谷氨酸受体在噪声所致豚鼠螺旋神经节细胞损伤中的作用

本文旨在研究谷氨酸及其受体在噪声致豚鼠螺旋神经节细胞损伤中的作用。实验分为在体和离体两部分。（1）在体实验：豚鼠分为生理盐水（NS,10μL）组,NS（10μL）＋噪声组和犬尿喹啉酸（kynurenic acid,KYNA,5mmol／L,10μL）＋噪声组,每组15只。用微量注射器经完整圆窗膜表面给予NS或KYNA：暴露于白噪声110dBSPL,1h。在圆窗给药前及噪声暴露后测试听觉脑干诱发电位（auditory brainstem response,ABR）阈值及Ⅲ波幅值,听神经复合动作电位（compound action potential,CAP）阈值及N1波幅值和潜伏期,测试后取基底膜进行透射电镜观察。（2）离体实验：观察高浓度谷氨酸对急性分离的豚鼠螺旋神经节细胞的影响。结果显示,NS＋噪声组豚鼠ABR及CAP阈移显著高于KYNA＋噪声组,且Ⅲ波和NI波幅值明显降低,潜伏期明显延长。NS＋噪声组豚鼠毛细胞及传入神经末梢急性水肿和线粒体结构破坏：KYNA＋噪声组豚鼠的毛细胞和传入神经末梢无明显变化。离体胞外施加谷氨酸可引起螺旋神经节细胞逐渐出现水肿、变性,最后死亡。本实验提示,噪声暴露可引起豚鼠听功能损伤,毛细胞／传入神经突触的结构破坏和螺旋神经节细胞变性、死亡：这种损伤可能与噪声暴露引起谷氨酸的过度释放有关;谷氨酸通过其受体介导致使螺旋神经节细胞损伤,谷氨酸受体的广谱拮抗剂KYNA可减轻噪声对螺旋神经节细胞的损伤。     

豚鼠耳蜗扫描电镜图像(放大40倍)

豚鼠是医学研究中常用的实验动物,由于它的耳蜗标本容易制作和观察,因此普遍应用于噪声的研究. 豚鼠耳蜗位于头部颞骨听泡之中,耳蜗底部直径约2-3毫米,高约3-4毫米,将其外壳剥去,即可显示出如图所示呈宝塔形状的耳蜗实体.在耳蜗骨螺旋     

旋割法制备气管螺旋条评价

目的通过改进螺旋剪法建立制备气管螺旋条的旋割法。方法 40只豚鼠,用旋割法和螺旋剪法制备离体豚鼠气管螺旋条,在Kreb＇s液中平衡孵育2 h后,以组胺histamine（浴槽浓度2.0×10-3g/L）和乙酰胆碱acetylcholine（浴槽浓度2.0×10-4g/L）引发气管螺旋条收缩,用BL420生物信号采集系统与张力传感器测定标本张力变化值。数据采用SPSS11.5软件在α=0.05的信度下进行t检验。结果 2 g负荷下,旋割法标本histamine引发收缩幅度是螺旋剪法制备标本的1.31倍,乙酰胆碱引发收缩幅度旋割法是螺旋剪法制备标本的1.208倍,经t检验,P〈0.05,差异均具有显著性;旋割法标本,histamine引发2 g负荷标本收缩幅度是1 g负荷的1.48倍,乙酰胆碱引发2 g负荷标本的收缩幅度是1 g负荷的1.38倍,经t检验,P〈0.05,差异均具有显著性;旋割法标本经hista-mine或acetylcholine激发收缩,洗净药物重复激发6次收缩幅度的RSD值分别为19.8%和19.1%,螺旋剪法标本经histamine或acetylcholine 6次重复引发诱发收缩幅度的RSD值分别35.3%和33.7%。结论与螺旋剪法制备气管螺旋条标本比较,旋割法制备螺旋条标本对收缩诱导剂histamine与acetylcholine的敏感性高,标本负荷以2 g较好,旋割法标本重复利用收缩幅度变化值较螺旋剪法标本小。     

豚鼠庆大霉素耳中毒后诱发的耳蜗热休克反应

目的：探讨热休克蛋白（HSP）70在庆大霉素（GM）耳中毒中的意义。方法：应用SABC免疫组化技术及图像分析技术并结合听脑干反应（ABR）测试。观察庆大霉素耳中毒后热休克蛋白70在豚鼠耳蜗中表达及其与听阈的关系。结果：实验组耳蜗Corti‘s器、血管纹、螺旋韧带、螺旋缘、螺旋神经节细胞HSP70表达呈强阳性。且ABP阈值变化与HSP70表达的变化高度相关（｜γ｜＞0．8,P＜0．01）。结论：庆大霉素耳中毒后能够诱发耳蜗热休克反应,增加HSP70在豚鼠耳蜗的表达,保护听力。     

