苹果果肉中抗氰氧化酶(AOX)的分离鉴定

水果果肉的组织特征决定了从果肉中抽提线粒体的方法与其它组织有所不同。采用平面细孔瓜果刨破碎果肉、差速离心、密度梯度纯化等方法能够得到活性较高的线粒体。Brother氧电极能够判断线粒体膜是否完整。利用PAGE凝胶电泳、WesternBlot(AOX单克隆抗体 )等分析手段 ,对‘RoyalGala’苹果中AOX进行了分离和鉴定。结果表明 :‘RoyalGala’苹果果肉线粒体中AOX单体的分子量约在 35～ 37kD之间 ,二聚体约为 90kD左右。这与其它已分离鉴定的产热植物或烟草等线粒体中AOX蛋白的分子量基本一致。     

斑叶阿若母花序中交替氧化酶(AOX)的分离

斑叶阿若母（Arum maculatum）开花时花序组织中线粒体通过交替氧化呼吸途径产生很高的热量。从花序线粒体中分离的蛋白质浓度约14．0mg／ml。氧电极测定的线粒体交替氧化呼吸耗氧量为32umoles／min。用渗透压法破碎线粒体,分离线粒体膜和基质。再用非离子去污剂dBC溶解线粒体膜上的交替氧化酶（AOX）。线粒体、线粒体膜和线粒体膜可溶蛋白都具有AOX活性。而线粒体基质和线粒体膜不可溶蛋白则没有AOX活性。用快速蛋白液相层析（FPLC）法纯化了AOX,其活性可达70—100％,在-70℃中保持6个月以上仍具有活性。银染显示纯化的AOX有4个不同分子量（30—32kD）的蛋白质斑点。双向电泳表明这四个蛋白质的等电点为pH6．4至pH7．4。分离出的斑叶阿若母AOX为测量其氨基酸序列和探索其空间结构创造了条件。     

不同灰霉病抗性苹果果实中酚类物质代谢特征

以‘秦冠’、‘富士’、‘金冠’苹果果实为材料,通过对损伤接种灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea Pers)后果肉组织酚类代谢主要产物和相关酶活性变化的分析测定,揭示苹果采后酚类物质代谢与灰霉病抗性的关系,为苹果灰霉病抗性鉴定和筛选抗灰霉病苹果资源提供理论指导。结果表明:(1)接种灰葡萄孢菌后,3个苹果品种的果实灰霉病发病率和病斑直径大小均为‘秦冠’‘富士’‘金冠’,而且3个品种间的发病率和病斑直径均差异显著,各品种对灰霉病的抗性由强到弱依次为‘秦冠’‘富士’‘金冠’。(2)抗病品种‘秦冠’果肉组织中类黄酮、木质素含量及苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性均显著高于感病品种‘富士’和‘金冠’,但总酚含量为‘秦冠’‘金冠’‘富士’,且3品种间总酚含量差异显著。研究表明,抗病苹果品种通过调节果肉内酚类物质代谢,增强次生代谢能力,其中类黄酮和木质素含量的增加强化了果实的抗性反应,进而提高对灰霉病的抗性,但总酚含量与植物抗病性关系不大。     

苹果生长素输入载体MdAUX1的基因克隆及在拟南芥和烟草中的遗传转化

生长素的极性运输对调节植物生长发育起重要作用。生长素转运蛋白调控生长素的极性运输。本研究从‘嘎啦’(Malus×domestic‘Royal Gala’)苹果中克隆了生长素输入载体基因Md AUX1(基因序列号:MDP0000384437)。序列分析表明,该基因包含长为1 443 bp完整的开放阅读框,编码含有480个氨基酸的蛋白。氨基酸序列比对和系统进化树分析表明,AUX1在不同物种间具有高度的序列保守性,其中,苹果Md AUX1与欧洲甜樱桃Pa AUX1亲缘关系最近。半定量PCR分析显示,Md AUX1在苹果的茎中表达量较高。通过农杆菌介导的遗传转化获得转Md AUX1基因的拟南芥和烟草。转基因拟南芥根系表型观察结果显示,Md AUX1基因在拟南芥中异位表达后,会抑制主根伸长,促进侧根形成;在外源NAA处理下,转基因拟南芥对主根伸长的抑制作用得到部分恢复。在烟草中过量表达Md AUX1基因能够显著促进植株地上部分生长。以上结果说明苹果Md AUX1基因在调节植物生长发育中发挥重要作用。     

