海南文昌清澜港红树林真菌抗B16肿瘤细胞活性菌株的筛选

从海南文昌清澜港红树林采集78份植物组织和土壤样品。对样品进行真菌分离, 共分离得到真菌608株, 采用目测法对其体外抗肿瘤细胞活性进行检测, 发现81株红树林真菌对小鼠黑色素瘤B16细胞有不同程度的抑制作用, 占总分离菌株的13.32%。结果表明, 从红树植物杯萼海桑中分离得到真菌菌株的数量最多, 而从红树植物银叶树分离得到的抗肿瘤细胞活性菌株数量最多。     

红树植物内生真菌的分离鉴定及抗菌活性菌株的筛选

本文对厦门集美红树植物无瓣海桑(Sonneratia apetala),海马齿(Sesuvium portulacastrum)和秋茄(Kan-delia candel)的多个部位进行内生真菌的分离和形态鉴定,并采用菌饼法对分离到的内生真菌进行抗菌活性筛选。结果显示,从3种红树植物的根、茎、叶中分离得到25株内生真菌,分别隶属8个类群,以链格孢属和曲霉属为主,分别占菌株总数的28.0%和24.0%;有19株菌株对至少一种指示菌有抑制作用,占菌株总数的76.0%。研究结果表明,红树植物来源的内生真菌数量多,种属丰富,同时具有良好的抗菌活性,是研究抗菌活性化合物的重要资源。     

广西山口红树林内生放线菌的分离、筛选及初步鉴定

从广西山口国家红树林生态自然保护区采集8种真红树植物和5种半红树植物的根、茎、叶及胚轴等组织样品共计41份。经过表面消毒后粉碎,分别以几丁质、腐殖酸、木聚糖等作为主要营养及能量来源设计了8种分离培养基,从植物组织中分离得到118株放线菌。使用6种新药筛选模型对分离菌株进行了生理活性筛选,77株放线菌的发酵液样品在一个或多个药物筛选模型中显示为阳性,初筛阳性率为65.3%。对77株筛选阳性菌株进行的初步分类研究结果显示,其中44株属于链霉菌属,25株为小单孢属的菌株,3株属于糖丝菌属,3株为诺卡氏属菌株,1株是拟诺卡氏属菌株,1株是伦茨氏菌属的菌株。对一株在抗多重耐药检定菌HH22和降血脂模型上都显示出良好活性的菌株I07A-01824进行表型和基因型分析,确定I07A-01824为黄白链霉菌(Streptomyces albidoflavus)菌株。该研究显示,红树植物内生环境不仅仅孕育了丰富多样的内生放线菌,而且红树植物内生放线菌也是新型天然生理活性次级代谢产物的有效来源。     

广西北部湾红树植物内生真菌多样性

【目的】研究广西北部湾地区红树植物内生真菌多样性,建立北部湾红树植物内生真菌种质资源库,为利用内生真菌生物技术促进农业可持续发展提供理论依据。【方法】从广西北部湾地区采集红树植物组织样本,采用表面消毒法分离真菌,通过测定分离菌株对宿主植物是否具有致病性来筛选内生真菌,结合形态学特征和分子生物学分析对内生真菌进行分类与鉴定。【结果】从60个红树植物样本中分离得到1 764个菌株,经过致病性测定筛选获得41株内生真菌,分离率为2.3%。其中从宿主植物红海榄分离得到15株内生真菌,占总菌株数的36.6%,比例最高。通过分析,发现这些内生真菌在ITS-NJ、NS-NJ两个系统发育树上各聚为7个大分支,分属8个科(目)。其中球腔菌属Mycosphaerella、德福里斯孢属Devriesia、假尾孢属Pseudocercospora、枝孢霉属Cladosporium、Pleosporales等属(科)真菌是广西红树林的优势菌。【结论】广西北部湾地区红树植物内生真菌菌种资源丰富。     