γ射线照射后噪声对豚鼠听阈的影响

本研究分别观察了豚鼠在噪声暴露(105±2dBA,持续0.5h),γ射线照射(80Gy一次暴露)及γ射线照射后接着噪声暴露三种情况下豚鼠的听阈偏移。实验结果表明噪声暴露组豚鼠的听阈偏移在暴露后96h内恢复。γ射线照射组的最大阈移在照射后96h为9dB(4kHz)。γ射线照射后接着暴露于噪声的豚鼠的阈移大于噪声组和γ射线组阈移的总和。提示γ射线与噪声对豚鼠听阈产生了协同作用。     

Caspase-3在豚鼠内淋巴积水耳蜗中的表达

目的观察Caspase-3在豚鼠内淋巴积水耳蜗中的表达。方法实验分正常对照组和实验组,每组10只豚鼠。用破坏并阻塞豚鼠内淋巴囊的方法造成豚鼠内淋巴积水模型。3周后处死豚鼠,取耳蜗分别用石蜡及火棉胶包埋、切片,免疫组织化学方法观察caspase-3在耳蜗的表达。结果caspase-3在豚鼠内淋巴积水耳蜗中表达呈阳性,阳性区域为耳蜗外侧壁和螺旋神经节细胞。结论caspase-3在豚鼠内淋巴积水耳蜗中呈阳性表达,提示在内淋巴积水病理过程中存在耳蜗细胞凋亡。     

基于原子力显微镜测量内耳螺旋器的弹性特征

应用原子力显微镜分析内耳螺旋器(Corti器)不同部位的弹性特征。采用豚鼠内耳基底膜底回新鲜标本,用原子力显微镜在液相接触式测量,获得不同部位力曲线。经计算,对应Corti器相当于Hensen细胞、外毛细胞、柱细胞、内毛细胞、内指细胞、盖膜的部位及基底膜底面局部,其杨氏模量均值分别为46±1.7、59±0.9、250±31、140±2.8、430±29.9、210±7.2和230±8.8 kPa。结果表明,基底膜径向排列的组织结构不同,杨氏模量存在明显差异,在整块基底膜标本上测量Corti器各结构的杨氏模量能更准确地反映它们在生理状态下的弹性特征。     

胰岛素及其类似物与受体结合的负协同效应

本文结果表明除用豚鼠红细胞在15℃观察到负协同效应外,用脂肪细胞和豚鼠红细胞在其生理温度均未观察到负协同效应。比较了某些胰岛素类似物在15℃引起豚鼠红细胞胰岛素受体负协同效应的能力。     

胰岛素及其类似物与受体结合的负协同效应

本文结果表明除用豚鼠红细胞在15℃观察到负协同效应外,用脂肪细胞和豚鼠红细胞在其生理温度均未观察到负协同效应。比较了某些胰岛素类似物在15℃引起豚鼠红细胞胰岛素受体负协同效应的能力。     

豚鼠气管平滑肌化学介质敏感性与体征表型的相关性

目的研究豚鼠体征表型与气管平滑肌化学介质敏感性的相关性。方法根据体征表型眼睛颜色、毛色、性别差异选取36只豚鼠,将动物按体征表型分为白色黑眼雌性组（WBEF）,白色黑眼雄性组（WBEM）,白色红眼雌性组（WREF）,白色红眼雄性组（WREM）,杂色黑眼雌性组（VBEF）,杂色黑眼雄性组（VBEM）,每组动物各6只。用旋割法制备离体豚鼠气管螺旋条,以组胺histamine（浴槽浓度2.0×10^-3g/L）和乙酰胆碱acetylcholine（浴槽浓度2.0×10^-4g/L）诱导气管螺旋条收缩,用BL420生物信号采集系统与张力传感器测定标本张力变化值,分析豚鼠眼睛颜色、毛色、性别与组胺、乙酰胆碱诱导的气管螺旋条收缩效应强弱的关系。数据采用SPSS 11.5软件在α=0.05的信度下进行单因素方差检验。结果豚鼠毛色与眼睛颜色表型其气管平滑肌化学介质敏感性差异有显著性（P〈0.05）,白色体征表型豚鼠的气管平滑肌化学介质敏感性较杂色表型高,红色眼睛表型较黑色眼睛表型高。性别表型对其介质敏感性差异不显著。结论毛色、眼睛颜色表型不同其豚鼠气管平滑肌化学介质敏感性差异显著,性别表型不同其介质敏感性差异不显著,平喘动物模型宜优先选择白色红眼表型豚鼠。     

