嗜酸乳杆菌LB10.16及枯草芽孢杆菌BS7.29安全性评价

目的:评价枯草芽孢杆菌BS7.29和嗜酸乳杆菌LB10.16的安全性,为其应用研究提供技术支持。方法:本文通过对小鼠灌服、急性攻毒、腹腔注射、小鼠最大耐受剂量、急性攻毒等试验方法进行枯草芽孢杆菌BS7.29和嗜酸乳杆菌LB10.16的安全性研究。结果:1×108cfu/kg.bw的LB10.16和5×108cfu/kg.bw的BS7.29能够明显提高肠道推动力,改善小鼠肠道蠕动性。结论:两个菌种急性攻毒试验结果表明属于无毒物质,安全性比较高。     

嗜酸乳杆菌LA-G80的毒理学研究

目的对嗜酸乳杆菌的毒性进行研究。方法采用大、小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验和大鼠30 d喂养等对嗜酸乳杆菌进行安全性试验研究。结果急性经口毒性试验表明,大、小鼠灌胃给予嗜酸乳杆菌,最大耐受剂量雌雄两性别均大于20.0 g/kg体重,Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性。大鼠30 d喂养试验结果表明各项指标均未见明显毒性反应。结论在本次实验条件下,嗜酸乳杆菌未见遗传毒性。由此可初步判定,使用嗜酸乳杆菌是安全可靠的。     

微生物制剂对奥尼罗非鱼生长及消化酶活性的影响

选用192尾初始体重(34.500.25) g的健康奥尼罗非鱼(Oreochromis niloticusO. aureu), 研究在基础饲料中分别添加相同剂量(活菌含量为3.01011 cfu/kg饲料)的汉逊德巴利酵母、枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌对奥尼罗非鱼生长及消化酶活性的影响, 试验期56d。试验结果表明, 与对照组相比, 添加枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌, 奥尼罗非鱼的增重率分别提高12.27%和8.56%(P0.05), 饵料系数分别降低10.92%和8.18%(P0.05)。饲料干物质表观消化率分别提高10.54%和10.07%(P0.05), 蛋白质表观消化率分别提高4.18%和3.63%(P0.05)。添加枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌组, 奥尼罗非鱼肠道、肝胰脏和胃蛋白酶活性显著高于对照组和汉逊德巴利酵母组(P 0.05), 而添加三种微生物制剂对奥尼罗非鱼肠道、肝胰脏和胃的淀粉酶和脂肪酶没有显著影响(P0.05)。结果显示, 三种微生物制剂相互比较, 饲料中添加剂量为3.01011 cfu/kg饲料的枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌能显著提高肠道、肝胰脏和胃的蛋白酶活性, 满足最佳生长。       

益生芽孢杆菌对草鱼肠黏膜结构的保护作用

为了研究益生菌对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道黏膜结构的保护作用, 选取健康草鱼随机分成3组: ①对照组: 口灌无菌PBS 0.2 mL/尾后第2和第4天分别口灌无菌PBS 0.1 mL/尾; ②嗜水气单胞菌组(Ah组): 口灌嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)菌液0.2 mL/尾(1.0×107 cfu/mL)后第2和第4天分别口灌无菌PBS 0.1 mL/尾; ③枯草芽孢杆菌保护组(Ah+Bs组): 口灌嗜水气单胞菌菌液0.2 mL/尾后第2和第4天分别口灌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌液0.1 mL/尾(1.0×107 cfu/mL); 连续7d取中肠中部, 通过检测草鱼肠黏膜形态及肠上皮细胞微丝骨架的变化, 旨在研究益生枯草芽孢杆菌对嗜水气单胞菌造成的肠黏膜结构损伤的保护作用。结果表明: Ah组病变主要表现为肠道黏膜上皮细胞变性, 坏死, 大量脱落; 固有层出血、水肿变粗; 大量炎性细胞浸润; 超微结构变化表现为紧密连接缝隙明显变宽; 微绒毛萎缩变短, 稀疏, 排列紊乱; 线粒体可见明显肿胀、嵴减少, 内质网明显扩张; 肠上皮细胞中的微丝呈绿色雾状, 微丝荧光强度逐渐减弱, 明显低于对照组。与Ah组相比, Ah+Bs组上述病变有明显改善, 肠道黏膜上皮细胞轻微脱落, 炎症和出血等症状明显减轻; 紧密连接缝隙明显变窄; 微绒毛数量多且排列较整齐; 线粒体无明显肿胀; 肠上皮细胞中的微丝荧光强度高于Ah组。结果说明益生芽孢杆菌对嗜水气单胞菌造成的肠黏膜结构损伤有一定的保护作用。     

枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及质粒转化方法研究

为便于枯草芽孢杆菌工业化生产应用,对Spizizen创立的枯草芽孢杆菌DNA转化方法进行改进.用GMI和GMII溶液处理枯草芽孢杆菌野生型菌株BS501a、营养缺陷型突变株DBl342和非营养缺陷型突变株WB800,用改进的方法制备感受态细胞,用7.5kb质粒pSBPTQ进行转化,并研究RNA、酵母粉、水解酪蛋白、培养方法对枯草芽孢杆菌质粒转化的影响.结果表明,该方法适用于不同基因型枯草芽孢杆菌的质粒转化,营养缺陷型突变株DBl342的转化率为750 CFU/μg/DNA,非营养缺陷型突变株WB800转化率为1 070 CFU/xg DNA,野生型菌株BS501a转化率为270 CFU/μg/DNA.根据影响转化效率的因素,推测在该方法中,枯草芽孢杆菌质粒转化原理:一定生物量的枯草芽孢杆菌在外界营养条件和钙、镁离子作用下,细胞壁和细胞膜形成缺陷,使外源DNA转入枯草芽孢杆菌细胞内.     

枯草芽孢杆菌活菌体外拮抗6种肠道致病菌的研究

对枯草芽孢杆菌BS 3株在体外对 6种常见肠道致病菌 (肠产毒性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、福氏志贺菌和宋内志贺菌 )的拮抗作用进行了研究。结果表明 ,枯草芽孢杆菌BS 3株对宋内志贺菌、肠致病性大肠杆菌及肠产毒性大肠杆菌拮抗作用较为明显。     

嗜酸乳杆菌在模拟胃肠环境中抗性的研究

采用MRS培养基,模拟胃肠环境,即低pH值（1.5～4.5）。高胆汁盐（0.1％～0.4％）对嗜酸乳杆菌抗性进行了研究。同时对肠道中致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的拮抗特性以及服用抗生素后嗜酸乳杆菌的耐药性进行了研究。结果表明,嗜酸乳杆菌在pH2.5～4.5时具有较强的生存能力,6h活菌数仍达 10⁷cfu/mL以上,pH1.5条件下仍有部分存活。在0.1％～0.3％胆汁盐条件下4h活菌数仍达106cfu/mL以上,且能在0.4％胆汁盐中存活。同时,对致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具     

嗜酸乳杆菌LA85对小鼠免疫机能的研究

目的：研究嗜酸乳杆菌LA85对小鼠免疫机能的影响。方法：将160只雄性小鼠随机分为4组,即对照组、低、中、高三个剂量组。采用灌胃的方式给予实验小鼠不同剂量的嗜酸乳杆菌LA85。通过对小鼠平均体重、脾脏和胸腺免疫指数、细胞免疫、体液免疫、单核-吞噬性细胞和自然杀伤细胞（NK细胞）活性的评价,探讨嗜酸乳杆菌LA85对小鼠免疫机能的影响机制。结果：与对照组相比,嗜酸乳杆菌LA85低、中、高剂量组能够显著提升小鼠的胸腺指数,嗜酸乳杆菌LA85高剂量组能够显著提升小鼠的脾脏指数。同时能够显著提高小鼠的淋巴细胞增殖分化能力、半数溶血值、巨噬细胞的吞噬能力、NK细胞的细胞活性;嗜酸乳杆菌对小鼠的体重没有影响。结论：给予小鼠口服嗜酸乳杆菌LA85可以通过改善细胞免疫和体液免疫功能,从而提高免疫力。     

嗜酸乳杆菌抑菌特性的研究

目的：对从婴儿肠道中分离出来的两株嗜酸乳杆菌的抑菌特性进行研究。方法：采用MRS培养基。结果：嗜酸乳杆菌对致病性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌以及炭疽杆菌有明显的抑菌作用。37℃培养24h抑菌圈大小均在15mm以上。结论：该菌是肠道中的益生菌。     

