生物活性肽——蛋氨酸脑啡肽的免疫

源自肾上腺前脑啡肽原的具有吗啡样生物活性的内源性神经肽蛋氨酸脑啡肽(methionine enkephalin,MENK),由５个氨基酸残基Tyr Gly Gly Phe Met组成,与G蛋白偶联的７次跨膜特异性受体结合后发挥不同的生物学功能。目前,对蛋氨酸脑啡肽的作用及其机制研究已经取得了很大进展。本文就MENK对于免疫系统的调节及其对肿瘤、自身免疫病、艾滋病等免疫系统相关疾病的治疗作用予以综述。     

生物活性肽——蛋氨酸脑啡肽治疗白血病一例报告

蛋氨酸脑啡肽是内源性阿片样物质。它是由5个氨基酸残基组成的多肽,其第5位氨基酸残基为蛋氨酸。通过抽取病人静脉血,分离淋巴细胞,进行体外扩增激活,然后回输患者体内,患者外周血白细胞计数为3．6×10^9／L,血红蛋白122g/L,血小板116×10^9／L,异常淋巴细胞消失,幼粒细胞消失。骨髓象示粒细胞系统、红细胞系统增生活跃,各阶段细胞比值及形态大致正常;淋巴细胞比值减低,形态正常;造血功能恢复。由此可见,蛋氨酸脑啡肽体外激活免疫系统并回输体内作为一种新的治疗白血病的方法,具有广泛的应用前景。     

细胞生物活性肽-蛋氨酸脑啡肽对小鼠CD4~+T细胞mRNA的影响

从基因水平探讨蛋氨酸脑啡肽对小鼠CD4'T细胞mRNA转录的影响。6～8周龄BALB/c雌性小鼠体内、外不同浓度MEK刺激。采用RT-PCR技术检测mRNA,所得不同浓度MEK刺激的CD4+T细胞mRNA和β-actin条带密度比值作为相对表达强度,所得数据采用SPSS11.5软件进行统计分析。4mg/mLMEK体内刺激及10-9～10-12mol/mL的MEK体外刺激促进小鼠CD4'T细胞mRNA转录;10-1～10-8mol/mL的MEK抑制小鼠CD4+T细胞mRNA的转录。10-13～10-14mol/mL的MEK对小鼠CD4'T细胞mRNA的转录无明显变化。适量浓度的MEK体内、外刺激能促进小鼠CD4+T细胞mRNA转录的高效表达。     

蛋氨酸脑啡肽质量标准研究

建立了蛋氨酸脑啡肽的质量标准。采用液相色谱-质谱联用仪检测蛋氨酸脑啡肽分子量和鉴别蛋氨酸脑啡肽的各氨基酸组成,反相高效液相色谱测定蛋氨酸脑啡肽含量。蛋氨酸脑啡肽分子量为573.7,氨基酸组成为Tyr-Gly-Gly-Phe-Met。蛋氨酸脑啡肽质量浓度在7~280 mg/L(r=0.999 8)内线性关系良好,平均回收率为98.54%,RSD为0.89%。所建立的方法科学,可靠,重复性好。可准确地对蛋氨酸脑啡肽进行定性定量检测。     

蛋氨酸脑啡肽对免疫系统恢复作用的研究

采用固相合成法合成蛋氨酸脑啡肽,制备成注射液。对经放化疗后免疫系统受到伤害的晚期肿瘤志愿者进行治疗,经静脉滴注15 d。患者免疫系统指标全面迅速恢复,淋巴细胞亚群间比例趋于合理,证明蛋氨酸脑啡肽可以用于癌症患者的免疫系统的恢复治疗。     

蛋氨酸脑啡肽对疟疾感染鼠一氧化氮产生的研究

探讨蛋氨酸-脑啡肽(M-ENK)对约氏疟原虫感染早期小鼠脾细胞分泌一氧化氮(NO)的免疫调节效应及相关机制。以不同浓度的M-ENK(单独或与LPS合用)与疟原虫感染后第3dBALB/c或DBA/2小鼠的脾细胞共同培养,通过Griess反应和ELISA法分别检测其上清中NO和IFN-γ的水平。脾细胞与浓度为10-10或10-11mol/L的M-ENK培养后,NO的分泌水平明显升高,并且与LPS联合刺激后其NO的产生进一步增强,但IFN-γ水平均未出现有意义的变化。提示浓度为10-10或10-11mol/L的M-ENK能够促进约氏疟原虫感染小鼠脾细胞NO的产生,该作用与IFN-γ活化巨噬细胞路径可能无关,同时M-ENK对LPS的刺激效应也具有强化作用。     

