宫颈癌中p53表达和病毒感染的研究

应用PCR对121例宫颈脱落细胞和组织分别检测HPV-16／18和HSV-2DNA。同时应用免疫组化S-P法检测76例宫颈组织中P53过度表达。结果发现,宫颈癌组织中HPV-16／18和HSV-2阳性率分别为61．3％和32．3％,慢性宫颈炎组HPV-16／18和HSV-2阳性率分别为22．5％和20．0％,与正常宫颈组比较均有显著性差异。宫颈癌中HPV-16／18和HSV-2混合感染率为16．1％。p53过度表达率在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌组织中呈梯度递增。另外,宫颈癌组织中P53过度表达与HPV-16／18、HSV-2的感染无相关性。提示：宫颈癌的发生与HPV-16／18关系密切,HSV-2可能与HPV-16／18协同作用导致宫颈癌的发生。宫颈组织中p53过度表达率与宫颈癌的进程有关,这在宫颈癌的防治方面有一定的临床意义。     

Epstein-Barr病毒胸苷激酶在大肠杆菌表达的研究

研究重组EB病毒胸苷激酶(thymidine kinase of Epstein-Barr virus,EBVTK)在大肠杆菌中的表达,将EB病毒的tk基因与原核表达载体pBV220进行重组,构成质粒pBV220/tk,并在大肠杆菌DH5α中获得表达;采用限制性内切酶分析进行重组质粒的鉴定,SDS-PAEG电泳和Western blot反应检测蛋白的表达。结果显示成功地构建了pBV220/tk质粒,并有重组蛋白的表达,该重组蛋白可与鼻咽癌病人血清发生特异性反应。结果表明该重组蛋白可作为抗原应用于鼻咽癌病人血清TKIgA抗体的检测,为重组TK的生产,临床应用提供了实验依据。     

鼻咽癌Epstein-Barr病毒的原位分子杂交研究

应用Epstein-Barr病毒编码的小RNA－1（Epstein-Barr virus encoded small RNA-1,EBER-1)分子探针进行原位分子杂交,检测沈阳地区鼻咽癌的Epstein-Barr病毒存在状况及意义。结果发现：EBER－1杂交信号定位于鼻咽癌的癌细胞核,在正常的鼻咽粘膜上皮细胞、间质细胞、粘液腺及淋巴细胞均为阴性。在53例鼻咽癌病例中,37例阳性,阳性率为69.8%。EBER－1的阳性表达与鼻咽癌的分化程度呈负相关,与患的生存期未见明显关系。提示：应用EBER－1分子探针可进行回顾性研究：EB病毒的存在与鼻咽癌的分化程度成负相关。     

EB病毒LMP1及其CTAR1、CTAR2导入人HNE2鼻咽癌细胞的研究

用电穿孔转染法,建立稳定表达野生型LMP1及其不同突变体的鼻咽癌细胞系,并以这些细胞系为材料,用MTT法检测增殖期活细胞,观察LMP1及其不同的结构域对鼻咽癌细胞生长的影响。结果得到了LMP1及其三种突变体、空白载体表达的鼻咽癌细胞系;HNE2－LMP1（野生型）、HNE2－LMP1△185-351(CTAR1缺失型）、HNE2－LMP1（1－231）（CTAR2缺失型）、HNE2－LMP1（1－185）（羧基端胸浆区缺失型）、HNE2－pSG5(空载体型）。进一步证实HNE2－LMP1、HNE2－LMP1（1－231）、HNE2－LMP1△185－351平均吸光度（A）比值高于对照组HNE2－pSG5及HNE2（P＜0.01）。这提示：EB病毒LMP1及其LMP1（1－231）和LMP1△185－351在体外明显促进HNE2细胞增殖。结果表明EB病毒LMP1可能在鼻咽癌中发挥着重要的作用。     