嗜酸乳杆菌对斜带石斑鱼幼鱼生长、消化性能和抗病力的影响

研究嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus, GIM:1.730)对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)幼鱼生长、消化酶活性、抗病力和相关酶mRNA表达的影响。选取720尾初始均重为(5.60±0.05) g的斜带石斑鱼幼鱼为研究对象, 共设8个处理, 每个处理3个重复。投喂不同添加比例(0、0.1%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%和1.2%)嗜酸乳杆菌的饲料, 养殖期8周。结果表明: 增重率(Weight gain rate, WGR)与特定生长率(Specific growth rate, SGR)实验组均显著高于对照组(P<0.05)。当嗜酸乳杆菌添加0.6%时, 饲料系数(Feed conversion ratio, FCR）最低, 其他各组显著低于对照组(P<0.05), 而蛋白质效率(Protein efficiency ratio, PER)变化规律则与FCR相反。肝脏和肠蛋白酶(Trypsin, TRY)、淀粉酶(Amylase, AMY)活性实验组均显著高于对照组(P<0.05)。肝脏TRY、AMY mRNA表达, 实验组均显著高于对照组(P<0.05)。其中, 肝脏淀粉酶、蛋白酶活性在添加量为0.6%达到最大值, 肠蛋白酶、淀粉酶活性分别在添加量0.2%和0.4%达到最大值。以哈维弧菌(Vibrio harveyi)攻毒7d, 石斑鱼攻毒后成活率(Survival rate, SR)随着嗜酸乳杆菌添加量的增加显著升高(P<0.05)。以WGR为判断依据得出, 在饲料中添加0.42%嗜酸乳杆菌(0.72×108 cfu/g)可显著促进斜带石斑鱼幼鱼的生长, 并提高消化酶活性和抗病力。     

嗜酸乳杆菌胞壁粗提物及DNA对实验性结肠炎结肠上皮NF-κB表达的影响

目的：研究嗜酸乳杆菌BCW和DNA对溃疡性结肠炎小鼠结肠粘膜上皮NF-κB表达的影响。方法：雌性BABL/c小鼠40只随机分为正常组、嗜酸乳杆菌BCW组、嗜酸乳杆菌DNA组和生理盐水对照组,除正常组小鼠外,其余各组自由饮用1.5%DSS7天建立小鼠结肠炎模型,随即给予嗜酸乳杆菌BCW（20ug/10g）、嗜酸乳杆菌DNA（0.2ug/10g）和生理盐水灌肠7天,每天观察小鼠情况,实验结束时处死小鼠,去结肠组织行HE染色观测结肠炎症情况,并行结肠上皮NF-κB免疫组化。结果：饮用DSS小鼠DAI积分显著增高,结肠组织粘膜破坏、炎症细胞浸润,结肠上皮NF-κB表达增加（9.15±0.43）,嗜酸乳杆菌BCW和DNA能降低小鼠DAI积分,减轻粘膜损伤,降低结肠上皮NF-κB的表达（4.67±0.56/6.03±0.60）。结论：嗜酸乳杆菌BCW和DNA能缓解急性溃疡性结肠炎,降低结肠上皮NF-κB的表达。     

嗜酸乳杆菌及其制剂对大鼠血脂代谢的影响

本实验表明,口服嗜酸乳杆茵及其制剂,能升高大鼠ADL—C和HDL—C/T比值及降低[VLDL LDL]—C的浓度。这一作用对于防止动粥发生显然是十分有利的。若将嗜酸乳杆菌及其制剂,与其它降血脂药物配伍,用于高血脂症的辅助治疗,将会产生良好的效果。     