蛋氨酸脑啡肽联合白细胞介素-2抗肿瘤作用研究

观察蛋氨酸脑啡肽(MEK)和注射用白细胞介素-2(IL-2)单独和联合应用的抗肿瘤效应。应用动物移植性肿瘤的体内试验法,分别观察MEK、IL-2和(MEK+IL-2)对肿瘤的抑瘤作用及小鼠生命延长率情况。MEK组、IL-2组和(MEK+IL-2)组的抑瘤作用分别为131.38%(P0.01)、69.63%(P0.01)、229.170%(P0.01),都有显著差异;生命延长率为:MEK组18.27%(P0.01),有显著差异;IL-2组9.31%(P0.01),无显著差异;(MEK+IL-2)组32.07%(P0.01),有显著差异。结果表明:MEK、IL-2和(MEK+IL-2)都对小鼠移植性瘤有一定的抑制作用,MEK和(MEK+IL-2)能够延长小鼠生命,而IL-2单独应用不能延长小鼠生命;MEK和IL-2联合应用时作用相加,而不良反应未相加。     

肠道菌群对蛋氨酸脑啡肽治疗肿瘤疗效的影响

蛋氨酸脑啡肽(Methionine enkephalin,MENK)是一种内源性阿片肽,有良好的抗肿瘤作用,而肠道菌群对MENK抗肿瘤作用的影响尚不清楚.本研究建立小鼠肠道菌群紊乱模型及荷瘤小鼠模型,以16s rRNA测序法检测肠道菌群丰度、监测小鼠体重、绘制肿瘤生长曲线,以流式细胞术检测小鼠肿瘤浸润CD4+T细胞、C...     

力生长因子E肽对成骨细胞增殖及基因表达的影响

为了探索力生长因子羧基端E结构域的后24个氨基酸组成的短肽(MGF-Ct24E)对成骨细胞生物学活性的影响,通过组织块培养法获得大鼠原代成骨细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测细胞的增殖及细胞周期分布情况,基因芯片技术检测细胞基因表达谱,并用定量PCR实验验证芯片检测结果。结果显示MGF-Ct24E组的细胞增殖活性明显高于对照组,且在培养第一天促增殖效果最为显著。细胞周期结果显示MGF-Ct24E显著提高了S期和G2/M期的细胞所占比例。基因芯片检测发现差异表达基因共1397个,其中上调922,下调475,且差异表达的基因主要是关于细胞的增殖分化调节,生长因子结合和活性调节等方面。MGF-Ct24E对成骨细胞的这种增殖分化调控提示MGF-Ct24E在促进骨修复方面有着潜在的应用价值。     

白介素-2及干扰素-γ对人成骨细胞增殖的影响

体外培养人骨肉瘸细胞系MG63,MTT方法检测白介素-2（Interleukin-2,IL-2）和干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）对成骨细胞增殖的影响。结果表明,一定浓度（0．1—100U／μL）的IL-2能够促进成骨细胞增殖（P〈0．05）,而IFN-γ对成骨细胞增殖的影响无统计学意义（P〉0．05）,提示IL-2是成骨细胞的一种促分裂原。     

生物活性肽—蛋氨酸脑啡肽免疫调节作用研究进展

蛋氨酸脑啡肽( methionine-enkephaIin,Met-ENK)是具有内源性吗啡样活性物质,它是由5个氨基酸残基组成的多肽,其第5位氨基酸残基为蛋氨酸.目前,对Met-ENK的生物学功能及其作用机制的研究已取得了显著进展.就Met-ENK对免疫细胞调控、抗肿瘤作用等方面做一综述.     