植酸酶产生菌的筛选与酶纯化及其性质的研究

对从土壤中分离得到的一株产植酸酶的细菌进行了生理生化鉴定,并对植酸酶进行了分离纯化,该酶反应的最适温度约为55℃,最适pH值为5．8,植酸酶蛋白分子量约为14kD。     

‘红巴梨’果皮UFGT基因的克隆及表达分析

以‘巴梨’红色芽变品种‘红巴梨’果皮为材料,采用同源克隆技术和RACE结合的方法,克隆了UFGT(UDP-葡萄糖:类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶)蛋白的部分cDNA,命名为Pc UFGT。结果表明:该cDNA片段长为1 089 bp,与苹果UFGT基因序列一致性达89%,氨基酸序列同源性为85%,含有糖基转移酶的UDPGT、COG1819和MGT等保守域。荧光实时定量PCR分析表明,该基因在‘红巴梨’幼果期表达强度约为‘巴梨’的2倍,而果实成熟期表达强度略低于‘巴梨’;该基因在‘红巴梨’果肉中不表达。     

套袋苹果果实质地及其显微结构与果面裂纹的关系北大核心CSCD

以套白色单层纸袋的着色富士系‘天红2号’和短枝富士后代优系4-1-103,以及不着色姊妹系‘冀苹4号’和‘冀苹5号’4个苹果品种(系)为试验材料,利用质构仪整果穿刺和质地多面分析法(texture profile analysis,TPA)测定果实质地,光学显微镜观察果实显微结构,探讨苹果果实质地及其显微结构与果面裂纹的关系,为抗裂纹品种的选育和潜在裂纹机制提供理论依据。结果表明:(1)盛花后132~185 d,‘天红2号’和‘冀苹4号’裂纹率和裂纹指数始终高于4-1-103和‘冀苹5号’,其裂纹主要部位为果肩部。(2)‘天红2号’和‘冀苹4号’的果肉脆裂性、果肉硬度分别显著小于4-1-103和‘冀苹5号’。(3)‘天红2号’和‘冀苹4号’的表皮细胞密度显著小于4-1-103和‘冀苹5号’,其果肉细胞间隙率显著大于4-1-103和‘冀苹5号’,且其角质膜有“V”型凹陷,并发生龟裂,而4-1-103和‘冀苹5号’角质膜完整均一。(4)主成分和灰色关联度分析表明,果肉硬度、果皮果肉硬度比和果肉细胞间隙率是解释裂纹的主要指标。研究发现,果实角质膜完整均一、果肉硬度大、果肉细胞间隙率小的苹果品种不易发生果面裂纹。     

‘砀山酥梨’及其褐色果皮芽变PbXET基因克隆与表达分析

为研究‘砀山酥梨’及其褐皮芽变木葡聚糖转葡糖苷酶基因(PbXET)表达水平差异,该实验利用RACE技术,克隆了梨PbXET基因;采用实时荧光定量PCR技术,分析了梨树叶片、果皮和果肉等不同组织及花后不同时期果皮中PbXET基因表达差异。结果表明:(1)梨PbXET3(KJ690921)和PbXET4(KJ690922)开放阅读框分别为903bp和891bp,分别编码300和296个氨基酸;氨基酸序列聚类分析显示,PbXET3与苹果MdXET-3以及PbXET4与苹果MdXET-5的亲缘关系最近。(2)半定量PCR分析显示,花后150d,PbXET3和PbXET4基因在‘砀山酥梨’和‘锈酥’不同组织中均有表达,且PbXET3在叶片中表达量很低,在果皮、果肉中表达相对较强,其中叶片中PbXET3表达量低于PbXET4,而果肉和果皮中PbXET3的表达均明显高于PbXET4。(3)荧光定量PCR分析发现,在‘砀山酥梨’和‘锈酥’果皮中,PbXET3和PbXET4基因不同时期的表达量变化趋势不同;与‘砀山酥梨’相比,果皮颜色发生变化(花后100d)之后,‘锈酥’果皮中PbXET3表达量骤减;而果皮颜色发生变化(花后100d)之前,PbXET4表达量均显著降低。由此推测,PbXET3和PbXET4基因参与了‘锈酥’果皮褐色形成的调节,其表达水平差异可能是改变‘锈酥’表皮细胞结构的重要原因之一。     