单方中药马蹄香散剂和几种微生态制剂中氨基酸和微量元素含量的测定和比较

目的 测定马蹄香和微生态制剂中氨基酸和微量元素的含量,深入认识马蹄香和微生态制剂的特点.方法 应用国家标准GB/T 5009.124-2003高效液相法和应用日本岛津公司ICPS-1000Ⅱ型等离子体发射光谱仪测定马蹄香和微生态制剂中氨基酸和微量元素含量.结果 氨基酸含量在乳酸菌素片＞亿活＞马蹄香＞金双歧＞贝飞达＞思连康＞合生原＞妈咪爱.谷氨酸在所有制剂中含量均高,天冬氨酸在多数制剂中含量也高.而胱氨酸在所有制剂中含量均低或未能测出.元素钙、磷、镁和硫含量在马蹄香＞乳酸菌素片＞亿活＞思连康＞金双歧＞妈咪爱＞贝飞达＞合生原.马蹄香中微量元素含量较丰富.结论 马蹄香和不同的微生态制剂所含的氨基酸和微量元素各有特点,这对不同制剂的微量营养素的认识有特殊意义.     

苯肼致小鼠溶血性贫血模型的建立

目的:应用苯肼致小鼠发生溶血性贫血,建立急性溶血性贫血模型,筛选苯肼致小鼠贫血最佳浓度和红细胞移植的最佳时机。方法:30只C57BL/6小鼠随机分为6组,经腹腔注射不同浓度的苯肼溶液,于注射前和注射后第1、3、5、7、9天采集小鼠外周血进行检测,记录相关指标的变化,比较各组之间的差异,筛选出最佳溶血效果的给药浓度和红细胞移植治疗介入的时机。结果:注射苯肼溶液可使C57BL/6小鼠短期内产生明显的急性溶血性贫血症状,皮肤黏膜颜色苍白;外周血红细胞数量、血红蛋白含量、红细胞压积降低;随着苯肼溶液浓度的增加,小鼠体重显著减轻,存活率下降。结果表明,苯肼注射小鼠致贫血的最佳作用浓度为1.2mg/10g体重,小鼠贫血状态可维持7d。结论:建立了小鼠溶血性贫血模型,此模型可应用于红细胞输注效果的评价。     

A型产气荚膜梭菌经小鼠传代的毒力变化

目的:探讨A型产气荚膜梭菌经小鼠腹腔传代后的毒力变化。方法:选择10只小鼠,腹腔注射浓度为5.0×108 cfu/mL的A型产气荚膜梭菌菌液1 mL,记录第一代小鼠存活时间;收集第一代死亡最早的小鼠腹腔内的细菌,经血平板厌氧培养24 h后配制5.0×108 cfu/mL浓度的菌液,并腹腔注射10只小鼠,每只1 mL,记录第二代小鼠存活时间;重复实验并记录第三代、第四代小鼠的存活时间;死亡小鼠腹腔收集的细菌以革兰染色涂片镜检,血平板培养,用API 20A试剂条进行生化鉴定;用SPSS 13.0软件分析每代小鼠的存活时间组间差异。结果:小鼠腹腔收集的标本经革兰染色后均可见两端钝圆棒状的革兰阳性杆菌,血平板厌氧培养均为边缘呈锯齿状有双溶血环的较大菌落,API 20A的结果为产气荚膜梭菌;小鼠存活时间随小鼠腹腔传代数不断延长,第一代与第二代、第三代、第四代之间的存活时间差异有统计学意义,第二代、第三代与第四代两两之间的存活时间差异无统计学差异。结论:A型产气荚膜梭菌经小鼠腹腔第一次传代后毒力显著减弱,随后传代中毒力基本不变,与传统的细菌经动物腹腔培养后毒力增强的观点不一致。     