Epstein-Barr病毒膜抗原基因免疫的研究

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因,插入含有ＣＭＶ启动子的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３下游ＢａｍＨＩ位点,构建成真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＭＡ。将纯化的ＤＮＡ注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗ＥＢ病毒ＭＡ特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用（ＡＤＣＣ）,特异性Ｔ淋巴细胞增生性反应及细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤作用。基因免疫与基因－蛋白联合免疫效果相似。不同启动子控制下的ＭＡ基因,诱发小鼠免疫应答无明显差异。     

宫颈癌中p53表达和病毒感染的研究

应用PCR对121例宫颈脱落细胞和组织分别检测HPV-16/18和HSv-2 DNA.同时应用免疫组化S-P法检测76例宫颈组织中p53过度表达.结果发现,宫颈癌组织中HPV-16/18和HSv-2阳性率分别为61.3%和32.3%,慢性宫颈炎组HPV-16/18和HSV-2阳性率分别为22.5%和20.0%,与正常宫颈组比较均有显著性差异.宫颈癌中HPV-16/18和HSV-2混合感染率为16.1%.p53过度表达率在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌组织中呈梯度递增.另外,宫颈癌组织中p53过度表达与HPV-16/18、HSv-2的感染无相关性.提示宫颈癌的发生与HPV-16/18关系密切,HSV-2可能与HPV-16/18协同作用导致宫颈癌的发生.宫颈组织中p53过度表达率与宫颈癌的进程有关,这在宫颈癌的防治方面有一定的临床意义.     

胃粘膜损伤中EB病毒感染与P53抑癌基因突变的研究

为了探讨EB病毒（EBV）感染与胃癌发生的关系,应用PCR技术对166例胃粘膜损伤标本的EBVDNA进行检测．其中66例应用银染PCR－SSCP分析技术检测了p53exon5～8突变情况,10例应用直接法原位PCR技术检测了EBV在组织中的感染情况。结果166例标本中EBV感染率为30．1％;EBV在细胞中感染大体是弥散型,主要存在于细胞核。66例标本中p53基因突变率为54．5％。对比分析,EBV阳性标本中p53基因突变率为75％（21／28）,EBV阴性标本中p53基因突变率为39．5％（15／38）。结果表明,EBV对胃粘膜组织细胞具有易感性,p53基因突变在胃粘膜病变中是一个常发事件,EBV感染与p53基因突变之间存在着高度相关性．对癌症的发生具有重要作用。     

胃粘膜损伤中EB病毒感染与P53抑癌基因突变的研究

为了探讨EB病毒(EBV)感染与胃癌发生的关系,应用PCR技术对166例胃粘膜损伤标本的EBV DNA进行检测,其中66例应用银染PCR-SSCP分析技术检测了p53 exon5～8突变情况,10例应用直接法原位PCR技术检测了EBV在组织中的感染情况.结果166例标本中EBV感染率为30.1%;EBV在细胞中感染大体呈弥散型,主要存在于细胞核.66例标本中p53基因突变率为54.5%.对比分析,EBV阳性标本中p53基因突变率为75%(21/28),EBV阴性标本中p53基因突变率为39.5%(15/38).结果表明,EBV对胃粘膜组织细胞具有易感性,p53基因突变在胃粘膜病变中是一个常发事件,EBV感染与p53基因突变之间存在着高度相关性,对癌症的发生具有重要作用.     

表达EB病毒主要膜蛋白的非复制型重组痘苗病毒毒力及体液免疫反应

利用表达EBV GP350/220的非复制型重组痘苗病毒VMA△CK及复制性重组痘苗病毒VMA,注射乳鼠脑内,观察毒力。同时,用VMA△CK及VMA免疫Bal/c小鼠,经ELISA测定其特异性抗体水平。免疫血清用抗体中和EBV感染Raji细胞抑制产生早期抗原（NEA）法测定其中和抗体滴度。将免疫血清与P3HR-1细胞共同孵育后,测上清中EBV滴度以观察抗体体制EBV从P3HR-1细胞中释放效应。结果发现,VMA△CK毒力明显低于VMA,其LD50为4.5PFU/0.02ml,而VMA△CK的LD50大于10^6PFU/0.02ml。VMA△CK与VAM免疫血清中抗GP350/220抗体水平无明显差异,而初兔后抗痘苗病毒抗体水平VMA免疫组较VMA△CK免疫组高5倍左右。VMA△CK免疫组血清中和抗体水平没有明显差异。VMA△CK免疫血清稀释度与P3HR-1细胞培养上清中EBV滴度有剂量依赖关系。     

