蝉拟青霉菌丝体与天然蝉花中化学成分的比较分析

以天然蝉花Cordyceps cicadae做对比,对一株蝉拟青霉Paecilomyces cicadae菌株发酵菌丝体的化学成分进行了分析,包括粗成分、生物活性成分、无机元素、氨基酸、脂肪酸等。结果表明:蝉拟青霉菌丝体中虫草多糖的含量为33.2mg/g,甘露醇的含量为78.9mg/g,麦角甾醇的含量为0.6256mg/g,腺苷的含量为1.0620mg/g,钙、铁、锌、硒和锰微量元素的含量分别为5187.59μg/g、207.23μg/g、41.93μg/g、0.087μg/g和28.24μg/g,18种氨基酸齐全,不饱和脂肪酸是优势脂肪酸,以亚麻油酸、油酸为主,其相对含量分别为53.91%和20.63%,与天然蝉花相比,发酵菌丝体中虫草多糖、甘露醇、麦角甾醇、腺苷、氨基酸总量、必需氨基酸总量和不饱和脂肪酸的含量明显高于后者,其它化学成分和天然蝉花中相应成分基本一致。     

蝉拟青霉代谢产物清除DPPH自由基和抗真菌活性的研究

用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC法和酶标仪法对一株蝉拟青霉P3菌丝体和发酵液甲醇提取物的清除自由基活性进行了定性和定量测定,发现两种提取物具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/mL,于37℃下保温10min时,两种样品对0.4mg/mL的DPPH自由基的清除率分别可达55.52%和74.86%.以一种黑曲霉菌为指示菌,采用薄层色谱法对蝉拟青霉菌丝体和发酵液甲醇提取物进行抑菌活性试验,实验中根据抑菌圈大小判定代谢物抑菌活性的大小.同时,以致病菌白色假丝酵母菌为指示菌,采用牛津杯法对提取物进行进一步抑菌活性验证,结果表明,菌丝体和发酵液提取物样品浓度为5.0mg/mL时,其抑菌圈直径分别可达11.23mm和21.42mm.     

蝉拟青霉液体发酵条件优化

采用液体发酵蝉拟青霉,对蝉拟青霉的发酵条件进行优化,以提高蝉拟青霉胞外多糖产量及生物量。摇瓶发酵条件下,在单因素基础上设计正交实验确定各因素的最佳组合。优化后得最佳发酵培养基:蔗糖8%,牛肉膏0.75%,酵母膏0.125%,MgSO_4·7H_2O 0.3%,KH_2PO_4 0.2%,麸皮0.5%。该条件下胞外多糖产量为5.96 g/L,生物量为42 g/L,较优化前提高了1倍。采用发酵罐进行扩大培养,对分批发酵时的初糖浓度进行了优化,并分析了补料分批发酵对发酵过程的影响。发酵罐培养时最适初糖浓度为5%,此时生物量最高为38 g/L,多糖含量最高为5.5 g/L;采用补料分批发酵时,多糖产量最高为5.89 g/L,生物量最高为40 g/L,效果优于分批发酵。     

蝉拟青霉液体培养条件优化

[目的]建立能够有效提高蝉拟青霉液体培养效率的培养体系,增加其生物量。[方法]以蝉拟青霉生物量作为响应值,通过Plackett-Burman实验设计从8个试验影响因素中筛选出3个主要影响因素,基于3因素3水平的BoxBehnken设计法以及响应面分析法研究影响蝉拟青霉液体培养各因素之间的交互作用。[结果]通过Plackett-Burman设计法确定影响最为显著的因素为接种量、p H和温度,利用最陡爬坡试验确定最佳范围在接种量7%、p H 6.00、温度25℃附近,借助Box-Behnken设计法最终确定最佳液体培养条件为:葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、酵母膏2 g/L、KH2PO41 g/L、MgSO40.5 g/L、接种量6.65%、p H 6.00、温度24.01℃。优化后的培养体系所培养的蝉拟青霉其生物量从优化前的147.106 0 g/L提高到239.475 3 g/L,提高了62.79%。[结论]优化后的培养体系能够有效提高蝉拟青霉生物量,该方法对于优化蝉拟青霉生物量发酵条件是一种有效、可行的方法。     

蝉拟青霉菌丝体降血糖组分确证

[目的]考察蝉拟青霉5704s菌丝体提取液的降血糖作用,探索发挥降血糖作用的主要功能组分。[方法]制备蝉拟青霉5704s菌丝体提取液,分离提取液中峰1、峰2蛋白,采用小鼠试验和体外试验测定菌丝体提取液以及不同活性组分的降血糖作用,SDS-PAGE电泳测定主要降血糖组分分子量。[结果]蝉拟青霉5704s菌丝体提取液具有较好的降血糖作用,血糖下降率为36.85%;体外试验中,提取液峰1蛋白的α-糖苷酶抑制率为71.23%,峰2蛋白的抑制率为63.17%;小鼠试验中,提取液峰1蛋白的血糖下降率为40.23%,峰2蛋白的血糖下降率为25.70%;体外试验和小鼠试验均表明提取液峰1蛋白的降血糖效果优于峰2蛋白,峰1蛋白的分子量为57 781 Da。[结论]确定蝉拟青霉5704s菌丝体提取液中发挥主要降血糖功效的组分是峰1蛋白。     