蛋氨酸脑啡肽（MEK）抗B型流感病毒感染作用的研究

研究MEK抗B型流感病毒感染的作用。采用MDCK细胞和9～10日龄鸡胚,按不同的顺序加入不同剂量MEK和B型流感病毒,共培养72 h后做血凝实验。所有加入B型流感病毒的MDCK细胞均培养出病毒,HA滴度为1：64。在鸡胚尿囊腔中,先注入MEK孵育24 h后,再注入B型流感病毒的鸡胚也培养出病毒,HA滴度为1：6.8,与病毒对照组比较P〈0.01,有统计学意义。实验结果未见MEK直接抗B型流感病毒感染MDCK细胞株的作用,但可见MEK抗B型流感病毒感染鸡胚的作用。     

Advanced Glycation End Products Affect Osteoblast Proliferation and Function by Modulating Autophagy Via the Receptor of Advanced Glycation End Products/Raf Protein/Mitogen-activated Protein Kinase/Extracellular Signal-regulated Kinase Kinase/Extracellular Signal-regulated Kinase (RAGE/Raf/MEK/ERK) Pathway

The interaction between advanced glycation end products (AGEs) and receptor of AGEs (RAGE) is associated with the development and progression of diabetes-associated osteoporosis, but the mechanisms involved are still poorly understood. In this study, we found that AGE-modified bovine serum albumin (AGE-BSA) induced a biphasic effect on the viability of hFOB1.19 cells; cell proliferation was stimulated after exposure to low dose AGE-BSA, but cell apoptosis was stimulated after exposure to high dose AGE-BSA. The low dose AGE-BSA facilitates proliferation of hFOB1.19 cells by concomitantly promoting autophagy, RAGE production, and the Raf/MEK/ERK signaling pathway activation. Furthermore, we investigated the effects of AGE-BSA on the function of hFOB1.19 cells. Interestingly, the results suggest that the short term effects of low dose AGE-BSA increase osteogenic function and decrease osteoclastogenic function, which are likely mediated by autophagy and the RAGE/Raf/MEK/ERK signal pathway. In contrast, with increased treatment time, the opposite effects were observed. Collectively, AGE-BSA had a biphasic effect on the viability of hFOB1.19 cells in vitro, which was determined by the concentration of AGE-BSA and treatment time. A low concentration of AGE-BSA activated the Raf/MEK/ERK signal pathway through the interaction with RAGE, induced autophagy, and regulated the proliferation and function of hFOB1.19 cells.     

高压氧对体外培养的成骨细胞增殖和分化的影响

为探讨高压氧对成骨细胞增殖和成骨分化的影响,把来源于牙槽骨的成骨细胞接种在24孔培养皿中,每孔2 500个细胞,4个治疗组分别接受不同条件的高压氧治疗,分别是2.4ATA 90 min,2.4ATA 30 min,1.5ATA 90 min和1.5ATA30 min,每天一次,共10天.对照组进行常规的细胞培养.分别在高压氧治疗前和高压氧治疗后的1、2、3、4、6、8、10天,采用WST-1分析试剂进行成骨细胞的增殖分析.使用乳酸脱氢酶(LDH)毒性分析法检测高压氧对成骨细胞的毒性影响.另将细胞接种于96孔培养皿中,每孔10 000个细胞,正常培养3天后,改用成骨化培养基,24h后,两个治疗组分别接受2.4ATA 90 min和1.5ATA 90 min的高压氧治疗,每天一次共19次.采用钙沉积分析法、碱性磷酸酶(ALP)活性分析和Von Kossa染色进行成骨分析.同样的方法观察高压空气对细胞增殖和分化的影响.结果显示,在10%小牛血清培养基条件下,高压氧刺激了成骨细胞的增殖,而在使用2%小牛血清培养基时,并末观察到高压氧对细胞增殖的促进作用.高压氧治疗前后细胞外乳酸脱氢酶含量没有发生改变,提示了高压氧未对成骨细胞造成毒性影响.另一方面,高压氧增加了骨结节的形成,同时钙沉积增加,碱性磷酸酶的活力也显著增强,表明了高压氧促进了成骨细胞的成骨分化.     