P物质、脑啡肽在豚鼠耳蜗的分布——免疫组织化学观察

本研究应用免疫组织化学方法系统地观察了P物质(SP)、亮氨酸脑啡肽(L-ENK)在豚鼠耳蜗的分布以及SP、L-ENK免疫反应阳性神经纤维与Corti's器毛细胞之间的关系,结果表明:SP的免疫反应活性(SP-IR)存在于耳蜗螺旋神经节的部分神经细胞及传入神经纤维中,在Corti's器的毛细胞下方亦可见SP免疫反应阳性纤维;L-ENK的免疫反应活性(ENK-IR)存在于耳蜗的传出神经纤维中。节内螺旋束、内螺旋束、隧道螺旋束、横贯纤维均含有大量的L-ENK免疫反应阳性纤维,Cort's器中的L-ENK免疫反应阳性终末与毛细胞之间具有密切接触,由此提示,SP可能为听觉初级传入神经递质之一;L-ENK作为传出神经递质或调质对听觉传入起调控作用。     

记录豚鼠耳蜗电位的外耳道慢性电极植入法

本文介绍用外耳道慢性电极植入法可以在较长时间内记录到清醒豚鼠的耳蜗电位(CAP和CM)。正常豚鼠的CAP(N_1)最大振幅平均达70—80μV。CAP(N_1)的潜伏期、阈值和最大振幅在4个月内均较稳定。因此用此法能远期观察清醒豚鼠耳蜗听功能的变化。     

卡那霉素耳慢性中毒对豚鼠耳蜗毛细胞中Bcl-2表达的影响

目的:探讨卡那霉素耳慢性中毒对豚鼠耳蜗毛细胞中Bcl-2表达的影响。方法:取20只豚鼠随机分为2组,实验组连续14d肌肉注射硫酸卡那霉素,200mg/(kg.d),对照组连续14d等量肌肉注射生理盐水,停药14d处死动物后制作耳蜗标本,处死前检测其ABR的变化,免疫组化及原位杂交法测定Bcl-2的表达。结果:豚鼠卡那霉素耳慢性中毒后,ABR阈值较对照组明显上升,Bcl-2阳性表达减低,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:卡那霉素耳慢性损害可能与抑制Bcl-2的表达有关。     

哮喘豚鼠肺内ADM表达变化及对离体气管条张力的作用

目的：通过观察肾上腺髓质素（ADM）mRNA在豚鼠哮喘模型肺内的表达及对哮喘豚鼠离体气管条张力的影响,研究ADM在支气管哮喘（简称哮喘）发病机制中的作用。方法：用原位杂交方法检测ADM mRNA在豚鼠哮喘模型肺内的表达,用组胺诱导豚鼠离体气管条收缩后,观察不同浓度的ADM对其收缩作用影响。结果：原位杂交结果显示正常及哮喘豚鼠肺内均有ADM mRNA的表达,但哮喘组较正常组明显增多（P＜0．05）,ADM可抑制组胺诱导的哮喘豚鼠离体气管条的收缩,并呈量效关系,当浓度达10^-8mol/L时抑经达到最大,而且即使加大ADM的浓度,抑制率未继续明显增加,并对致敏气管螺旋条的舒张作用明显大于正常气管螺旋条。结论：哮喘时,肺内ADM mRNA的表达明显增多,ADM可抑制组胺诱导的豚鼠离体气管条的收缩,浓度为10^-8mol/L时抑制率达到最大。提示ADM在哮喘发病过程中起重要作用。     

肌肉收縮的簡易实验

在中学《生理卫生》课本里,要求通过演示实验让学生观察到“肌肉收缩是神经刺激肌肉的结果”。这首先必须配制生理盐溶液,准备电源、电极、感应圈、支架和指示器,还要准备一套制作神经肌肉标本用的解剖器。在演示中,由于手续比较复杂,花费的时间较长,不能不影响其它內容的讲授。就效果来看,只能使学生观察到指示器的小幅摆动,这对他们的印象并不十分深刻。因此,我们在讲授这一內容     

Caspase-3在老年豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的表达

目的检测caspase-3在老年豚鼠耳蜗的表达。方法实验分两组:实验组和对照组,实验组豚鼠年龄为33至35个月之间,对照组豚鼠年龄为2至3个月。用免疫组织化学方法检测caspase-3在两组豚鼠耳蜗的表达。结果Caspase-3在实验组耳蜗的表达呈阳性,阳性区域主要存在于耳蜗螺旋神经节细胞。在对照组耳蜗的表达呈阴性。结论Caspase-3在老年豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞中呈阳性表达,提示caspase-3在豚鼠耳蜗老化过程中起重要作用。     

土法制作蛾类幼虫标本

在科研、教学或病虫害防治中,往往要制作昆虫标本。制作蛾类幼虫标本时,常因没有吹胀器而遭失败。我们在实践中用注射针管代替吹胀器,取得了好的效果,现介绍出来,供参考。一、用具:一支5ml针管;一小段竹子侧枝(很细的竹枝);细镊子;园杆铅笔、火炭。     