生物腐植酸菌剂用做功能性饲料营养添加剂价值初探

目的以生物腐植酸菌剂（BFA）对哺乳动物（SD大鼠）的生理生化、肠道菌群等指标的影响为评价指标,初步探讨BFA用做功能性饲料营养添加剂的价值。方法将四种生物腐植酸菌剂（分别为乳酸菌发酵BFA、芽胞菌发酵BFA、酵母菌发酵BFA以及三菌混合发酵BFA）均按1.5%的比例与常规饲料混合,并以未加入BFA的常规饲料为对照组,分组饲喂啮齿类哺乳动物—SD大鼠,观察实验组和对照组血常规、血生化指标、增重、料重比以及肠道菌群定量分析等指标的差异。结果①血常规：乳酸菌发酵组的白细胞（WBC）、单核细胞（Mon）、中性粒细胞（Neu）较对照组降低,差异有显著性（P〈0.05,P〈0.01）;芽孢菌发酵组中性粒细胞（Neu）较对照组降低,差异有显著性（P〈0.05）。②血生化：乳酸菌发酵组的总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、白/球比值（A/G）较对照组升高,差异有显著性（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.05）,总胆红素（TBIL）较对照组降低,差异有显著性（P〈0.05）;芽孢菌发酵组总胆红素（TBIL）较对照组降低,差异有显著性（P〈0.01）。③增重：混合发酵组的总增重和日增重均显著高于对照组（P〈0.05）;乳酸菌发酵组、芽孢菌发酵组、酵母菌发酵组、混合组、对照组饲料增重比分别为：6.70、6.74、6.49、6.09、6.77。④菌群分析：乳酸菌发酵组和混合发酵组的大肠杆菌数量较对照组降低,差异有显著性（P〈0.05）,同时乳酸杆菌数量较对照组显著升高（P〈0.05）。结论各组BFA制剂均对SD大鼠的生理生化、增重、肠道菌群指标有积极的影响,其中以三菌混合发酵BFA效果最佳,具有作为功能性饲料营养添加剂、改善哺乳动物健康的价值。     

Competitive exclusion of diarrheagenic Escherichia coli (ETEC) from human enterocyte-like Caco-2 cells by heat-killed Lactobacillus

Diarrheagenic Escherichia coli (ETEC) bearing CFA/I or CFA/II adhesive factors specifically adhere onto the brush border of the polarized epithelial human intestinal Caco-2 cells in culture. Heat-killed Lactobacillus acidophilus strain LB, that adheres onto Caco-2 cells, inhibits diarrheagenic Escherichia coli adhesion in a concentration-dependent manner. Since the L. acidophilus does not express ETEC-CFA adhesive factors, it can be postulated that the heat-killed L. acidophilus LB cells inhibit diarrheagenic E. coli attachment by steric hindrance of the human enterocytic ETEC receptors.     

Preventing non-alcoholic fatty liver disease through Lactobacillus johnsonii BS15 by attenuating inflammation and mitochondrial injury and improving gut environment in obese mice

The increasing prevalence of obesity worldwide is associated with a parallel increase in non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). To investigate the effect of Lactobacillus johnsonii BS15 on NAFLD, 120 male ICR mice were randomly divided into four groups and administrated with BS15 (2?×?10⁷ cfu/0.2 mL or 2?×?10⁸ cfu/0.2 mL) or phosphate buffered saline (PBS) throughout a 17-week experimental period. The mice were fed with normal chow diet (NCD) 5 weeks before the experimental period. Afterward, with the exception of the PBS group, NCD was changed into high-fat diet (HFD) for the remaining experimental period. Results showed that BS15-treated HFD mice were protected from hepatic steatosis and hepatocyte apoptosis. BS15 exhibited a positive effect on liver lipid peroxidation through an anti-oxidative stress activity by enhancing the liver antioxidant defense system. In addition, BS15 inhibited the insulin resistance; decreased the mRNA levels of acetyl–CoA carboxylase 1, fatty acid synthase, and peroxisome proliferator-activated receptor γ; and increased the expression of the fasting-induced adipose factor in livers. Meanwhile, BS15 attenuated mitochondria abnormalities when the content of uncoupling protein-2 decreased and cytochrome c increased in NAFLD mice. BS15 also reduced the level of serum lipopolysaccharide in NAFLD mice by lowering the intestinal permeability and adjusting gut flora, followed by the downregulation of the TNFα mRNA level in liver and the serum level of C-reactive protein. These findings suggest that BS15 may be effective in preventing NAFLD induced by HFD.     

利用响应面分析方法优化生防细菌B579增殖培养基

采用响应面法(Response Surface Methodology,RSM)对影响生防细菌B579生长的黄豆饼粉、玉米粉、牛肉膏3个主要因子的最佳水平及其交互作用进行了研究与探讨。结果表明黄豆饼粉、玉米粉、牛肉膏分别在30.2、31和23.5g/L的条件下,可使B579获得最大菌体量。验证试验证实了该方程的预测值与实际值之间吻合较好。优化后的培养基使菌体量从起始LB培养基的8×109cfu/mL提高到8×1011cfu/mL。