棉花种子活力劣变的差异蛋白质组学研究

该研究以新疆本地审定且大面积推广应用的陆地棉品种‘新陆早33’、‘新陆早36’、‘新陆早50’种子为研究材料,采用高温高湿(40℃,RH100%)人工老化方法获得不同活力种子,双向电泳分离‘新陆早50’活力劣变种子总蛋白并对差异蛋白点进行二级质谱(MALDI-TOF/TOF)鉴定分析,以明确棉花种子活力劣变过程中蛋白质组表达的变化,探讨棉花种子老化的分子机制。结果显示:(1)经人工老化获得不同活力水平的种子,经生活力检测发现‘新陆早50’的种子活力随老化时间的延长呈线性下降,可作为蛋白质组研究材料。(2)TCA-丙酮法分别提取‘新陆早50’对照和劣变种子的总蛋白,经2-DE分离,获得了分辨率和重复性较好的蛋白质组差异表达图谱,在等电点4~7、分子量14.4~97.4kD之间发现约350个肉眼可辨的蛋白点,其中上调2倍以上且达到99%统计学显著水平的差异表达蛋白点30个。(3)二级质谱分析发现,有29个蛋白点被成功鉴定,生物信息学分析和功能分类结果表明,与贮藏相关的蛋白有13个,免疫相关蛋白2个,脂代谢相关蛋白1个,能量代谢相关蛋白1个,肌动蛋白2个,功能未知蛋白5个,调控相关蛋白2个,次级代谢物1个,细胞修复防御相关蛋白1个,分泌性蛋白1个。研究认为,分离鉴定的29个差异蛋白的变化可能与棉花种子活力劣变有关。     

半夏凝集素的分离纯化和在植物中的分布

从半夏(Pinellia ternata)块根中,经95％硫酸铵沉淀和固定化猪甲状腺球蛋白柱亲和层析分离得到一种凝集素,称为半夏凝集素(PTL)。凝胶过滤、SDS-PAGE和免疫双扩散鉴定PTL是均一的样品,分子量约44kD,由四个约12kD的亚基组成。PTL主要存在于半夏的块茎中,茎中也有少量存在。     

小麦线粒体表面存在肌球蛋白

证明了小麦 (TriticumaestivumL .)线粒体上存在肌球蛋白。通过免疫印迹鉴定发现小麦线粒体蛋白重链与抗体进行交叉反应 ,其分子量略高于动物骨骼肌肌球蛋白的重链 ,经计算 ,该蛋白的分子量为 2 10kD。通过电镜观察到溶液中的F_肌动蛋白可以和NEM (N_ethylmaleimide)处理的线粒体结合 ,并发现F_肌动蛋白可以激活线粒体悬浮液的ATP酶活性 ,证明线粒体外膜的外表面存在肌球蛋白     

八个贵州地方桃品种果实甜酸风味品质分析

为了评价贵州地方桃品种果实的甜酸风味品质,以主栽桃品种‘燕红’作对照,采用高效液相色谱法测定了贵州8个地方桃品种的果肉糖酸组分及含量。结果表明:(1)8个地方桃品种果肉中糖主要由蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨醇组成,其中蔗糖的平均含量最高(55.62 mg/g),约占总糖的71.30%,但变异系数仅为17.92%;8个地方桃品种中,‘米桃’的葡萄糖与果糖含量差异较大,其果糖/葡萄糖的比值为1.21,而其它7个品种的葡萄糖与果糖含量相近。(2)8个地方桃品种果肉中有机酸主要由苹果酸、柠檬酸、奎宁酸和莽草酸组成,其中苹果酸含量最高,约占总酸的60.61%,但在‘白花桃’果实中有机酸含量以奎宁酸为主。(3)对8个地方桃品种果实的糖酸组分进行主成分分析发现,苹果酸含量和山梨醇含量的载荷系数分别为0.910和0.897,说明它们是影响果实甜酸风味的主导因素,且对改善果实的甜酸风味品质具有重要作用。8个贵州地方桃果实的甜酸风味分别为:‘黄腊桃’为甜,‘血桃’、‘青桃’、‘镇远桃’、‘红枫桃’为酸甜,‘白花桃’、‘西桃’和‘米桃’为酸。     

