基于磁性纳米微球的Gamma干扰素酶联免疫检测方法建立

目的：建立及评价使用磁性纳米微球作为固相载体的人酌干扰素（Interferon-gamma,IFN-gamma）双抗体夹心酶联免疫吸附实验 （Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测方法。方法：以杂化细乳液合成法制备磁性纳米微球,将其作为免疫检测的固相 载体。将磁性微球与IFN-酌抗体进行偶联,建立基于磁性微球的ELISA 检测方法,检测人IFN-gamma,绘制IFN-gamma标准曲线并进行方法 学评价。结果：获得包被有人IFN-gamma抗体的免疫微球, 抗体偶联率为54.5 %。用它建立IFN-gamma的双抗体夹心的ELISA 检测方法,检 测范围为0-1000 pg/mL,相关系数为0.9996,灵敏度23.2 pg/mL,功能灵敏度0 pg/mL,批内和批间变异系数（Coefficients of Variance,CVs）＜8 %,检测总共需要2 小时。结论：成功制备了IFN-酌免疫微球并建立了定量检测人IFN-gamma的双抗体夹心磁珠 酶联免疫方法。     

氯霉素酶联免疫检测方法的研究

通过活化琥珀氯霉素的羧基使其与蛋白联结合成了免疫抗原 ,并制备了氯霉素的多克隆抗体 ,建立了氯霉素直接竞争酶联免疫检测方法 ,检测时间在 1h之内。抗体的ELISA效价达 3.2× 10 5以上 ,I50 为 12 .9ng ml,检测范围为 0 .2 4ng ml- 6 78.8ng ml。抗体与琥珀氯霉素的交叉反应率为 174 .5 4 % ,与其它抗生素的交叉反应率均小于 0 .0 1%。牛奶样品中平均添加回收率为10 6 .5 6 %。所建立的氯霉素酶联免疫检测方法达到了我国牛奶氯霉素残留限量 0 .2 5ng ml的要求 ,为国产的商品化氯霉素酶免疫检测试剂盒的研制奠定了基础     

猪O型口蹄疫病毒抗体化学发光酶联免疫检测方法的建立

表达并纯化猪O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1重组蛋白作为检测抗原,建立了一种快速检测猪O型口蹄疫病毒抗体的化学发光酶联免疫(CLEIA)检测方法。建立的VP1-CLEIA方法特异性为100%,板内变异系数在1.10%–6.70%之间,板间变异系数在0.66%–4.80%之间,具有较好的特异性和重复性,且灵敏度高于ELISA方法。通过对山东、辽宁、河北地区采集的250份临床血清的检测表明,该方法与间接ELISA试剂盒的符合率为93.50%,与液相阻断ELISA试剂盒的符合率为94.00%,表明本次建立的VP1-CLEIA检测方法可以用于猪O型FMDV感染或疫苗免疫后抗体水平检测。     

百日咳丝状血凝素酶联免疫检测法的建立

目的建立百日咳组分疫苗丝状血凝素(FHA)抗原含量监控的ELISA检测法。方法制备的多克隆抗血清,经辛酸硫酸铵法纯化抗体,用过碘酸钠氧化法辣根过氧化物酶标记,以棋盘滴定法确定最佳包被抗体及酶标抗体的浓度配伍,建立了双抗体夹心ELISA检测法。结果对双抗体夹心ELISA法的特异性、最佳线性范围、检测限度、精密度、准确度、测定限量、适用性的一系列验证试验表明,该方法与百日咳组分疫苗中PT和Prn无明显交叉反应,特异性较好。在0至20 ng/mL测量区间有最佳线性,相关系数大于0.99;经实验内12次及不同试验间3次测定16、8、4 ng/mL中的FHA含量,变异系数在0.2%～11.4%间,回收率在96.9%～114.5%间,精密度及准确度验证均符合常规质控要求,因此测定限量为4 ng/mL。结论该方法能有效检测出百日咳杆菌培养上清中的FHA含量,可用于百日咳组分疫苗生产过程的中间品质量控制。     

玉米赤霉烯酮单克隆抗体酶联免疫测定方法的建立及初步应用

用ZEN—BSA人工抗原免疫BALB／c鼠,经融合、筛选和克隆化得到可稳定分泌抗ZEN单克隆抗体的杂交瘤细胞株ZEN—lC6。zEN一lC6属IgG₁,纯化腹水抗体效价为10^-5,与5种衍生物的交叉反应系数为0.16～1.20％。用ZEN一1C6建立了检测食品(玉米、小麦、大米)中玉米赤霉烯酮的CIEIA法。该法检测纯毒素的线性范围为5～1000ng／ml,最低检出浓度为0．1ng／ml,平均回收率为84．0～105．5％。用该法测定了81份样品,均有ZEN毒素检出。     

兔肝细胞膜高密度脂蛋白受体酶联免疫检测法的研究

用辣根过氧化物酶标记羊抗人apoAI-IgG,建立了检测兔肝细胞膜HDL受体的酶联免疫吸附检测法.测定时, HDL结合量按抗体-配体-抗配体抗体酶交联物反应制作的标准曲线确定;膜蛋白非特异吸附则用与酶交联的抗体来源相同的同种动物血浆HDL平行抑制试验消除.实验测得正常家兔肝细胞膜HDL受体K_d值为7.17±1.18 mg/L,B_max值为(622.5±146.1)mg/g(n=7).     

