重庆市1264株粪肠球菌和屎肠球菌耐药性监测

【摘 要】 目的 了解2011年中国重庆市主要7所教学医院临床分离粪肠球菌和屎肠球菌对各类抗菌药物的耐药性。方法 重庆市主要7所教学医院(6所综合性医院,1所儿童医院)按统一方案、采用统一的材料、方法和判断标准(CLSI 2011年版)进行粪肠球菌和屎肠球菌的耐药性监测。数据用WHONET 5.5软件按照CLSI 2011年版折点进行分析。结果 共分离到非重复粪肠球菌589株、屎肠球菌675株,对利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁仍极敏感,耐药率<2%,万古霉素耐药粪肠球菌和屎肠球菌检出率分别为0.3%、0.7%。粪肠球菌对青霉素、氨苄西林、呋喃妥因的耐药率较低,分别为14.8%、8.6%和5.1%,对高浓度庆大霉素的耐药率分别为46.9%;屎肠球菌耐药性明显高于粪肠球菌,对青霉素和氨苄西林耐药率接都在90％左右。儿童和成人耐药率存在一定差别。结论 本市医院肠球菌感染以屎肠球菌为主, 粪肠球菌次之,两者耐药性明显不同, 监测其耐药情况对指导临床用药具有重要意义。     

不同分离源粪肠球菌的毒力基因比较

【背景】粪肠球菌作为一种重要的乳酸菌在食品和医药领域应用广泛。由于很多粪肠球菌为条件致病菌,因此充分了解粪肠球菌基因组中毒力基因(Virulence genes)的携带情况对合理利用该菌种有重要的意义,但目前还没有研究专门报道不同分离源粪肠球菌基因组中毒力基因的携带情况。【目的】了解不同分离源粪肠球菌毒力基因的携带情况,评估分离自自然发酵乳制品中的粪肠球菌的安全性。【方法】利用比较基因组学方法确定107株分离自乳源、血液、尿液、粪便和水源中的粪肠球菌携带毒力基因情况,使用主成分分析比较不同分离源菌株毒力基因的差异,通过卡方检验筛查出环境特异性毒力基因。【结果】在107株粪肠球菌基因组共找到88种编码不同功能蛋白的毒力基因,其中与粘附相关的毒力基因最多。同时发现乳源分离株与其他环境分离株所携带的毒力基因没有显著差异。【结论】乳源分离株中携带的毒力基因与其他环境分离株无显著差异,表明分离自自然发酵乳制品中的粪肠球菌可能同样存在致病风险,因此在食品工业中使用粪肠球菌时一定要对菌株的安全性做全面的评估。     

耐利奈唑胺粪肠球菌感染的危险因素分析

分析深圳市南山区人民医院粪肠球菌感染患者的临床资料,探讨引起感染的危险因素,为防治耐利奈唑胺粪肠球菌感染提供临床参考。选取2010年1月-2015年9月在深圳市南山区人民医院住院的165例粪肠球菌感染患者,根据药敏结果分为利奈唑胺敏感组(103例)和利奈唑胺中介/耐药组(62例)。165例粪肠球菌主要来源于中段尿培养,占53.94%,其次为伤口分泌物培养(21.82%)、血培养(6.06%);科室分布以泌尿外科和肝胆外科为主,分别占35.76%和9.70%。单因素分析显示,碳青霉烯类抗生素暴露、留置尿管与感染相关。Logistic回归分析进一步明确碳青霉烯类抗生素暴露、留置尿管为耐利奈唑胺粪肠球菌感染的危险因素,提示应严格掌握碳青霉烯类抗生素的适应证,加强医院内感染的控制管理。     

水溶性蜂胶对感染根管内粪肠球菌的体外抑菌试验

目的 研究水溶性蜂胶对感染根管内常见菌粪肠球菌的体外抑菌活性.方法 采用液体稀释法测定水溶性蜂胶对粪肠球菌的最低杀菌浓度(Minimal bactericidal concentrations,MBC).结果 蜂胶对粪肠球菌的MBC为0.156%.结论 蜂胶对感染根管内粪肠球菌具有良好的抑菌活性,将其用于感染根管消毒具...     