老鼠簕(Acanthus illicifolius L.)根际内生菌分离与活性评价

从老鼠簕(Acanthus illicifolius L.)根际土壤和植物根、叶、茎中共分离得到97株微生物,其中包括27株放线菌,44株细菌以及26株真菌,并且土壤中的分离得到的微生物最多。对获得的菌株进行细胞毒活性、抗金黄色葡萄球菌和抗白色念珠菌的测定,结果发现细菌的活性百分比最高,而放线菌和真菌活性百分比相对较小。     

从红树植物中筛选具有抗菌、抗氧化和抗肿瘤活性的内生真菌

从红树植物无瓣海桑(Sonneratia apetala),海马齿(Sesuvium portulacastrum)和秋茄(Kandelia candel)中分离得到25株内生真菌,采用滤纸片琼脂扩散法、自由基清除法(DPPH、.OH和ABTS+)和MTT法对其发酵液上清乙酸乙酯抽提物的抗菌、抗氧化和抗肿瘤活性进行研究。结果显示,有12株菌株至少对一种指示菌有抑制作用,占总供测菌株的48%;对DPPH自由基、.OH自由基和ABTS+自由基具有较强清除作用(0 mg/mL﹤EC50≦1 mg/mL)的菌株分别有3株、12株和8株;对HepG2肿瘤细胞或HeLa肿瘤细胞具有抑制作用(抑制率>50%)的有8株菌株。研究结果表明,红树植物来源的内生真菌能够产生丰富的抗菌、抗氧化和抗肿瘤活性物质,是开发抗菌、抗氧化和抗肿瘤药物的重要资源。     

湛江红树林可培养内生真菌多样性及Stemphyliums sp. SCSIO 40436次生代谢产物分离与鉴定

【背景】红树林生态系统位于陆地和海洋的交汇地带,具有巨大的生态价值和经济效益。红树林内生真菌种类丰富,次生代谢产物结构多样、活性优异,是小分子天然产物和药物研发的重要来源。【目的】从湛江红树林植物样品分离、鉴定和筛选内生真菌,分离筛选菌株Stemphyliums sp. SCSIO 40436次生代谢产物并进行活性筛选。【方法】基于ITS序列鉴定种属研究内生真菌多样性;通过高效液相色谱和滤纸片扩散法筛选大米和燕麦固体培养基培养菌株的化学多样性及抑菌活性。应用硅胶、凝胶和反相色谱等色谱学方法分离纯化;应用高分辨质谱、核磁、X射线单晶衍射、圆二色谱等波谱手段确定化合物的平面结构与立体构型;采用微量肉汤稀释法测定分离化合物的最小抑菌浓度。【结果】从湛江高桥红树林植物样品分离纯化获得52株内生真菌,通过ITS序列比对归属于29个属。筛选到菌株Stemphylium sp. SCSIO 40436,从其发酵粗提物中分离得到5个聚酮化合物stemphol (1)、macrosporin (2)、altersolanol A (3)、alterporriol E (4)和alterporriol D...     

红树植物对根域真菌生态的影响

植物根系具有丰富的微生物种类和生物量,为了掌握红树植物根系真菌的生态状况,在广东湛江红树林国家级自然保护区内6种红树植物群落中采集样品分离根际与非根际真菌,分析红树植物对根域真菌生态的影响以及根域真菌与环境因子的关系。从分离培养的6种红树植物的根域样本中,鉴定出5属11种真菌。桐花树、木榄、无瓣海桑和秋茄根际真菌的丰度与种类均高于非根际真菌,说明这4种红树植物对根际真菌生长有促进作用,而红海榄与白骨壤则相反,说明其对根际真菌有抑制作用。总体上,红树林林内真菌种类数远高于林外,表明红树植物覆盖对促进真菌物种多样性有积极作用。根际真菌丰度与总有机碳(TOC)呈显著负性相关关系,非根际真菌种类数与硝态氮(NO3-N)呈显著正相关关关系,说明根际TOC中可能含有抑制真菌生长作用的物质,而在非根际,红树植物根系分泌物影响较小。红树植物根系分泌物对根际微生物数量和种类数有一定的影响。     