三种鲟科鱼类和两种鲑科鱼类卵黄免疫球蛋白性质的比较

从施氏鲟(Acipenser schrencki)、小体鲟(Acipenser ruthenus)、西伯利亚鲟(Acipenser baeri)、哲罗鲑(Hucho taimen)和金鳟(Oncorhynchus mykiss)五种鱼类卵黄中分离、纯化Ig,并对其分子结构进行了初步研究。结果表明:五种鱼类卵中Ig的分子量分别为施氏鲟524kD、小体鲟468kD、西伯利亚鲟475kD、哲罗鲑为490kD,金鳟498kD,其Ig重链的相对分子量相同,约为97kD。轻链的相对分子量各不相同,施氏鲟为27kD,小体鲟28.5kD,西伯利亚鲟30kD,哲罗鲑28.5kD和金鳟16kD。其中西伯利亚鲟、施氏鲟和小体鲟Ig等电点约为5.85,哲罗鲑和金鳟的Ig等电点约为6.55,其蛋白质结构上具有一定的相似性,且均为糖蛋白     

牙鲆一株弹状病毒病原的分离与鉴定

从患病牙鲆中分离鉴定了一株弹状病毒（Paralichthys olivaceus rhabdovirus,PoRV）。用过滤除菌后的患病牙鲆组织匀浆液,接种不同的鱼类细胞,其中有7种鱼类细胞出现明显的病变在对病毒进行挑斑分离后,测定了PoRV的滴度,显示PoRV在敏感鱼类细胞（Grass Carp Ovary,GCO）中的滴度达到106.5TCID50/mL;绘制了PoRV生长曲线;经蔗糖密度梯度离心提纯PoRV,负染及宿主细胞超薄切片的电镜观察,显示PoRV大小约为60nm×200nm。测定了PoRV的理化性质,显示该病毒对有机溶剂和温度敏感,但对DNA抑制剂阿糖胞苷（Ara-c）不敏感。经SDS-PAGE电泳,对PoRV的蛋白图谱进行了分析,表明该病毒有5种主要蛋白带,其分子量大小分别约为：250kD、67kD、44kD、30kD、23kD。     

苹果PDHB-1基因家族的鉴定与表达分析

丙酮酸脱氢酶E1组分β亚基-1 (pyruvate dehydrogenase E1 component subunit beta-1,PDHB-1)基因是编码丙酮酸脱氢酶复合物E1酶β亚基的基因，在果实酸度积累过程中具有重要作用。为了探究苹果(Malus domestica L.) PDHB-1家族的进化特征及其在不同酸含量苹果中的表达情况，本研究利用NCBI、Pfam等数据库和Clustal X、MEGA、TBtools等软件进行生物信息学分析，通过结合可滴定酸含量测定与实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,q RT-PCR)分析，获得该家族基因在‘艾斯达’和‘成纪1号’2个不同酸含量的苹果中的表达情况。PDHB-1家族主要定位于叶绿体、细胞质和线粒体中，α-螺旋和不规则卷曲是该家族二级结构形成的主要因素。组织特异性表达谱显示大部分成员的表达量在果实中高于其他组织。q RT-PCR结果表明，大部分成员其表达量变化趋势与可滴定酸含量变化趋势一致，在果皮中，有14个成员的表达水平在酸含量较高的‘艾斯达’苹果中显著高于酸含量较低的‘成纪1号’，其中M...     

湖北省优质杂交稻品种贮藏蛋白的比较研究

研究选取水稻品种共20个,其中包括湖北省近两年审定的优质杂交水稻品种10个(‘鄂早17’、‘鄂早18’、‘两优1193’、‘武香880’、‘岳优26’、‘宜优99’、‘协优96’、‘鄂晚12’、‘鄂中5号’、‘两优277’)以及7个普通杂交水稻(‘G98-202’、‘578’、‘两优637’、‘宜优22’、‘3685’、‘3089’、‘加育948’)和国家审定的优质水稻品种3个(‘嘉育948’、‘两优932’、‘舟903’),采用不连续的SDS-PAGE电泳分析种子贮藏蛋白,结果在谷蛋白中主要分离出57 kD的蛋白前体、37～39 kD的酸性亚基和22～23 kD的碱性亚基。同时,选取品种‘3089’、‘嘉育948’、‘537’、‘舟903’和‘两优932’,利用高效液相色谱法分析了种子贮藏蛋白中的谷蛋白亚基的含量。结果表明,水稻谷蛋白亚基含量的多少可以作为评价品种营养品质优劣的参考依据之一。     