粪肠球菌精氨酸脱亚胺酶酶学性质研究

经硫酸铵分级沉淀、Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、SephadexG-75凝胶柱层析从NJ402自溶细胞超声破碎液中提纯得到精氨酸脱亚胺酶(ADI), 纯化倍数为34.5, 活力回收率为31.4％, 经SDS-PAGE以及Native-PAGE测定结果表明, ADI亚基分子量约为46 kD, 该酶非变性情况下的分子量约为190 kD左右, 该酶为同四聚体结构。酶学性质研究结果表明：ADI催化最适温度和最适pH分别为50℃和6.5, 在45℃以下和pH 5~8之间有很好的稳定性。ADI是L-型脱亚胺酶, 具有严格的光学选择性, 适当浓度的Mn2+、Mg2+、Co2+对ADI催化活力的促进作用较大, 高浓度的Zn2+和Co2+对酶有一定程度的抑制作用, L-瓜氨酸对酶无抑制作用而L-鸟氨酸却表现出较强的抑制作用。ADI在最佳催化条件下作用于L-精氨酸的米氏常数为3.2686 mmol/L, 最大反应速度为2.44 μmol/min。     

血流感染粪肠球菌和屎肠球菌的临床分布及耐药研究

回顾性分析上海市某三甲医院血培养阳性标本中粪肠球菌和屎肠球菌的临床分布及对抗菌药物的耐药特征,为临床治疗其所致感染奠定基础。收集上海市某三甲医院2012年2月—2016年9月血流感染患者血液标本中的粪肠球菌和屎肠球菌,采用法国生物梅里埃公司的VITEK 2Compact全自动细菌鉴定和药敏分析系统进行细菌鉴定及药敏测定,研究细菌临床分布特点及对常用抗菌药物的耐药特征。共分离获得30株粪肠球菌和17株屎肠球菌。粪肠球菌样本主要来自泌尿科、消化科和血液科,所占比例分别为13.33%、16.67%和10.00%。粪肠球菌对青霉素、氨苄西林、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素和红霉素的耐药率分别为13.33%、10.00%、36.67%、33.33%、66.67%和60.00%。屎肠球菌样本主要来自消化科(29.41%),其对以上抗菌药物的耐药率分别为88.24%、82.35%、88.24%、76.47%、23.53%和70.59%。屎肠球菌对青霉素、氨苄西林、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率显著高于粪肠球菌,而对四环素的耐药率显著低于粪肠球菌。两者均对替加环素、利奈唑胺和万古霉素敏感,但万古霉素对屎肠球菌的最低抑菌浓度显著低于粪肠球菌。结果提示,屎肠球菌对青霉素、氨苄西林、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率高于屎肠球菌,对万古霉素敏感,且其万古霉素最低抑菌浓度低于粪肠球菌。本研究为治疗这两种细菌所致感染的经验性用药提供了数据支持。     

粪肠球菌精氨酸脱亚胺酶酶学性质研究

经硫酸铵分级沉淀、Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、SephadexG-75凝胶柱层析从NJ402自溶细胞超声破碎液中提纯得到精氨酸脱亚胺酶(ADI),纯化倍数为34.5,活力回收率为31.4%,经SDS-PAGE以及Native-PAGE测定结果表明,ADI亚基分子量约为46 kD,该酶非变性情况下的分子量约为190 kD左右,该酶为同四聚体结构.酶学,胜质研究结果表明:ADI催化最适温度和最适pH分别为50℃和6.5,在45℃以下和pH 5～8之间有很好的稳定性.ADI是L-型脱亚胺酶,具有严格的光学选择性,适当浓度的Mn2 、Mg2 、Co2 对ADI催化活力的促进作用较大,高浓度的Zn2 和Co2 对酶有一定程度的抑制作用,L-瓜氨酸对酶无抑制作用而L-鸟氨酸却表现出较强的抑制作用.ADI在最佳催化条件下作用于L-精氨酸的米氏常数为3.2686 mmol/L,最大反应速度为2.44 μmol/min.