新霉素对豚鼠内耳毒性的研究

(一)以耳廓反射阈值的改变为指标,我们观察了新霉素中毒时豚鼠耳聋形成过程。在14只豚鼠按每天200毫克/公斤体重剂量,分两次腹腔内注射共9天,耳聋形成最早发生在给药后的第9天,最迟发生在第96天。15天内有9只动物耳聋。在7只豚鼠按每天50毫克/公斤体重剂量注射40—44天,耳聋形成最早发生在第38天,最迟在第114天。两组豚鼠耳聋的发生均包括两种类型:第一种类型为急性耳聋,从耳廓反射阈值开始提高发展到耳聋的过程短。第二种类型为慢性耳聋,从耳廓反射阈值开始提高到耳聋经过的时同长。中毒豚鼠一旦听阈提高则迟早将不可避免地发展到耳聋。(二)新霉素中毒过程中豚鼠内耳生物电与组织学的变化:(1)听觉功能轻度损伤时,微音器电位最大值最先下降,其“阈值”与听神经电位阈值和最大值均无改变。形态上耳蜗第一圈外毛细胞最先发生变性。而且在形态没有检查到变化时,生物电已有改变。(2)听觉功能中等程度损伤时,微音器电位最大值的下降比听神经电位的下降更为显著。微音器电位与听神经电位阈值均提高5—20分贝。外毛细胞变性加重,内毛细胞出现轻度变性。部分豚鼠螺旋神经节细胞中尼氏小体减少,核染色加深。(3)当听觉功能从中等程度损伤发展到耳聋的过程中,听神经电位逐渐下降到零,但仍可记录到低波幅微音器电位,该电位不是由毛细胞所产生,起源不明。外毛细胞轮廓和境界逐渐模糊,内毛细胞变性加剧,最后两者均消失。耳聋形成后历时较长的豚鼠,柯蒂氏器完全消失,支配内、外毛细胞的神经纤稚与蜗轴中的神经纤维全部退化。(三)皮层听区声诱发电位测定表明,在新霉素中毒豚鼠中未出现皮层诱发电位阈值提高的分贝数超过听神经电位阈值所提高的分贝值,或诱发电位消失而仍保留听神经电位的现象。可以认为皮层声诱发电位的改变是由于新霉素对听觉外周器官功能影响的结果。(四)旋转后眼球震颤实验表明,新霉素对豚鼠前庭功能影响很小。     

半夏泻心汤治疗糖尿病胃轻瘫的作用机制

本研究探讨ICC(胃肠道间质细胞)和Cx43(缝隙连接蛋白)在半夏泻心汤治疗豚鼠糖尿病胃轻瘫的过程中所起的作用及机制。制备半夏泻心汤含药血清并建立糖尿病胃轻瘫豚鼠模型。处死豚鼠并取材胃标本后免疫组化染色标记c-Kit和Cx43抗体,显微镜下观察并比较实验各组豚鼠ICC和Cx43的数量及变化,并通过透射电镜观察ICC的超微结构变化。结果显示:半夏泻心汤含药血清能明显增加糖尿病胃轻瘫豚鼠ICC的数量,并能修复其受损的超微结构;半夏泻心汤治疗组Cx 43阳性表达密集分布在胃体和胃窦部环形肌层中,阳性表达的强弱与ICC的阳性分布具有一致性。由此,我们可以推断出以下结论:ICC的数量显著减少并发生变性是发生糖尿病胃轻瘫的一个重要原因,半夏泻心汤含药血清能明显增加豚鼠ICC的数量并修复其受损结构,进而增强其胃动力并恢复功能,从而起到治疗豚鼠糖尿病胃轻瘫的作用。     

触觉剥夺后豚鼠桶状皮质DCX 阳性细胞的实验研究*

目的:观察豚鼠单侧触觉剥夺后豚鼠两侧桶状皮质的DCX阳性细胞数量的差别,探讨触觉剥夺对豚鼠桶状皮质神经发生的影响。方法:12只健康豚鼠随机分为2组,每组6只,制作豚鼠单侧(右侧)触觉(胡须)剥夺模型,之后常规饲养1月和2月灌注取材,用免疫组化和免疫荧光双标法观察同一只豚鼠两侧桶状皮质的DCX阳性细胞情况并比较其数量差异。结果:DCX免疫组织化学染色显示两实验组大脑皮层barrel区DCX阳性细胞数实验侧均明显多于对照侧;NeuN免疫组织化学染色显示两实验组动物大脑皮层barrel区两侧NeuN阳性细胞数差别无统计学意义;DCX和NeuN免疫荧光双标染色显示两实验组大脑皮层barrel区均可见双标细胞存在。结论:触觉剥夺后豚鼠两侧桶状皮质的DCX阳性细胞数具有明显差异性,可能是神经再生的表现。