漳江口红树林沉积物真菌多样性分析及抗茶叶致病真菌生物活性筛选

以福建漳江口红树林国家级自然保护区红树林沉积物分离的真菌为对象,研究红树林沉积物真菌的多样性和筛选抗茶叶病原真菌活性的菌株。将分离纯化的135株真菌通过形态学和Ribosomal DNA-Internal Transcribed Spacer(rDNAITS)序列测定进行鉴定及多样性分析,归为40个种类型,分别属于17个属,其中青霉属(25%)为优势菌,木霉属(15%)、曲霉属(10%)和镰刀属(10%)次之,表明红树林沉积物真菌具有丰富的多样性;利用平板对峙法对真菌的发酵粗提物抗茶叶病原真菌生物活性研究,结果发现,共有17株(占42.5%)真菌具有抗茶叶病原真菌活性,其中15株能够抑制茶叶轮斑病(Pestalotiopsis theae)LH13,12株能够抑制茶叶炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)LH30,8株能够抑制茶叶溃疡病(Neofusicoccumsp.)LH107,有两株对这三种茶叶致病菌均有较强活性。这些活性菌株分布在6个属中,分别是青霉属(7株)、木霉属(3株)、镰孢属(2株)、枝孢属(2株)、白地霉属(2株)和球腔菌属(1株)。由此可见,红树林沉积物真菌抗菌活性菌株的种属分布具有多样性。     

23株海洋真菌的分子鉴定及其抗植物病原真菌和细胞毒活性研究

从南海沉积物中分离得到23株海洋真菌,通过ITS测序进行鉴定。以新月弯孢霉(Curvularia lunata)、柱枝双胞霉(Cylindrocladium scoparium)、链格孢(Alternaria alternata)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)为受试植物病原真菌,以神经胶质瘤细胞(SF-268)、乳腺癌细胞(MCF-7)、大细胞肺癌细胞(NCI-H460)和肝癌细胞(HepG-2)为受试肿瘤细胞,分别采用生长速率法和SRB法对这些菌株的发酵液粗提物进行抗植物病原真菌和细胞毒活性测试,发现11个菌株的粗提物在浓度为50 mg/mL时,对至少1种受试植物病原真菌的抑制率在50%以上,有9个菌株的粗提物在浓度为100μg/mL时,对至少1种肿瘤细胞株的抑制率在80%以上,其中菌株Eupenicillium sp.FS100、Penicillium sp.FS105、Dichotomomyces cejpii FS110、Acaromyces ingoldii FS121对植物病原真菌和(或)肿瘤细胞具有明显的抑制活性。     

海南两种红树林植物内生真菌的多样性分析

以海南红树林植物红海榄和秋茄为对象,研究了两种植物的内生真菌的多样性。结果表明:红海榄和秋茄的枝、叶中分别分离到内生真菌30株和27株,内生真菌的优势属分别是茎点霉属和拟盘多毛孢属;同种植物的枝和叶中内生真菌的定殖率差异显著;红海榄和秋茄内生真菌的多样性指数分别为1.7890和1.7473,均匀度指数分别为0.5260和0.5302。两种红树林植物的内生真菌显示出丰富的多样性。     

海南粗榧内生真菌抗肿瘤抗菌活性的筛选

对72株海南粗榧(Cephalotaxus hainanensis Li)内生真菌进行了抗肿瘤和抗菌活性筛选。结果显示, 有9株内生真菌至少对一种指示瘤株具有细胞毒活性, 5株内生真菌对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌活性, 1株内生真菌对辣椒疫霉有抑制作用。这表明海南粗榧内生真菌是寻找有价值的生物活性成分的潜在资源, 其生物活性成分值得进一步研究。     