家蚕体液低分子蛋白Apolipophorin Ⅲ的质谱鉴定及表达分析

利用SDS-PAGE电泳对家蚕不同时期的血淋巴蛋白进行了研究。发现在家蚕羽化前,血淋巴液中有一个分子量约20kD的蛋白表达量明显上调。为了探究该蛋白的功能,本研究通过双向电泳分离和肽质量指纹图谱分析对该蛋白进行了鉴定。结果表明,此羽化前后高表达的蛋白为Apolipophorin Ⅲ蛋白,该类蛋白被普遍认为与昆虫的飞行能力有关。利用RT-PCR对该蛋白编码的基因进行了组织表达分析,结果表明该基因除了在马氏管几乎不表达外,其它组织均有表达,这也暗示了该蛋白除了与昆虫的飞行活动有关以外,还参与了幼虫及蛹期的其他重要的生命活动。     

SIgA分泌片分离、纯化研究

为研究SIgA分泌片（Secretory component,SC)分离,纯化及鉴定方法,以SC存在游离和结合两种形式,本研究应用凝胶过滤和盐析法直接从初乳中分离纯化游离SC,并进行鉴定。分离纯化获得蛋白溶液12.4ml,蛋白含量0.85mg/ml,免疫双扩仅与抗SC多克隆抗体（PcAb)反应,分子量约75kD,免疫印迹实验与抗SC单克隆抗体（McAb)和PcAb特异反应,表明纯化蛋白为SC。该SC的分离纯化和鉴定处于不断完善之中,其方法的改进有利于获得更纯的SC,值得粘膜免疫研究者借鉴。     

石榴木质素合成相关基因PgMYB308的克隆和表达分析

该研究以‘红玉石籽’(Punica granatumcv.Hongyushizi)石榴为试验材料,采用RACE和RT-PCR方法,获得与木质素的合成相关基因PgMYB308。PgMYB308基因cDNA全长792bp,编码263个氨基酸。分子量为29.56kD,理论等电点为9.07。序列比对和功能域分析发现,PgMYB308包含R2和R3保守域,以及C1、C2、C4和锌指基序。系统进化树分析显示,PgMYB308与其他物种起源相同,而与桉树EgMYB308亲缘关系最近。荧光定量PCR分析表明,PgMYB308在茎、叶和种子等组织中均有表达,其中茎中表达量最高,叶片中表达量最低;PgMYB308在‘突尼斯软籽’中表达最高,而在‘红玉石籽’和‘白玉石籽’中表达量较低;PgMYB308在‘红玉石籽’籽粒的不同时期均有表达,但在花后20d相对表达量最高,以后随发育进程呈现逐渐下降的趋势。     

对‘长富2号’苹果授粉后11个海棠品种花粉直感效应的综合评价

以11个海棠（Malus spp.）品种的花粉为材料、‘新红星’苹果（Malus pumila‘Starkrimson’）花粉为对照,对‘长富2号’苹果（M.pumila‘Changfu 2’）进行人工授粉并测定其坐果率及14个果实品质指标;在此基础上,采用因子分析法确定影响苹果授粉后花粉直感效应评价的主要因子,并对供试海棠品种的花粉直感效应进行综合评价和排序。结果表明：除海棠品种‘雪倩’（‘Xueqian’）外,用其他海棠品种授粉后‘长富2号’苹果的坐果率均显著提高,其中用品种‘红波’（‘Hongbo’）授粉后‘长富2号’苹果的坐果率最高（达86.18%）;经11个海棠品种授粉后‘长富2号’苹果的坐果率以及果实的果形指数、单果质量和可滴定酸含量均高于对照（用‘新红星’苹果授粉）;经大部分海棠品种授粉后‘长富2号’苹果果实的果棱数、果梗存留率、梗洼深度、梗洼开裂率、VC含量和花青苷含量也均高于对照,但果实的着色面积百分率、果肉硬度、可溶性固形物含量、可溶性糖含量及糖酸比则低于对照。因子分析结果表明：前7个公因子的特征值均大于1,累计方差贡献率达88.187%,按照在授粉性能质量评价中的作用从大到小依次排序为果实甜度因子（包括可溶性固形物含量和可溶性糖含量）、果实酸度因子（包括可滴定酸含量和糖酸比）、果个与果形因子（包括单果质量、梗洼深度和果形指数）、果梗因子（包括梗洼开裂率和果梗存留率）、果肉硬度因子、保健与外形因子（包括花青苷含量、VC含量、果棱数和着色面积百分率）及坐果率因子。综合评价结果表明：在供试的11个海棠品种中,仅品种‘红艳’（‘Hongyan’）、‘红亮’（‘Hongliang’）和‘红纱’（‘Hongsha’）的花粉直感效应综合得分高于‘新红星’苹果,表明这3个海棠品种的花粉直感效应优良,可作为‘长富2