水杨酸间接酶联免疫法的建立

水杨酸（salicrlicacid，SA）在单子叶和双子叶植物中普遍存在。它能诱导若干天南星科植物佛焰花序产热，抑制乙烯的生物合成。尤其重要的是，SA是诱导烟草、黄瓜等植物产生整株获得性抗性（systemicacquiredrest。tance，SAR）的内源信号物质[5，6]。因此，SA在植物体内的作用越来越引起人们的重视。目前对SA的定量检测大多采用HPLC等理化方法［‘，’，’，“j，这些方法对植物材料的需要量较大，且需冗长的纯化处理。虽然Bennett等“’早在1987年即用个氨基水杨酸（4－－aminosalicylicacid，4－－ASA）与载体蛋白偶联制备了水杨…     

玉米赤霉烯酮的直接酶联免疫分析

玉米赤霉烯酮(zearalenone)是玉米赤霉菌(Gibberella zeae)的一种次生代谢产物,已被证明,它不但具有动物雌性激素的作用,还是某些真菌的性激素。我们已从多种植物体内分离出与春化作用密切的相关的活性物质,经分析与鉴定,证明它恰     

检测恒河猴血清中trastuzumab浓度的一种直接酶联免疫竞争法

采用ELISA法建立检测恒河猴血清中trastuzumab的酶联免疫竞争法,为研究人体内trastuzumab的药物动力学学和药效学提供依据。方法的测量范围是1～100μg／mL,最低检测限为1．0μg／mL。板内精密度范围91％～107％,相对标准偏差为1．5％～4．9％。板间精密度范围102％～110％,相对标准偏差为2．7％～15．4％。方法中未显示与重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白、重组抗CD20单克隆抗体、丙种球蛋白等的交叉反应。此方法的特异性、灵敏度、精密度和准确度均满足恒河猴血清样品的分析,是检测猴和人体内trastuzumab的理想方法。     

白喉类毒素酶联免疫检测法的建立及初步应用

目的建立测定吸附无细胞百白破联合疫苗中白喉类毒素酶联免疫检测(ELISA)方法,并进行验证及初步应用。方法以高效价兔抗DT多克隆抗体和相应酶标抗体建立双抗体夹心ELISA法,确定线性范围同时验证该方法的重复性和特异性等确定检测限度,并初步应用。结果 DT含量在0~0.0160 Lf/m L范围内反应曲线线性关系良好(r0.99)。该方法与破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)、百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)、百日咳丝状血凝素(Filamantous hemagglutinin,FHA)与黏着素(Pertactin,Prn)无明显交叉反应,重复性好、特异性较强,精密度及准确度验证均符合常规质控要求,通过验证确定的准确检测范围为0.000 8~0.016 0 Lf/m L;检测限度为0.000 8 Lf/m L。该方法对DT抗原进行了吸附率的检测,同时检测了10批白喉类毒素原液与《中华人民共和国药典》三部2010年版规定的絮状单位检测方法进行对比,变异系数低于20%。结论建立了白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,为吸附无细胞百白破联合疫苗生产过程中白喉类毒素含量的质量控制提供了有效技术手段。     

利用SEC—HPLC测定鼠神经生长因子的纯度

目的：建立检测鼠神经生长因子（mNGF）纯度的分子排阻高效液相色谱法（SEC-HPLC）。方法：利用TSK G3000 SWXL分析柱和Waters 2695/2487高效液相色谱系统检测mNGF标准品纯度,并对方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、检测限及耐用性等指标进行评估。结果：空白溶剂在mNGF积分范围内无特异峰出现;样品浓度与吸收峰之间线性回归系数R2=0.9998;6次进样峰面积相对标准偏差（RSD）为1.18%;中间精密度分析RSD为0.45%;检测限为0.2μg;耐用性实验表明磷酸盐浓度在0.2~0.3 mol/L之间变动对检测结果无影响。结论：各项指标符合规定,SEC-HPLC法可用于检测mNGF的纯度。     