采用原位杂交及电镜检测CR2转染小鼠细胞的EB病毒感染

EB病毒不能感染小鼠是因为小鼠CR2受体构像与人的不同,通过对小鼠CR2受体进行定点空变,然后将野生型和突变型小鼠CR2／1（MCR2／1）及人CR2（hCR2）用基因转移技术导入小鼠鼻咽上皮细胞系（TMNE）进行表达,观察转染阳性细胞是否具有结合EB病毒的能力,EBER－1杂交结果显示,只有转染hCR2和空变型MCR2（mtMCR2)的TMNE细胞可以感染EB病毒,但是前感染EB病毒的阳性率比后高的高得多。电镜结果也进一步证实EB病毒可以感染这两种细胞,这为进一步研究EB病毒进入细胞的机制及建立EB病毒相关的鼻咽癌动物模型奠定了良好的基础。     

结直肠癌P53蛋白定量分析及其与肿瘤生物学行为的关系

应用MD-20显微图象分析仪对30例结直肠癌的P53蛋白免疫组织化学反应产物进行定量测定,以观察P53蛋白相对含量与肿瘤生物学行为的关系.结果显示:结直肠癌P53蛋白MOD值与PCNA增殖指数呈正相关(P<0.05).P53蛋白MOD值大的肿瘤多里浸润性生长方式,且浸润至浆膜外者多(PM<0.01,P<0.05).淋巴结转移与MOD值无明显关系(P>0.05).结果提示:结直肠癌P53蛋白相对含量对肿瘤的生物学行为有重要影响.     

外阴硬化性苔癣组织P53、PCNA表达、DNA含量及与细胞增殖的关系

探讨外阴硬化性苔癣组织中的 P5 3、PCNA表达 ,DNA含量与细胞增殖的关系。免疫组化方法测定 2 0例外阴硬化性苔癣组织和 10例正常外阴皮肤中 P5 3、 PCNA蛋白表达 ;图像分析技术检测两组基底层细胞核形态及 DNA含量。结果显示 ,外阴硬化苔癣组 P5 3阳性表达率为 40 % ,与正常皮肤比较 P<0 .0 5 ,PCNA阳性表达率为 70 % ,与正常皮肤比较 P>0 .0 5 ,阳性表达主要分布于棘层、颗粒层 ;基底细胞核显著变小和 DNA含量降低 (P<0 .0 5 )。结果表明外阴硬化性苔癣组织中存在细胞增殖异常     

胚胎期接触双酚A对雄鼠睾丸内PCNA和p53表达的影响

目的研究胚胎期接触双酚A(Bisphenol A,BPA)对雄性胎鼠睾丸发育的影响及睾丸内增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)和p53表达的影响。方法母鼠怀孕后第2天对其灌服双酚A(剂量5,50,100 mg/ml/day),一直持续分娩,F1代雄性小鼠饲养至75日龄,观察BPA对仔鼠成年后睾丸结构和PCNA和p53表达的影响。结果发现BPA处理组睾丸发育受到抑制,曲细精管直径和管腔直径变小(P0.05),管腔内出现大量胞质残余体,部分管腔出现潴留管腔液,支持细胞生长受到抑制,生精细胞排列紊乱,细胞质出现空泡化。免疫组织化学结果显示在BPA处理组,PCNA除了在精原细胞大量表达外,在初级精母细胞中表达量明显升高(P0.05,P0.01),免疫荧光结果显示胚胎期接触BPA导致成年后睾丸内p53蛋白表达量显著升高(P0.05,P0.01)。结论胚胎期接触BPA对雄鼠睾丸发育有着长期的不良影响,可能源于BPA引起细胞的异常增殖和凋亡。     