高雄山虫草及其细脚拟青霉无性型

报道采自安徽省天堂寨自然保护区的高雄山虫草Cordyceps takaomontana及其无性型细脚拟青霉Paecilomyces tenuipes ,应用单子囊孢子分离鉴定和微循环产孢的方法确证了两者的对应关系,并修订了高雄山虫草的原始描述。双梭孢虫草C．bifusispora可能为高雄山虫草的同物异名。同时采集的具数个红色子座且有双梭形子囊孢子的虫草不是同一个种。     

高雄山虫草及其细脚拟青霉无性型

报道采自安徽省天堂寨自然保护区的高雄山虫草Cordyceps takaomontana及其无性型细脚拟青霉Paecilomyces tenuipes,应用单子囊孢子分离鉴定和微循环产孢的方法确证了两者的对应关系,并修订了高雄山虫草的原始描述。双梭孢虫草C．Bifusispora可能为高雄山虫草的同物异名。同时采集的具数个红色子座且有双梭形子囊孢子的虫草不是同一个种。     

高雄山虫草无性型细脚拟青霉的核型分析

对高雄山虫草无性型细脚拟青霉的酶解条件、原生质体制备、电泳条件和核型进行了研究。以10mg/mL相同浓度的溶壁酶、纤维素酶和蜗牛酶配成混合酶解液,在30℃、120r/min振荡处理18h菌龄的菌丝2.5h,获得约107个/mL的原生质体悬浮液。浓缩至约108个/mL原生质体悬浮液与1.4%的低熔点琼脂糖等体积混合制胶,50℃蛋白酶K酶解48h,ET液洗3次(每次1h),浸没,4℃保存。以温汉逊氏酵母Hansenula wingei YB-4662-VIA和粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe 972h-染色体DNA作为标准,利用钳位均匀电场脉冲电泳系统电泳,细脚拟青霉染色体组被分离成8条带,利用AlphaEase Fc软件分析,估计其大小在0.43-5.78Mb之间,大小分别为:0.43、2.45、2.55、2.88、3.28、3.94、4.70、5.78Mb,推测细脚拟青霉核型大小约为26.01Mb。     

Accelerated nrDNA evolution and profound AT bias in the medicinal fungus Cordyceps sinensis

Cordyceps sinensis is a reputed medicinal fungus growing parasitically on buried larvae of ghost moths in Asian high-altitude grassland ecosystems. We have analysed the intraspecific ITS nrDNA (ITS1, 5.8S gene, ITS2) variation among 71 sequences of C. sinensis available in EMBL/Genbank. The ITS sequences, submitted to Bayesian ML analyses, were distributed into five groups, referred to as A–E. Nine of the sequences (groups D and E) grouped with distantly related hypocrealean/clavicipitalean taxa and are interpreted as sequences erroneously accessioned under wrong taxon names. The remaining 62 sequences constituted three highly supported clades (groups A–C), that may represent cryptic (phylogenetic) species currently ascribed to C. sinensis. A remarkably high sequence divergence occurred in the 5.8S gene between the three groups. Sequences of groups B and C showed accelerated substitution rates and high AT nucleotide bias. We hypothesize that the accelerated evolution and AT bias have been caused by a shift in life historical attributes or ecology. We also suggest that the recorded differences in medicinal effects among C. sinensis populations may be attributed to the existence of genetically differentiated chemotypes in this morphotaxon.     

贵阳地区蝉花微生态系统中细菌种群结构与功能

【目的】探索自然生态下蝉花内菌核、菌膜和环境细菌群落结构、功能及其相互关系。【方法】对细菌16S rRNA扩增片段进行高通量测序,分析贵阳市大将山和贵阳森林公园的蝉花内菌核、菌膜及其生境土壤的细菌群落组成、多样性及潜在功能。【结果】蝉花内菌核样本共检测到细菌562个属,菌膜样本521个属,菌际土样本578个属。两地的各组样本细菌群落结构相似,内菌核样本中假单胞菌属Pseudomonas、沙雷氏菌属Serratia占优势地位;菌膜样本中假单胞菌属和氨基杆菌属Aminobacter占优势;土壤样本以未分类的酸杆菌纲Acidobacteria和黄杆菌科Xanthobacteraceae为优势属。Venn图分析显示,菌际土样本包括了菌膜样本的大多数属,内菌核样本拥有较多的特有属,如沃尔巴克氏体属Wolbachia和立克次氏体Rickettsia等。PICRUSt功能预测结果显示,共计24个基因功能家族,主要与物质能量的代谢运输、细胞的行为发生及调控等功能相关。【结论】蝉花及其微生境中细菌具有丰富多样性,它们的潜在功能可能与营养物质的新陈代谢有关,对蝉花的个体生长发育有重要作用。研究结果对蝉花虫...     