神经生长因子与冻干异体神经桥接大鼠神经缺损的研究

实验采用冻干处理的异体神经与外源性神经生长因子（ＮＧＦ）结合来桥接大鼠的坐骨神经１．０ｃｍ的缺损。用雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠进行的四组实验结果表明：冻干处理的异体神经可降低其抗原性,但处理后并不损害雪旺氏细胞（ＳＣ）基底膜的完整性,在移植后可能成为轴突再生的通道和支架;外源性ＮＧＦ与冻干神经结合形成的复合体,可为神经的再生提供一个较好的微环境,具有成为理想桥接材料的可能性     

Three Distinct Types of Monoclonal Antibodies After Long-Term Immunization of Rats with Mouse Nerve Growth Factor

This article reports the results of a systematic investigation of the different types of antibodies produced in the course of a long-term immunization of rats with mouse nerve growth factor (NGF). We have characterized three types of monoclonal antibodies, namely: (1) antibodies that bind to NGF and inhibit its binding to target cells and its biological activity in culture (type A); (2) antibodies that bind to and precipitate NGF but do not inhibit its binding to target cells or its biological activity (type B); (3) antibodies that fail to recognize NGF itself, but inhibit nonetheless its binding to target cells (type C). These antibodies bind to an antigen present on NGF target cells and not on rat fibroblasts lacking NGF receptor. They appear thus to be antiidiotypic antibodies directed against the NGF receptor, developed as a consequence of the long-term immunization with NGF.     

鼠神经生长因子对电烧伤患者神经修复的作用及其机制研究

目的:探讨鼠神经生长因子对电烧伤患者神经修复的作用及其机制。方法:选取2013年2月至2014年11月期间我院确诊治疗的四肢电烧伤患者128例,依据随机分配原则分为对照组和神经组,对照组患者给予常规皮瓣修复术治疗,神经组患者在此基础上给予鼠神经生长因子治疗,且依据给药方式分为全身亚组和局部亚组。统计分析所有患者创面愈合时间、感染和出血发生情况,采用BMRC感觉、运动功能评级法评估患者感觉、运动功能恢复情况,应用Spearman分析法分析二者之间的关系。结果:神经组患者创面愈合时间、感染和出血发生率明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);局部亚组患者感觉功能优良率为90.63%,全身亚组为84.38%,对照组为71.88%,局部亚组全身亚组对照组,差异有统计学意义(P0.05);局部亚组患者运动功能优良率为93.75%,全身亚组为84.38%,对照组为76.56%,局部亚组全身亚组对照组,差异有统计学意义(P0.05);Spearman分析法结果显示,感觉功能与运动功能呈正相关(r=0.812,P0.05)。结论:鼠神经生长因子可有效提高电烧伤患者神经修复的作用,有利于改善患者术后创面愈合、感染、出血情况,促进患者感觉、运动功能恢复,且通过局部给药方式具有更为良好的神经修复作用,值得临床作进一步推广。     

A Highly Sensitive Enzyme Immunoassay for Mouse β Nerve Growth Factor

Abstract: A sensitive two-site enzyme immunoassay system for mouse β nerve growth factor (NGF) was developed, based on the sandwiching of the antigen between anti-mouse β NGF antibody IgG coated to a polystyrene tube and anti-mouse β NGF antibody Fab'-linked β- d -galactosidase (β- d -galactoside hydrolase, EC 3.2.1.23). This method has the following advantages: (a) the procedures are simple and rapid compared to bioassay or two-site radioimmunoassay; (b) antibody Fab'-β- d -galactosidase complex is more stable than ¹²⁵I-labeled antibody; (c) purified β NGF is detectable at a concentration as low as 10 pg/ml. Our enzyme immunoassay was used to examine the levels of NGF in some tissues of mice. The submaxillary gland contained a high concentration of NGF. However, other tissues, such as the heart, brain, and skeletal muscle, and serum did not contain detectable NGF. These results support recent findings by other investigators that NGF was not found in the organs/tissues other than the submaxillary gland of mice.     

神经生长因子启动哮喘神经-内分泌-免疫网络功能失衡

神经生长因子是一种对神经生长、分化起到营养作用的肽类,其在哮喘发病过程中被认为是连接神经-内分泌-免疫网络的桥梁,作用机制可能如下:a.神经生长因子引起气道神经解剖结构和功能变化,促进气道神经末梢合成和释放递质,有助于气道重构的形成;b.神经生长因子能够增强变应原特异性IgE抗体的表达,促进肥大细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等在气道聚集,诱导其释放炎症介质,改变免疫应答平衡状态;c.神经生长因子可能启动肾上腺髓质细胞冗余性,使其向神经细胞转变,导致髓质细胞内分泌功能削弱,使肾上腺素合成、释放和再摄取功能障碍,最终导致循环中肾上腺素达不到维持气道舒张状态所需水平.     