高盐饮食对大鼠血压和脑内脑啡肽含量的影响

大鼠47只,高盐饮食饲养4个月后,尾部收缩期血压为135±2mmHg((?)±SEM),较对照组(40只)102±1mmHg明显升高(P<0.001)。高盐饮食组大鼠的纹状体和脑干的甲硫氨酸脑啡肽(MEK)和亮氨酸脑啡肽(LEK)的含量,均较对照组明显增加(p<0.01),下丘脑区亦增加(P<0.01或P<0.05),而丘脑和海马区与对照组相比,无显著差别。高盐饮食组大鼠血浆中的血管紧张素Ⅰ浓度,比对照组为低(P<0.05)。     

丹皮酚对过氧亚硝基阴离子致大鼠成骨细胞分化抑制的影响

探讨丹皮酚（Pae）拮抗过氧亚硝基阴离子（ONOO^-）对体外培养大鼠成骨细胞分化的影响。用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,采用淬灭流动反应方法体外制备ONOO^-,以不同终浓度加入成骨细胞培养体系,在作用不同时间后,用对硝基苯二钠动力学（PNPP）法检测细胞内碱性磷酸酶（ALP）的活性,用Lowry法测定蛋白含量,并以不同终浓度Pae消除ONOO^-（1000μmoL/L）对成骨细胞分化的影响。结果显示,不同浓度的ONOO^-（50-1000μmoL/L）均能抑制碱性磷酸酶的活性,影响分化;高浓度的丹皮酚（10^-3-10^-6mol/L）能消除ONOO^-（1000μmoL/L）对碱性磷酸酶活性的抑制,拮抗ONOO^-抑制成骨细胞分化的作用。     

MEK/ERK信号通路对人结膜上皮细胞增殖的影响及其机制研究

目的:探讨MEK/ERK信号通路对人结膜上皮细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:采用不同浓度(0、12.5、25、50、100μmol/L)的MEK抑制剂PD98059处理人结膜上皮细胞(HConEpiC),通过CCK-8法检测不同浓度PD98059作用不同时间(0、12、24、48 h)对人结膜上皮细胞增殖的影响,Western blot检测不同浓度PD98059对人结膜上皮细胞ERK1/2、P-ERK1/2表达的影响。结果:相比对照组(0μmol/L),不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)PD98059处理后的人结膜上皮细胞增殖率明显下降,呈剂量-效应关系,且随处理时间增加(12、24、48 h)其抑制作用也显著增强,差异均有统计学意义(P0.05)。不同浓度PD98059处理人结膜上皮细胞24 h后,其ERK及p-ERK1/2表达随处理浓度增加而降低,与对照组(0μmol/L)相比差异有统计学意义(P0.05),且二者表达量与细胞增值抑制率均呈显著负相关(r=-0.995、r=-0.968,P0.05)。结论:PD98059可抑制人结膜上皮细胞增殖,这可能与其下调ERK表达和减少其活化有关。     

MEK5基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对MEK5的表达抑制

目的 构建人MEK5基因的小干扰RNA（siRNA）重组腺病毒表达载体,观察其在胃腺癌SGC7901细胞中对MEK5的表达抑制.方法 设计并合成针对人MEK5基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,以MluⅠ及XhoⅠ克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,将得到的重组穿梭质粒用PmeⅠ线性化后在大肠埃希菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组.将PacⅠ酶切鉴定正确的重组腺病毒质粒经乙醇沉淀后转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒.病毒体外转导人胃腺癌SGC7901细胞,Western印迹法检测其对MEK5表达的抑制.结果 经酶切和测序鉴定均证实pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序列正确无误.Western印迹检测结果显示pAd-MEK5-siRNA2可抑制MEK5基因的表达,其有效抑制率达75.5 %.结论本研究成功地构建了针对人MEK5基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步深入研究MEK5基因在人胃腺癌细胞中的作用和功能奠定了基础.     

Inducible expression of a mutant form of MEK1 in Swiss 3T3 cells

We conditionally overexpressed a MEK1 mutant that contains triple mutations in the regulatory and kinase domains, and investigated its effects on the MAP kinase cascade in Swiss 3T3 cells. Expression of the mutant produced a 60% blockade in MAP kinase activity. However, only a modest blockade in DNA synthesis was observed, without any reductions in the phosphorylation of two proteins known to be substrates of MAP kinase. Moreover, the overexpression of MEK1(3A) failed to block endogenous MEK1 activation, although MEK1(3A) formed complexes with both c-Raf and B-Raf as well as p42/p44 MAPK. These results suggest that there may be multiple biochemical inputs into the MEK/MAPK pathway. J. Cell. Biochem. 67:367–377, 1997. © 1997 Wiley-Liss, Inc.