不同生境具有抗肿瘤活性的海洋真菌筛选

目的:为了测定海口沿海海域不同生境的海洋真菌抗肿瘤状况。方法:我们从海口西海岸沿线、南渡江入海口处以及演丰红树林三个不同生境分离到162株海洋真菌,通过MTT比色法测定海洋真菌代谢产物对黑色素瘤B16的抑制活性。结果:其中75.93%的海洋真菌代谢产物对B16细胞增殖有不同的抑制作用,来自西海岸沿线生境的真菌有77.36%具有抑制B16生长作用,来自入海口生境的真菌为77.27%,来自红树林的真菌为70.58%,并且不同生境的真菌代谢物的细胞毒性强弱也有明显的区别。结论:不同生境的真菌具有不同的抗肿瘤作用,筛选具有某种活性海洋真菌菌株时,可以选择容易产某种活性成分的目的生境。     

Phylogenetic analysis and screening of antimicrobial and cytotoxic activities of moderately halophilic bacteria isolated from the Weihai Solar Saltern (China)

A total of 45 moderately halophilic bacteria was isolated from sediment and saline water collected from the Weihai Solar Saltern (China). The phylogenetic position of all the isolated strains was determined by 16S rRNA sequencing. The halophilic strains were tested for their antimicrobial activity. Cytotoxicity assay was performed to determine which of the halophilic strains could inhibit proliferation of human hepatocellular carcinoma Bel 7402 cells. Our results showed that all of the isolated 45 strains displayed moderately halophilic characteristics. Phylogenetic analysis indicated that 17 of the isolated strains were related to the phylum Firmicutes and belonged to four genera, Bacillus, Halobacillus, Planococcus and Salinicoccus. The other strains identified as genus of Halomonas belonged to phylum γ-Proteobacteria. Most of the halophilic bacterial strains showed potent activities against Gram-positive bacteria, human pathogenic fungi and plant pathogenic fungi. In addition, the crude extracts from 14 halophilic bacterial strains showed cytotoxic activity against tumor cells Bel 7402, and five of them showed remarkable activities with IC₅₀ less than 40 μg ml⁻¹. Our results suggest that the moderately halophilic bacteria may be developed as promising sources for the discovery of novel bioactive substances.     

3-hydroxypropionic acid as a nematicidal principle in endophytic fungi

3- Hydroxypropionic acid was isolated by bioactivity-guided fractionation of extracts obtained from submerged cultures of several endophytic fungi isolated from above-ground plant organs. This compound showed selective nematicidal activity against the plant-parasitic nematode Meloidogyne incognita with LD50 values of 12.5-15 microg/ml. Activity against the saprophytic Caenorhabditis elegans was fivefold lower. No antimicrobial, cytotoxic or phytotoxic effects were observed. Propionic acid and D- and L-lactic acids were not active against either nematode species. Based on morphological features and ITS, 18S and 28S rDNA analyses, the producing strains were identified as Phomopsis phaseoli isolated from the leaf of a tropical tree, and four strains of Melanconium betulinum isolated from twigs of Betula pendula and B. pubescens in Germany. This is the first report of 3-hydroxypropionic acid in fungi, and of the nematicidal activity of this metabolite.     

白木香内生真菌抗肿瘤抗菌活性的筛选研究

白本香[Aquilariasinensis（Lour．）Gilg]是我国特有的珍稀濒危药用植物。对已分离得到的白木香内生真菌的发酵液提取物的抗肿瘤抗菌活性进行了筛选。结果表明,对肿瘤细胞SF-268增殖的抑制率在90％以上的菌株有6株,占总菌株数的31．6％。其中有16株对金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌活性,占总菌株教的84．2％,有9株表现较强的抑菌活性。另外有1株时白色念珠菌表现较强的抑菌活性;有2株对黑曲霉表现一定的抑菌活性。所有菌株对大肠埃希菌都没有表现明显的抑菌活性。     

墨西哥仙人掌植物内生真菌的研究Ⅰ.内生真菌分离及其抗菌活性筛选

从一种墨西哥仙人掌[Opuntiamicrodasys(Lehm .)Pfeiff]的肉质茎中分离获得31株内生真菌,经形态观察分类鉴定为3个目、3个科、14个属。同时选择2 2种病原微生物作为指示菌进行抑菌试验,研究其抗菌活性。结果表明:3株仙人掌内生真菌分别对细菌、植物病原真菌和皮肤致病真菌多种病原微生物有较为明显的抑制生长作用。