神经生长因子在不同周龄小鼠睾丸组织中的表达

目的研究神经生长因子在小鼠不同周龄睾丸组织中的定量和定位表达。方法分别剖取不同周龄雄性小鼠的睾丸组织,部分提取总RNA,real-time PCR相对定量分析神经生长因子mRNA的表达量;另外部分组织固定、包埋,进行SABC法免疫组化分析,以观察神经生长因子蛋白在各周睾丸组织中的定位。结果Real-timePCR定量分析表明:小鼠生后1周龄睾丸组织有神经生长因子mRNA的表达,生后3周龄表达量达峰值,5周之后随鼠龄的增加呈下降趋势,成年小鼠睾丸组织的神经生长因子mRNA表达维持在一定水平。免疫组化定位分析显示:睾丸组织的神经生长因子蛋白表达于小鼠出生后的各个时期内,1周龄睾丸组织免疫阳性反应主要位于支持细胞,精原细胞也有着色;3周龄睾丸组织的间质细胞、各级生精细胞、支持细胞、管周肌样细胞表达均呈现阳性;5周后的睾丸组织内神经生长因子呈低水平表达,主要表达于间质细胞和生精细胞内。结论神经生长因子mRNA的表达量随着小鼠睾丸的生长发育期存在着一定的规律性变化;神经生长因子蛋白的表达在小鼠睾丸生长发育的不同时期其主要表达部位不同。     

天麻素耳迷根穴位注射联合注射用鼠神经生长因子治疗耳鸣的疗效研究

目的:研究天麻素耳迷根穴位注射联合注射用鼠神经生长因子治疗耳鸣的临床效果及对患者血液流变学和临床症状体征的影响。方法:选择2017年2月～2018年2月我院收治的156例耳鸣患者,随机分为两组。对照组肌肉注射鼠神经生长因子,每次20μg,每天1次;观察组联合耳迷根穴位注射天麻素,每次2 m L,每天1次。两组均治疗4周后,比较两组的治疗有效率,治疗前后的血液流变学指标以及耳鸣对睡眠的影响、发生环境、持续时间、对情绪的影响、对生活和工作的影响以及患者的主观感觉等临床症状体征评分。结果:治疗后,观察组的治疗有效率为89.74%,显高于对照组(71.79%,P0.05)。两组治疗后的全血黏度低切、血细胞比容、全血黏度高切及血浆黏度均较治疗前显著降低,且观察组以上指标均显著低于对照组(P0.05)。两组治疗后耳鸣对睡眠的影响、发生环境、持续时间、对情绪的影响、对生活和工作的影响以及患者的主观感觉等临床症状体征评分均较治疗前明显降低,且观察组以上指标均显著低于对照组(P0.05)。结论:天麻素耳迷根穴位注射联合注射用鼠神经生长因子可以提高耳鸣患者的治疗效果,有效改善患者的血液流变学和临床症状。     

Single-Step Purification and Biological Activity of Human Nerve Growth Factor Produced from Insect Cells

Human nerve growth factor (NGF) was cloned and engineered for expression in a baculovirus-infected Spodoptera frugiperda (SF-9) insect cell system. Culture supernatants contained 2-3 mg/L of recombinant human NGF. The human NGF produced by this system was purified to apparent homogeneity with a single-step affinity chromatography procedure using a high-affinity monoclonal antibody originally raised against murine NGF. The purification procedure yielded 1-2 mg of pure, human NGF per liter of culture supernatant; i.e., approximately 60% recovery of the human NGF originally released into the culture medium. Although the gene transfected into the SF-9 cells coded for pro-NGF, the NGF recovered after purification was greater than 95% fully processed, mature protein. The KD for the affinity of the pure, recombinant human NGF for NGF receptor in PC12 membranes is 0.20 +/- 0.05 nM. Activation of neurite outgrowth in PC12 cells occurs with ED50 values of 85 +/- 20 pM and 9.6 +/- 1.5 pM for a 3-day primary response and a 1-day secondary response, respectively. The pure, recombinant human NGF also stimulates a significant increase in dopamine content of PC12 cells with an ED50 of 5.8 +/- 2.7 pM. These binding and biological activation properties are consistent with values observed using murine NGF purified from submaxillary glands.     

神经生长因子介导的促神经生长化合物筛选系统的建立

为了合理评价化合物的促神经再生活性.用溴化四唑蓝(MTT)、分化计数、图象处理等方法，借助FK506、GPI1046阳性化合物，建立了一个基于PC12细胞存活和分化的化合物筛选系统.结果表明，无论在细胞存活实验还是在分化实验中，FK506、GPI1046都可以明显增强神经生长因子(NGF)的效应，即有促神经再生的作用.也就是说，这一系统将有助于从组合化学方法合成的化合物文库中，筛选出具有促神经再生活性的化合物.