1株人工栽培蛹虫草病原真菌的分离鉴定及生物学特性研究

为明确蛹虫草（Cordyceps militaris）栽培过程中发现的一种病原真菌及其生长特性,采用组织分离法自发病部位分离获得1株真菌CCBH-L,经柯赫法则确定其致病性,通过形态学特征及ITS序列分析,确定菌株CCBH-L为轮枝样镰刀菌(Fusarium verticillioides)。该病原菌在感染初期,通过竞争生长空间和营养物质,影响蛹虫草菌丝体生长和原基分化,导致子实体畸形,后期菌丝体蔓延至已经形成的子实体,导致子实体生长受阻。该病原菌生长的适宜温度为25~30 ℃,可见,高温利于该病原菌的生长,其生长的适宜pH值为6.0~8.0,适宜含水量为60%~75%。因此,在蛹虫草栽培过程中,将温度控制在20 ℃以下,可抑制该病原菌的生长,降低感染率。     

Cesariella, a new genus of Laboulbeniales

Cesariella graeca gen. sp. nov. is described to accommodate a new species of the Laboulbeniales (Fungi, Ascomycota) parasitic on the endogean ground beetles Reicheadella aetolica and R. bischoffi (Coleoptera, Carabidae) from Greece. Cesariella is distinguished from the allied genus Laboulbenia by the presence of two cells borne on the inner side of cell III, and by the presence of a conspicuous remnant of the spore apex protruding laterally near the base of the appendage.     

环链虫草Cordyceps cateniannulata对番茄生长和抗氧化酶活性的影响

【目的】评估环链虫草Cordyceps cateniannulata对植物促生和植物抗氧化酶活性的影响。【方法】本研究利用浸种法将环链虫草接种于番茄植物体,在接种后的第30天和60天,通过番茄株高、根长、地上和地下部分的干鲜重指标评价其对番茄生长的影响;在接种后第10、20、30、60和90天,通过选择性培养基分析其在番茄不同组织中的生存情况,使用形态学及DNA序列比对的方法检验所分离菌株与原有菌株的一致性。在处理后的第30天,检测番茄叶片中的过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量,观察环链虫草对番茄的抗氧化酶活性影响。【结果】环链虫草可定殖于番茄幼苗且对番茄生长有显著促进作用,菌株对植株的定殖偏好性分别为根部>茎部>叶部。酶活检测结果表明,处理组番茄叶片防御酶活性均呈显著升高的趋势,其中POD、CAT、SOD活性分别比对照增加了52.21%、75.31%和158.59%,MDA含量下降了35.15%。【结论】环链虫草可以通过浸种的方法感染并定殖番茄幼苗的根、茎、叶,促进番茄幼苗的生长并提高番茄抗氧化酶活性,具有较好的田间...     

Genome Analysis inNeurospora crassa;Cloning of Four Lociarginine-1(arg-1),methionine-6(met-6),unknown-7(un-7), andribosome production-1(rip-1) and Associated Chromosome Walking

We have cloned fourNeurospora crassagenes by complementation analysis. Cloned genes include thearginine-1(arg-1),methionine-6(met-6),unknown-7(un-7), andribosome production-1(rip-1) loci. Chromosome walks were initiated in ordered cosmid libraries from the cloned loci. A total of about 700 kb of theNeurosporagenome is covered in these walks.     

Na_2SeO_4对蛹虫草子实体生长的影响

蛹虫草是一种药食两用真菌,具有与冬虫夏草相似的功能,且富硒能力较强。本研究通过大量的人工栽培试验,旨在探究不同浓度Na_2SeO_4对新疆本地蛹虫草子实体生长的影响。试验表明,质量浓度为20 mg/L的Na_2SeO_4对蛹虫草的生长不产生显著影响,但蛹虫草各项生物学指标均随着培养基中外源Na_2SeO_4浓度的增加而呈下降趋势,说明随着外源Na_2SeO_4浓度的增加会对蛹虫草的生长产生抑制效应,当外源Na_2SeO_4质量浓度达到200 mg/L时,生产的蛹虫草已不具备商品价值。由此可见,20 mg/L的质量浓度是以Na_2SeO_4为硒源进行蛹虫草富硒研究的安全浓度。该研究为富硒产品开发寻找新的硒源开辟了新思路,为新疆地区进一步大规模栽培富硒蛹虫草提供一定的参考,但是对以Na_2SeO_4为硒源的最佳富硒浓度还有待于进一步研究。     

灵芝真菌液体发酵及其产物应用的研究进展

灵芝作为一种白腐真菌,同时也是珍稀的食药用真菌,富含多种生物活性成分。液体发酵技术生产周期短、效率高、产量大、品质稳定,是开发利用灵芝资源的重要途径。近年来,灵芝属真菌菌丝体液体发酵技术的开发与应用取得了较大进展。本文对灵芝属真菌液体发酵产物的主要活性成分及其药用效果、液体发酵工艺优化和发酵产物的应用进行综述,并对本领域的未来进行展望。