ERK_2在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的研究ERK2在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化S-P法检测食管正常黏膜、癌旁组织及食管癌组织中ERK2表达状况。结果食管正常黏膜、癌旁组织及食管癌组织中ERK2表达率分别为20.0%(4/20)、45.7%(16/35)及86.2%(81/94),食管癌组织中ERK2表达率明显高于正常黏膜及癌旁组织组(P<0.05)。正常黏膜组和癌旁组织组ERK2表达率无明显差异(P>0.05),食管癌组织中ERK2表达与患者年龄、性别、肿瘤浸润深度、组织分化、淋巴结转移、临床分期及其它临床病理因素无关(P>0.05)。结论ERK2过表达在食管癌发生中起重要作用,单独检测ERK表达可能无助于判断患者的预后。     

鼻咽癌患者血清中抗Epstein-Barr病毒早期和晚期膜抗原抗体的检测

对Epstein-Barr(EB)病毒抗原的研究,发现有淋巴细胞确定的膜抗原(Lydma)、早期抗原(EA)、壳抗原(VCA)、核抗原(EBNA)、早期膜抗原(EMA)和晚期膜抗原(LMA)。除了Lydma抗原外,鼻咽癌患者对上述抗原均产生相应的IgG和IgA抗体。因而研究这些抗体,对阐明EB病毒与鼻咽癌的关系及鼻咽癌的早期诊断都十分有价值。     

Epstein—Barr病毒基因组在鼻咽癌组织中转录的特征

对ＥＢ病毒基因在鼻咽癌活检组织细胞内的转录进行了较系统的探测。实验结果表明,ＥＢ病毒基因组在鼻咽癌活检组织中以附加体（Ｅｐｉｓｏｍｅ）形式存在,而其基因转录有如下特征：（１）ＥＢ病毒在所有鼻咽癌组织细胞中都表达ＥＢＮＡ－１,并且此基因转录产物由一个在ＢａｍＨＩ－Ｆ区的启动子（Ｆｐ）驱动;（２）潜伏感染膜蛋白（Ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＭＰ）和末端蛋白（Ｔｅｒｍｉｎａｌ ｐｒ     

多药耐药基因在肝细胞癌中的表达及与p53、PCNA表达的相关性研究

目的　研究肝细胞癌 (HCC)组织中多药耐药基因MDR 1与p5 3蛋白及增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的关系 ,旨在从基因水平进一步探讨预测化学治疗效果的可行性。方法　利用免疫组织化学方法 (S P法 )研究 30例肝穿活检的肝癌组织中MDR 1、p5 3和PCNA的表达。结果　 30例肝细胞癌中MDR 1的阳性表达率为 5 6 6 7% ,MDR 1阳性表达与组织学分级无关 (P >0 0 5 )。MDR 1表达与 p5 3、PCNA表达间无相关性 (P >0 0 5 )。结论　通过检测MDR 1基因可以对肝细胞癌病人进行化学治疗敏感性预测 ;肝细胞癌中MDR 1基因表达不依赖于 p5 3和细胞增殖这些因素。     

P16、P27蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的为探讨P16、P27蛋白在食管鳞状上皮、增生上皮和癌变上皮中表达状况及其与鳞状细胞癌发生、进展和转移的相关性.方法采用SP免疫组织化学方法,检测72例(其中活检标本13例)食管癌组织中P16、P27蛋白的表达情况.结果 P16、P27在食管癌和增生性上皮均有阳性表达,但两者相比均无统计学意义(P>0.05),在正常上皮组均无阳性表达;P16、P27在高分化鳞癌组阳性表达率均显著高于低分化鳞癌组(P<0.05);P16、P27在伴有淋巴结转移的食管癌组与不伴有淋巴结转移组比较差异显著(P<0.05).P16在原发食管癌组阳性表达率和淋巴结转移癌中比较具有显著性差异(P<0.05).结论 P16、P27基因蛋白在食管癌组织中的表达与病理分化程度有关;P16的表达与转移癌的形成有关;P16、P27表达与患者性别、年龄、肿瘤发生部位、浸润深度无明显相关性.